袁新程，嚴(yán)銀龍，施永海

(上海市水產(chǎn)研究所，上海市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，上海 200433)

鹽度是影響水產(chǎn)動(dòng)物正常生活的重要理化因子之一[1]。研究表明，鹽度變化不僅對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育和肌肉營(yíng)養(yǎng)成分有重要影響[2-3]，而且對(duì)體內(nèi)消化酶及抗氧化酶活力也具有重要影響[4-5]。當(dāng)外界鹽度改變時(shí)，水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體代謝加速、耗氧率增大、對(duì)能量的需求量增加，正常生長(zhǎng)受到影響，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致其代謝功能的紊亂，甚至死亡。同時(shí)，鹽度的改變能刺激水產(chǎn)動(dòng)物產(chǎn)生較多有害的活性氧自由基，這些活性氧在機(jī)體中累積，造成體內(nèi)蛋白和脂質(zhì)的氧化損傷，長(zhǎng)期處于此條件下，會(huì)造成免疫防御能力和抗病力下降[6]。

褐菖鲉(Sebastiscusmarmoratus)，又名石狗公、虎頭魚(yú)、石頭鱸等，體色呈褐色或紅褐色，屬于鲉形目(Scorpaeniformes)鲉科(Scorpaenidae)菖鲉屬(Sebastiscus)[7]，主要分布于我國(guó)的東海南部和南海海域。褐菖鲉肉質(zhì)細(xì)嫩，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，是一種頗受歡迎的小型經(jīng)濟(jì)魚(yú)類，也是海洋牧場(chǎng)業(yè)、垂釣休閑旅游業(yè)的最佳品種之一，具有較大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近幾年國(guó)內(nèi)外圍繞褐菖鲉的相關(guān)研究有很多，主要集中在生長(zhǎng)特性和養(yǎng)殖技術(shù)[8-9]、代謝水平[10]以及生殖系統(tǒng)發(fā)育[11-12]等方面，但對(duì)其鹽度適應(yīng)性的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)通過(guò)分析不同鹽度條件下褐菖鲉幼魚(yú)生長(zhǎng)、存活、體成分和消化酶、抗氧化酶活力變化情況，探究不同鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)的影響，以期為褐菖鲉的養(yǎng)殖、育種及其生態(tài)學(xué)研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)用魚(yú)為上海市水產(chǎn)研究所奉賢科研基地經(jīng)人工繁育的褐菖鲉幼魚(yú)，體質(zhì)量為(3.65±0.82)g，體長(zhǎng)為(4.76±0.34)cm，共計(jì)280尾。飼料為鰻魚(yú)粉狀配合飼料，購(gòu)自江蘇常熟市泉興營(yíng)養(yǎng)添加劑有限公司，將其加工成軟顆粒狀，現(xiàn)做現(xiàn)投。

試驗(yàn)初始用水為自然海水(鹽度9—10)，穩(wěn)定3 d后按2.5d的速度進(jìn)行鹽度的調(diào)節(jié)，舟山海區(qū)的濃縮海水(波美度為 11—12 度)用來(lái)調(diào)高鹽度，當(dāng)?shù)睾铀?鹽度2.5)用來(lái)調(diào)低鹽度，鹽度測(cè)量采用30-10FT型鹽度計(jì)(精確至0.1)。

1.2 試驗(yàn)設(shè)置

2017年9月21日，于水泥養(yǎng)殖池放置3個(gè)網(wǎng)箱(1 000 mm×600 mm×400 mm)，每個(gè)網(wǎng)箱放養(yǎng)40尾幼魚(yú)，設(shè)7.5、10(對(duì)照)、15、20、25、30共6個(gè)鹽度梯度處理，每個(gè)處理3次重復(fù)。試驗(yàn)期間水溫為20—28℃，每天9：00及15：00各投食1次，采用拋投方式，觀察攝食情況，幼魚(yú)攝食不踴躍則停止投喂。試驗(yàn)期間連續(xù)充氣，每天吸污1次，每周換水1次，換水量為70%—80%，用于換水的海水預(yù)先配制，鹽度差小于0.5，溫差小于0.5℃，試驗(yàn)進(jìn)行8周。

