田 芬， 彭郁霖， 肖 琨， 李曉林

(貴州省六盤水市動物疫病預(yù)防控制中心，貴州 六盤水 553000)

2019年9月，六盤水市某縣蛋雞場發(fā)生以外周神經(jīng)水腫、肝臟腫大、卵黃性腹膜炎、產(chǎn)蛋量下降為主要特征的疫病。筆者通過臨床檢查、病理剖檢、實驗室檢驗，確診為雞立克氏病與大腸桿菌病混合感染，現(xiàn)將診斷及防控措施介紹如下。

1 發(fā)病情況

該場共存欄羅曼粉蛋雞18萬羽，分2棟雞舍飼養(yǎng)，其中2號雞舍存欄9.5萬羽(455日齡，已開產(chǎn))，死亡5 000羽，病死率5.3%(5 000/95 000)，每天死亡12～15羽，死亡高峰1天死亡30余羽。在170日齡產(chǎn)蛋高峰期產(chǎn)蛋率91%～93%，3個月后下降至85%，9月初下降至78%～80%，產(chǎn)軟殼蛋、畸形蛋3%～10%，未進(jìn)行任何治療。

2 臨床癥狀

病雞精神委頓，食欲減退，消瘦，羽毛松亂，皮膚發(fā)紫；雞冠蒼白、皺縮、出血(有的雞冠呈黑紫色)；肉髯淤血、出血、萎縮；腳部鱗片干枯脫水，兩腿前后伸展，呈“劈叉”姿勢；下痢，糞便呈黃白色或黃綠色；觸診腹部有硬塊。

3 病理變化

剖檢3只死雞、6只病雞，病(死)雞主要表現(xiàn)為心肌、心內(nèi)膜、心冠脂肪出血；肝臟異常腫大，正常肝小葉結(jié)構(gòu)消失，表面呈粗糙或顆粒狀外觀；脾臟色澤蒼白；喉頭有黏液，氣管環(huán)狀出血，氣囊渾濁；腎臟水腫、出血；腺胃乳頭點狀出血；卵黃破裂，卵泡充血，有卵黃性腹膜炎；坐骨神經(jīng)腫大，呈黃白色，橫紋消失。

4 實驗室檢查

4.1 雞馬立克氏病病毒PCR檢測取送檢雞的肝臟組織，加入適量滅菌PBS緩沖液，研磨成勻漿后，分別離心取上清液，采用北京世紀(jì)元享公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒按說明書提取病毒的總DNA，以DNA為模板進(jìn)行馬立克氏病病毒核酸檢測。引物序列為上游引物：5’-GGAGAAGACGCAGGAAGC-3’；下游引物：5’-GAGGGCAGAAGAGGGAAT-3’。PCR反應(yīng)體系25 μL：2×TaqMix 12.5 μL，上、下游引物(10 nmol/L) 各1.0 μL，DNA 2.0 μL，補(bǔ)水至25 μL。PCR擴(kuò)增條件：95 ℃ 3 min(95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s)×30；72 ℃ 10 min；8 ℃ 59 min。 取PCR產(chǎn)物8 μL，1.2%瓊脂糖凝膠電泳，預(yù)期擴(kuò)增片段522 bp。結(jié)果：7個檢測樣品中有5個樣品擴(kuò)增出馬立克氏病病毒特異性核酸片段，檢出率71.43%(5/7)，說明存在馬立克氏病病毒(見圖1)。

4.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)將病(死)雞組織樣品分別接種于鮮血營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng) 24 h。結(jié)果：均有菌落生長，其中在麥康凱培養(yǎng)基上生長為紅色菌落。挑取單個菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，可見為呈單、雙排列的革蘭氏陰性短小桿菌。挑菌純培養(yǎng)，獲得純培養(yǎng)物，按照腸桿菌科生化鑒定方法進(jìn)行鑒定，結(jié)果與大腸桿菌生化特征基相符(見表1)。根據(jù)培養(yǎng)特點、形態(tài)特征、生化試驗綜合鑒定為大腸桿菌。

表1 分離菌生化鑒定

項目對照組 樣品組硫化氫+ -苯丙氨酸- -葡萄糖酸鹽+ +蛋白胨水(靛基質(zhì))- -M.R.+ -V-P+ -枸櫞酸鈉- +尿素+ +半固體瓊脂+ +葡萄糖(產(chǎn)氣)+ +賴氨酸+ +鳥氨酸+ -棉子糖+ +山梨醇- -側(cè)金盞花醇+ +木糖+ +氨基酸對照+ +

注：+為陽性反應(yīng)，-為陰性反應(yīng)

5 診斷結(jié)果

通過發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化和實驗室檢測，確診為雞馬立克氏病與大腸桿菌病混合感染。

6 防控措施

6.1 加強(qiáng)檢疫防疫引進(jìn)雞苗時要注意加強(qiáng)檢疫，從已免疫馬立克氏病疫苗的種雞場引進(jìn)，確保飼雞群無馬立克氏病隱性感染，避免引入病雞。針對大腸桿菌病可使用大腸桿菌滅活疫苗免疫?；虬疵?00羽雞用黃連50 g，黃芩50 g，大黃40 g，車前子40 g，連翹40 g，甘草40 g，加水25 kg，熬制30分鐘后去藥渣，將藥液加水2.5倍稀釋后供雞自由飲用，連用3天進(jìn)行預(yù)防。

6.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理注意控制雞舍溫度、濕度和通風(fēng)，提供優(yōu)質(zhì)全價飼料和符合畜禽飲用標(biāo)準(zhǔn)的飲水，使雞群保持良好的免疫功能和體質(zhì)。

6.3 加強(qiáng)消毒和無害化處理對禽舍、用具進(jìn)行清洗，1%戊二醛消毒，避免病原滋生。發(fā)病雞及時隔離撲殺，病死雞進(jìn)行無害化處理。

7 討論

7.1雞馬立克氏病以免疫防控為主，采用疫苗接種是控制本病的重要措施，盡管保護(hù)率不能達(dá)到100%，但可最大限度減少病例發(fā)生，此外還應(yīng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和消毒滅源等綜合防控措施。由于某些品種雞對馬立克氏病具有高度的遺傳易感性，難以進(jìn)行有效免疫，甚至免疫接種后仍然易感，因此須選育有遺傳抵抗力的種雞。

7.2對于大腸桿菌病等細(xì)菌性疾病的防控，除加強(qiáng)常見病的疫苗接種外，還應(yīng)加強(qiáng)科學(xué)飼養(yǎng)管理，注意避免濫用和長期用藥，選藥前要進(jìn)行藥敏實驗，選擇對細(xì)菌敏感的藥物進(jìn)行治療。