肖非

摘 要

結(jié)核病屬于重要傳染疾病，其能夠?qū)€體健康產(chǎn)生嚴(yán)重的不良影響，是我國發(fā)病率和死亡率最高的傳染病，青壯年是主要的患病人群，以農(nóng)村地區(qū)為主，而結(jié)核病確診的主要依據(jù)為實驗室檢查，其中痰涂片染色法因操作簡單、價格便宜，在我國得到廣泛的使用。但萋尼染色加熱法需加溫處理過于煩瑣，冷染法簡化了其過程。

關(guān)鍵詞

結(jié)核實驗室診斷;冷染法;實驗教學(xué)

中圖分類號： R521 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457 . 2020 . 06 . 66

結(jié)核病屬于重要傳染疾病，其對個體健康產(chǎn)生嚴(yán)重的不良影響，而且致死率極高。在世界范圍內(nèi)，通過分析相關(guān)報告中給出的數(shù)據(jù)等內(nèi)容可以了解到，結(jié)核是我國發(fā)病率和死亡率最高的傳染病，最主要的患病人群為青壯年及營養(yǎng)不良者，以農(nóng)村地區(qū)為主，往往會對經(jīng)濟發(fā)展產(chǎn)生阻礙。針對如何預(yù)防和治療結(jié)核病，國內(nèi)有關(guān)方面不斷展開深入研究，但發(fā)病率并未得到有效的控制，導(dǎo)致此狀況產(chǎn)生的原因較多，具體包括結(jié)核桿菌變異等，而結(jié)核病確診的主要依據(jù)為實驗室檢查，其中痰涂片染色法因操作簡單、價格簡單，在我國得到廣泛的使用。但萋尼染色加熱法需加溫處理過于煩瑣，冷染法簡化了其過程。本實驗對兩種方法分成A.B.C三組進(jìn)行比較，介紹如下：

1 材料與方法

1.1 模擬標(biāo)本

有效日期內(nèi)卡介苗（防疫部門贈送）1支加入1ml無菌蒸餾水溶解混勻，加入健康唾液標(biāo)本制成混合痰標(biāo)本，以模擬病人痰液標(biāo)本。

1.2 試劑

（1）苯酚復(fù)紅染液是由A、B兩種溶液按照一定比例混合后得到的。A溶液就是在100ml濃度95%的乙醇中溶解3g堿性復(fù)古紅制劑。B溶液就是在100ml蒸餾水中溶解0.5kg苯酚。A、B兩種溶液分別取10ml和90ml，混合后即得到所需染液。（2）3%鹽酸乙醇液：將97ml乙醇（濃度95%）與3ml濃鹽酸進(jìn)行混合即可。（3）亞甲藍(lán)液亞甲藍(lán)乙醇飽和溶液：向100ml乙醇（濃度95%）中投入2g亞甲藍(lán)，將二者混合均勻后取30ml混合溶液備用。（4）10%氫氧化鉀：0.1ml。（5）蒸餾水：100ml。

1.3 方法

1.3.1 冷染法

（1）直接涂片法制作的涂片尺寸為20mm×15mm，且應(yīng)具有一定厚度，并使用火焰對干燥后的涂片進(jìn)行固定。A組水洗5min，使用苯酚復(fù)紅染液，在脫色時使用3%鹽酸酒精，隨后進(jìn)行1min的復(fù)染，使用亞甲藍(lán)溶液，水洗，最后鏡檢經(jīng)過干燥處理的涂片;B組除染色時間增加到20min外，其余操作均與A組相同。

1.3.2 加溫染色法

C組按照萋-尼染色原法將涂片固定后滴加苯酚復(fù)紅染液蓋滿痰膜，弱火加溫染色5min，水洗用脫色液進(jìn)行脫色，加亞甲藍(lán)進(jìn)行復(fù)染1min，水洗干燥后鏡檢。

2 結(jié)果

抗酸染色陽性菌在鏡檢中的樣子為略帶卷曲或細(xì)長，呈紅色。其余的細(xì)菌或細(xì)胞均被染成藍(lán)色。在油鏡在觀察100個視眼，A組與C組比較染色時間相同但C組進(jìn)行加熱處理，C組視眼更加清晰，結(jié)構(gòu)更加明顯。B組與C組相比，B組加長了染色時間，100個視眼下相比，冷染法紅色桿菌菌體更為清晰，對比更為明顯。但檢測的陽性率相同無任何優(yōu)劣之分。通過對比可知干燥20分鐘和烘干的效果是一致的。

3 討論

結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁當(dāng)中含有大量的脂質(zhì)，大多都匯聚于肽聚糖之外，這也直接導(dǎo)致分枝桿菌不會著色，必須要經(jīng)過加熱、延長染色時間才能夠達(dá)到這一目的。常規(guī)而言，分枝桿菌著色之后則無法立即被脫色，這也被稱作為抗酸染色。在上實驗課時候時，學(xué)生抗酸染色主要會直接運用傳統(tǒng)的姜-尼抗酸染色加熱法來展開實驗，其所表現(xiàn)出來的缺點主要如下：（1）酒精燈在加熱過程當(dāng)中，整體的操作時間較長，掌握起來也更加吃力;（2）在加熱過程當(dāng)中，染液容易干涸;（3）在加熱過程當(dāng)中，石炭酸蒸發(fā)出來會給人體造成巨大損害。此次實驗操作使用的是萋尼染色冷染色法，可取得良好的染色效果而且能保持染液的穩(wěn)定。通過運用卡介苗水溶液來直接取代結(jié)核菌痰液陽性標(biāo)本，改良后的抗酸染液染色的實驗方法能夠促使其發(fā)生改變，菌體形態(tài)、與染色均無明顯差異;擁有染色效果優(yōu)秀、標(biāo)本出處容易、操縱簡易和安全無污染等特征。這一方面能夠很好避免結(jié)核排菌陽性病人的痰液受到污染，此舉能夠更好地將抗酸染色實驗教學(xué)中的各類要求全部都予以滿足?；诋?dāng)前的實驗結(jié)果顯示情況看來，利用萋尼染色冷染法能夠讓結(jié)核桿菌呈現(xiàn)出亮紅色，菌體也會變得更加清晰，細(xì)菌的顏色與背景著色對比也會更加明顯。面對于這種情況，鏡檢人員在觀察過程當(dāng)中也會更加容易，所以，一旦抗酸染色有所改良，則能夠直接運用于臨床標(biāo)本的結(jié)核分枝桿菌染色鏡檢，結(jié)核菌的陽性檢出率也能夠陡然提升。

參考文獻(xiàn)

[1]鄭玉華，俞榮明.姜—納氏染色法與抗酸染色改良法的比較，浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)[B].2001.13.1.2651.

[2]岳小琴.抗酸染色冷染法和加溫染色法的應(yīng)用分析，檢驗醫(yī)學(xué)與臨床[B].2010.7.23.

[3]邱莎莎，鄧曉，張瑞其.介紹一種用卡介苗進(jìn)行改良抗酸染色的實驗教學(xué)方法，微生物學(xué)雜志[B].2008.11.109-110.