1.3 樣品采集

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，停食1 d，統(tǒng)計(jì)幼魚(yú)的存活數(shù)，并從每個(gè)網(wǎng)箱中隨機(jī)取7尾幼魚(yú)擦干體表水份，測(cè)定其體質(zhì)量和體長(zhǎng)。在冰盤上對(duì)7尾幼魚(yú)進(jìn)行解剖，取出內(nèi)臟團(tuán)并迅速置于冰浴中的離心管中(5ml)，按照1∶3(WV)的比例加入4℃、0.86%的生理鹽水，研磨勻漿， 4℃、10 000 rmin離心10 min，取上清液保存于-80℃冰箱中。幼魚(yú)軀干存于-20℃冰箱中。

1.4 測(cè)定方法

利用冷凍干燥法(美國(guó) SIM FD5-3型冷凍干燥機(jī))測(cè)定水分含量，并將冷凍干燥好的樣品用CS-700型粉碎機(jī)打碎后分裝于密封袋中，保存于-20℃冰箱中待測(cè)；用KjeltecTM8400型凱氏定氮自動(dòng)分析儀(瑞典 FOSS)檢測(cè)其粗蛋白含量(GBT 6432—1994)；用氯仿-甲醇實(shí)驗(yàn)法測(cè)定其粗脂肪含量；運(yùn)用馬弗爐550℃灼燒法測(cè)定其粗灰分含量(GBT 5009.4—2003)；消化酶和抗氧化酶活性檢測(cè)均采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒進(jìn)行；組織總蛋白含量采用考馬司亮蘭法進(jìn)行檢測(cè)。

生長(zhǎng)指標(biāo)計(jì)算公式[13]為：體長(zhǎng)特定增長(zhǎng)率LGR=100%×(lnLT-lnL0)T

體質(zhì)量特定增長(zhǎng)率WGR=100%×(lnWT-lnW0)T

肥滿度CF =100%×WT(LT)3

存活率SR =100%×(NTN0)

式中：W0和L0為生長(zhǎng)試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)褐菖鲉幼魚(yú)體質(zhì)量(g)和體長(zhǎng)(cm)，WT和LT為生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的褐菖鲉幼魚(yú)體質(zhì)量(g)和體長(zhǎng)(cm)；T為養(yǎng)殖時(shí)間(d)；N0為生長(zhǎng)試驗(yàn)初始時(shí)褐菖鲉幼魚(yú)尾數(shù)，NT為生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)褐菖鲉幼魚(yú)存活尾數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用Excel 2007軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素One-way ANOVA方差分析及Duncan氏法均值的多重比較，所得結(jié)果以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)來(lái)表示，P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)生長(zhǎng)特性和存活率的影響

由表1可知，幼魚(yú)的體質(zhì)量特定增長(zhǎng)率在鹽度20時(shí)最大，與鹽度15、25、30時(shí)無(wú)顯著差異，均顯著大于7.5和10鹽度組(P<0.05)。幼魚(yú)的肥滿度范圍為3.15%—3.42%，鹽度25時(shí)最大，其他各組間均無(wú)顯著差異(P>0.05)。幼魚(yú)內(nèi)臟團(tuán)重和體長(zhǎng)特定增長(zhǎng)率除鹽度7.5組顯著小于其他各鹽度組外，其他各鹽度組間均無(wú)顯著差異(P>0.05)(表1)。幼魚(yú)在鹽度10、15、20時(shí)存活率較大，均在90%以上，均顯著大于7.5和30鹽度組(P<0.05)，與25鹽度組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表1 鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)生長(zhǎng)和存活的影響

注：同列中標(biāo)有不同小寫字母者表示組間有顯著性差異(P<0.05)，下同

2.2 鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)體成分的影響

在鹽度7.5—30范圍內(nèi)，褐菖鲉幼魚(yú)體中水分含量為67.20%—70.58%，25鹽度組顯著低于7.5、15、20和30鹽度組(P<0.05)(表2)。15鹽度組的幼魚(yú)體中灰分含量最低，其次為20鹽度組，均顯著低于25鹽度組(P<0.05)，而與其他組無(wú)顯著差異(表2)。各組幼魚(yú)的粗蛋白含量與鹽度呈二次函數(shù)關(guān)系，隨鹽度增大總體呈先升高后降低的變化趨勢(shì)，在鹽度23.05時(shí)達(dá)到理論最大值(圖2)；7.5鹽度組粗蛋白含量均顯著低于15—30組(P<0.05)，而與10鹽度組無(wú)顯著差異(P>0.05)(表2)。粗脂肪含量與鹽度呈二次函數(shù)關(guān)系，達(dá)到最大值時(shí)的理論鹽度為19.07(圖2)，15、20鹽度組均顯著大于7.5和30鹽度組(P<0.05)，而與10和25鹽度組無(wú)顯著差異(P>0.05)(表2)。

