胡連杰，曹 錦，馬雪芹，姜志龍，蔡 飛，張又枝**

(1.湖北科技學(xué)院藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2.湖北科技學(xué)院糖尿病和血管病變湖北省重點(diǎn)實驗室)

現(xiàn)如今，腫瘤發(fā)病率日益增加，化療是其重要的治療手段之一，但化療藥物的副作用日益呈現(xiàn)。阿霉素(多柔比星，doxoburicin)是一類蒽環(huán)類化療藥物，廣泛用于治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤和幾種實體瘤(包括淋巴瘤、白血病和乳腺癌)[1]，然而，阿霉素的臨床應(yīng)用有限，因為累積劑量的阿霉素會引起嚴(yán)重的心臟毒性，從而導(dǎo)致不可逆的心臟損傷，如心力衰竭和左心室功能障礙等[2]。

京尼平苷是梔子和杜仲的主要活性成分，是一種環(huán)烯醚萜類化合物。研究表明京尼平苷具有抗炎、抗動脈粥樣硬化[3]和抗糖尿病[4]等作用。也有研究表明京尼平苷對心肌細(xì)胞的缺氧損傷有保護(hù)作用[5]，在心臟疾病如高脂引起的心肌損傷[5]和缺血再灌[6]中也進(jìn)行了驗證。但其對阿霉素引起的心臟毒性是否有保護(hù)作用？我們用累積劑量的阿霉素建立心臟的毒性模型后，再給予小劑量和大劑量的京尼平苷，研究其對阿霉素所致心臟毒性的保護(hù)作用。為京尼平苷減輕化療藥物阿霉素心臟毒性的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)實驗的依據(jù)。

1 實驗材料及方法

1.1 實驗試劑

生理鹽水(武漢福星生物藥業(yè)有限公司，500mL∶4.5g，國藥準(zhǔn)字：H42022223)；鹽酸阿霉素(阿拉丁，1g，D107159)；京尼平苷(阿拉丁，5g，G119296)；乳酸脫氫酶(lcctate dehydrogenase，LDH；A020-2，單位：U/mL)、肌酸激酶(creatine kinase，CK;A032，單位：U/L)試劑盒均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。

1.2 動物分組及處理

雄性健康昆明種小鼠61只(18～22 g)，分為4組，正常對照組11只，阿霉素模型組20只，阿霉素+京尼平苷小劑量組15只，阿霉素+京尼平苷大劑量組15只。具體分組和給藥途徑如下：

①正常對照組:每天腹腔注射生理鹽水10mL/kg，共28次；②阿霉素模型組: 腹腔注射阿霉素2mg/kg，隔天一次，共10次；③阿霉素+京尼平苷小劑量組(50mg/kg)：先每天灌胃京尼平苷50mg/kg，連續(xù)一周，再腹腔注射阿霉素2mg/kg，阿霉素隔天給藥共10次，同時每天灌胃京尼平苷50mg/kg；④阿霉素+京尼平苷大劑量組(100mg/kg)；先每天灌胃京尼平苷100mg/kg連續(xù)一周，再腹腔注射阿霉素2mg/kg，阿霉素隔天給藥共10次，同時每天灌胃京尼平苷50mg/kg。

1.3 觀察指標(biāo)

相應(yīng)時間點(diǎn)取出心臟稱重，計算心臟質(zhì)量/體質(zhì)量比(HW/BW)。收集血液取上清檢測CK和LDH生化指標(biāo)。采用蘇木素-伊紅(HE)染色法檢測心肌組織結(jié)構(gòu)變化。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠一般情況與存活率

正常對照組小鼠精神狀態(tài)良好，進(jìn)食情況與體質(zhì)量增長情況均正常；阿霉素模型組體重明顯下降，出現(xiàn)精神萎靡不振、輕微腹瀉等狀況，于給藥7次后出現(xiàn)死亡情況；京尼平苷小劑量與大劑量小鼠體重均有所增加，京尼平苷大劑量增加較為明顯，京尼平苷小劑量與大劑量均有輕微腹瀉的狀況，小劑量組出現(xiàn)胸腔淤血，大劑量組胸腔有積液。見表1。