表2 鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)體成分的影響

2.3鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)消化酶和抗氧化酶的影響

幼魚(yú)淀粉酶和脂肪酶活力隨鹽度升高均呈先升后降再升的變化趨勢(shì)，且均在鹽度為30時(shí)達(dá)到最大，其中15鹽度組的淀粉酶活力最小(0.6 Umgprot)，顯著小于30鹽度組(P<0.05)，但與其他各組均無(wú)顯著差異(P>0.05)；而25鹽度組脂肪酶活力最小，為4.98 Umgprot，并與其他各組均無(wú)顯著差異(P>0.05)(表3)。胃蛋白酶和胰蛋白酶呈先降后升的變化趨勢(shì)， 25鹽度組最小，分別為1.93 Umgprot 和1.51×103Umgprot，在鹽度7.5時(shí)達(dá)到最大值，分別為3.26 Umgprot 和3.26×103Umgprot；25鹽度組的胃蛋白酶活力顯著小于7.5組(P<0.05)，與其他各組均無(wú)顯著差異(P>0.05)，而胰蛋白酶活性顯著小于7.5、10和15鹽度組，與其他組無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)體內(nèi)消化酶的影響

7.5、10、15鹽度組總超氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶活力較20、25、30組大，鹽度為15時(shí)顯著大于鹽度25時(shí)(P<0.05)，與其他各組無(wú)顯著差異(P>0.05)，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活力在各組間均無(wú)顯著差異(P>0.05)，15鹽度組的活力較高。

表4 鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)體內(nèi)抗氧化酶的影響

3 討論

3.1 鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)生長(zhǎng)性能和存活率的影響

鹽度是影響魚(yú)類生長(zhǎng)和存活的重要外部因子，當(dāng)魚(yú)類處在適宜鹽度條件時(shí)，其生長(zhǎng)速度和成活率均能夠達(dá)到最好狀態(tài)[14]。本研究中，褐菖鲉幼魚(yú)在15—30鹽度范圍內(nèi)生長(zhǎng)速度較快，10—20鹽度范圍內(nèi)成活率均達(dá)到90%以上，而鹽度為5的處理組褐菖鲉幼魚(yú)第3天時(shí)全部死亡；7.5鹽度組的幼魚(yú)生長(zhǎng)緩慢，體質(zhì)量特定增長(zhǎng)率和體長(zhǎng)特定增長(zhǎng)率均顯著低于其他鹽度組，且成活率僅為19.17%。因此，褐菖鲉幼魚(yú)較耐高鹽度而不耐低鹽度，生長(zhǎng)和存活的最適鹽度為15—20，這與吳常文[15]研究得到的褐菖鲉幼魚(yú)生存的最適鹽度范圍為16—22結(jié)論相似。

3.2 鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)體成分的影響

鹽度對(duì)魚(yú)體一般營(yíng)養(yǎng)成分有重要的影響[2]，張國(guó)政等[16]發(fā)現(xiàn)水環(huán)境中隨鹽度增大褐牙鲆幼魚(yú)體成分中粗脂肪含量呈降低趨勢(shì)。吳慶元等[17]研究發(fā)現(xiàn)鯔魚(yú)幼魚(yú)肌肉中粗蛋白和粗脂肪均隨鹽度增大而增大。本研究發(fā)現(xiàn)，隨鹽度升高，褐菖鲉幼魚(yú)體成分中水分含量呈降低趨勢(shì)，灰分含量呈升高趨勢(shì)。這與稅春等[18]研究結(jié)果一致。另外，褐菖鲉幼魚(yú)的粗蛋白、粗脂肪含量受鹽度影響顯著，隨鹽度升高呈先增大后減小的變化趨勢(shì)，并均與鹽度存在二次函數(shù)關(guān)系，其中粗脂肪在鹽度19.07時(shí)達(dá)到理論最大值，這與前面所述的褐菖鲉幼魚(yú)生長(zhǎng)和存活試驗(yàn)所得出的適宜鹽度接近，而粗蛋白的鹽度理論最大值為23.05，較粗脂肪、相對(duì)生長(zhǎng)率和存活率的最適鹽度范圍大，這可能是因?yàn)辂}度23.05時(shí)，褐菖鲉幼魚(yú)處于消耗糖類和脂肪的狀態(tài)，且機(jī)體中水份也因處于高鹽中而減少，因此粗蛋白在體成分中的占比含量就會(huì)升高，這也是鹽度可以影響魚(yú)類肌肉品質(zhì)的原因之一。相似的研究結(jié)果也出現(xiàn)在林建斌等[19]研究的鹽度對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(yú)生長(zhǎng)、肌肉成分和消化率的影響中。

3.3 鹽度對(duì)褐菖鲉幼魚(yú)消化酶和抗氧化酶的影響

鹽度可通過(guò)影響魚(yú)體內(nèi)外滲透壓平衡影響消化酶活力大小，從而影響機(jī)體對(duì)食物消化和吸收的能力[20-22]。本研究發(fā)現(xiàn)，褐菖鲉幼魚(yú)內(nèi)臟的消化酶(淀粉酶，胃蛋白酶，胰蛋白酶和脂肪酶)活力均隨鹽度增大呈先降低后升高的變化趨勢(shì)，均在高鹽度30和低鹽度7.5、10時(shí)較大，而在15—25鹽度范圍內(nèi)趨于正常。主要原因是高鹽或低鹽條件下，褐菖鲉幼魚(yú)機(jī)體需要更高的消化酶活力來(lái)消化食物。這與楊靜雯等[23]研究發(fā)現(xiàn)的虹鱒和硬頭鱒幼魚(yú)分別在鹽度5和10時(shí)消化酶活性較大的結(jié)果相一致。另外幼魚(yú)機(jī)體內(nèi)消化酶活力在高鹽時(shí)升高，可能與一定范圍內(nèi)高鹽對(duì)其體內(nèi)消化酶活力有一定激活作用有關(guān)[24]。

SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(過(guò)氧化氫酶)和GSH-PX(谷胱甘肽過(guò)氧化物酶)是抗氧化防御系統(tǒng)的關(guān)鍵性酶，在生物體的自我保護(hù)系統(tǒng)中起著重要作用[25]。SOD能與機(jī)體中超氧陰離子自由基(O2-)發(fā)生歧化反應(yīng)，生成H2O2和O2；而CAT和GSH-PX兩種酶可將機(jī)體細(xì)胞中H2O2轉(zhuǎn)變?yōu)樗?，從而保護(hù)其免受活性氧自由基的傷害[26]。本研究中，3種抗氧化酶活力受鹽度影響程度不同，在7.5—25鹽度范圍內(nèi)，SOD隨鹽度增大呈先升高后降低的變化，并在7.5、10和15時(shí)活力較高，20、25和30鹽度組較低，15鹽度組顯著高于25鹽度組，說(shuō)明在低鹽度時(shí)幼魚(yú)體內(nèi)產(chǎn)生了大量的活性氧自由基，需要產(chǎn)生更多SOD保護(hù)幼魚(yú)機(jī)體細(xì)胞免受損傷。各鹽度組間GSH-PX活性均無(wú)明顯差異，說(shuō)明在7.5—30鹽度范圍內(nèi)，褐菖鲉幼魚(yú)體內(nèi)GSH-PX活性受鹽度影響不顯著。CAT活力受鹽度影響較明顯，7.5、10和15組的活力顯著高于25，而25組與20和30組的均無(wú)明顯差異，并在7.5—25鹽度范圍內(nèi)，隨鹽度增大呈先升高后降低的變化，與點(diǎn)籃子魚(yú)[27]變化趨勢(shì)相同。鹽度30時(shí)，3種抗氧化酶活力均升高，表明褐菖鲉幼魚(yú)在遇到不利因素脅迫時(shí)，其體內(nèi)抗氧化酶活力可能會(huì)增加[28]。

4 結(jié)論

褐菖鲉幼魚(yú)表現(xiàn)出較強(qiáng)的鹽度耐受力，在鹽度10—20范圍內(nèi)，其存活率較高，均達(dá)到90%以上；15—30范圍內(nèi)，生長(zhǎng)速度較快。幼魚(yú)的粗脂肪和粗蛋白均隨鹽度增加呈先升高后降低的趨勢(shì)，并在鹽度為23.05和19.07時(shí)達(dá)到理論最大值，而隨鹽度增加，水分呈下降、灰分呈上升趨勢(shì)。在15—25鹽度范圍內(nèi)消化酶活力較小，幼魚(yú)不需要消耗過(guò)多的能量來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓。鹽度對(duì)GSH-PX的活性無(wú)明顯影響，而對(duì)SOD和CAT活性有顯著影響，在20—25鹽度范圍內(nèi)SOD和CAT活性較低。綜上，褐菖鲉幼魚(yú)的最適宜鹽度為20左右。