表1 各組小鼠存活率

與正常對照組比較，*P<0.01

2.2 各組小鼠HW/BW比較

由表2得知，與正常對照組比較，阿霉素組心臟質(zhì)量和體質(zhì)量都下降，但是HW/BW比卻升高，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與阿霉素組比較，京尼平苷小劑量和大劑量組心臟質(zhì)量變化不大，但體質(zhì)量卻增加較多，因而HW/BW比都有所降低，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組小鼠HW/BW變化比較

與正常對照組比較，*P<0.05;與阿霉素模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

2.3 各組小鼠血清CK和LDH生化指標(biāo)比較

各組小鼠取適量血清，檢測CK 和LDH。表3表明，與正常對照組相比較，阿霉素組的CK和LDH含量都增加。與阿霉素組相比較，給予小劑量的京尼平苷后CK和LDH值略有下降，但都無統(tǒng)計學(xué)差異，而給予大劑量的京尼平苷后，CK和LDH值都減少，且有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。

表3 各組小鼠血清CK和LDH活性變化

與正常對照組比較，*P<0.05；與阿霉素模型組比較，#P<0.05

2.4 心肌形態(tài)學(xué)HE染色結(jié)果

HE染色后，在光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)：正常對照組心肌結(jié)構(gòu)完整，無心肌纖維斷裂、破壞，間隙比例正常，細(xì)胞質(zhì)均勻，核清晰可見；而阿霉素模型組心肌結(jié)構(gòu)紊亂，肌纖維部分?jǐn)嗔?，間隙變大，心肌細(xì)胞壞死，有炎癥細(xì)胞浸潤；給予京尼平苷小劑量組后，心肌結(jié)構(gòu)有所改善，間隙縮小。京尼平苷大劑量組改善作用更加明顯，肌纖維排列致密，少見心肌細(xì)胞壞死或炎癥細(xì)胞浸潤等現(xiàn)象。見圖1(封二)。

3 討 論

阿霉素對線粒體內(nèi)膜中心磷脂的結(jié)合具有高親和力[7]，因此，心臟易受阿霉素相關(guān)損傷，因為它含有比其他器官更多的線粒體和更少的抗氧化酶。阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性機(jī)制是多因素的[8]，它主要與活性氧(ROS)的產(chǎn)生、心肌細(xì)胞的凋亡、線粒體損傷、心臟能量代謝的損害和腺苷—磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)信號傳導(dǎo)途徑的缺陷有關(guān)[9-10]。本文首先通過HW/BW比發(fā)現(xiàn)阿霉素組比正常對照組高，進(jìn)一步測定血清中LDH的水平，發(fā)現(xiàn)阿霉素組LDH的釋放增多，為進(jìn)一步證明LDH的釋放是心臟損傷而不是其他器官受損而釋放出的，我們繼續(xù)檢測了心臟譜酶中的肌酸激酶CK，發(fā)現(xiàn)阿霉素組CK含量升高，這些都從常見的生化指標(biāo)中反映心臟已經(jīng)發(fā)生損傷性改變。京尼平苷有抗炎作用，對缺血的心肌也有保護(hù)作用[4]。我們的研究也表明預(yù)先給予大劑量的京尼平苷不僅對心臟的體質(zhì)比HW/BW有影響，也對LDH和CK的釋放量有抑制作用。但是，小劑量的京尼平苷僅對體質(zhì)比HW/BW有影響，對LDH和CK的釋放沒有減少作用。

阿霉素對心肌的損傷不僅表現(xiàn)在心臟體質(zhì)比或血清中生化指標(biāo)的改變，也會對心肌的組織結(jié)構(gòu)造成不可逆的損傷。我們的研究結(jié)果表明，給予阿霉素后，通過HE染色發(fā)現(xiàn)心肌纖維斷裂，間隙變大，心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡或有炎癥細(xì)胞的浸潤等改變。而預(yù)先給予小劑量的京尼平苷后，心肌結(jié)構(gòu)有輕微的改善；給予大劑量的京尼平苷，心肌結(jié)構(gòu)則明顯改善，心肌纖維排列致密，整齊。因此，京尼平苷能改善阿霉素所致心臟毒性的結(jié)構(gòu)改變。

因此，本研究發(fā)現(xiàn)京尼平苷改善阿霉素引起的心臟毒性，初步從血清生化和心臟組織形態(tài)學(xué)等方面去驗證。但京尼平苷對阿霉素所致心臟毒性的保護(hù)作用的機(jī)制有待深層次的探討，有望為減少阿霉素臨床應(yīng)用中所致心臟的不良反應(yīng)提供新的保護(hù)藥物。