吳韶娜

（山西省長治市第二人民醫(yī)院，山西 長治）

0 引言

本研究采用非生物素EliVisionTMplus 二步法分別檢測PTK6 和c-erbB-2 的陽性表達(dá)率與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系以及二者之間的相關(guān)性，由于PTK6 蛋白和c-erbB-2 蛋白表達(dá)的相關(guān)性，很可能這些蛋白可以共同作為乳腺癌診斷及預(yù)后的標(biāo)志物。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源

標(biāo)本來自廈門市某醫(yī)院（2003 年2 月至2008 年5 月）接受乳腺癌手術(shù)的乳腺癌病例。依據(jù)2012 WHO 乳腺癌分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織學(xué)分類：非特殊性浸潤性導(dǎo)管癌116 例；對其進(jìn)行組織學(xué)分級：Ⅰ級35 例，Ⅱ級63 例，Ⅲ級18 例。116例乳腺癌中86 例有淋巴轉(zhuǎn)移，30 例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。根據(jù)國際抗癌協(xié)會TNM 分期方案將乳腺癌分為：Ⅰ期40 例，Ⅱ期57 例，Ⅲ期19 例。另取癌旁乳腺組織52 例（距瘤邊緣5 cm）做對照。所有標(biāo)本均經(jīng)兩位病理科醫(yī)生確診。

1.2 檢測方法

所有標(biāo)本經(jīng)1 0% 中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4 μ m 連續(xù)切片，采用二步法檢測：①石蠟切片脫蠟至水；②檸檬酸抗原修復(fù)液（0.01 M，pH6.0）對組織進(jìn)行高壓加熱抗原修復(fù)；③滴加一抗工作液，4 ℃過夜，PBS沖洗3 次（3 min/ 次）；④滴加增強(qiáng)劑，室溫孵育20 min，PBS 沖洗3 次（3 min/ 次）；⑤滴加二抗，室溫孵育30 min，PBS 沖洗3 次（3 min/ 次）；⑥D(zhuǎn)AB 顯色、蘇木素復(fù)染、封片。用已知陽性標(biāo)本作陽性對照；以PBS 代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

所有切片均采用雙盲觀察，陽性百分率采用半定量判斷標(biāo)準(zhǔn)，即選5 個(gè)不同高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100 個(gè)細(xì)胞，計(jì)算出其中陽性細(xì)胞的百分率。陽性細(xì)胞數(shù)＜10% 為（-），10%～25%為（+），26%～50%為（++），＞50%為（+++）。臨床乳腺癌患者分子靶向治療常采用免疫組化法c-erbB-2+++作為評定標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，各組間率比較采用χ2檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)相關(guān)性分析采用Spearman 秩相關(guān)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PTK6、c-erbB-2 蛋白在乳腺不同組織學(xué)類型中的表達(dá)

如表1 所示，116 例浸潤性乳腺癌組織中，有68 例PTK6蛋白呈陽性表達(dá)，其陽性表達(dá)率為64.7%，而52 例乳腺癌旁組織中，有8 例蛋白陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為15.4%，結(jié)果提示，PTK6 蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率顯著高于乳腺癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；116 例浸潤性乳腺癌組織中，有57 例c-erbB-2 蛋白呈陽性表達(dá)，其陽性表達(dá)率為49.1%，52 例乳腺癌旁組織的陽性表達(dá)率為19.2%，結(jié)果提示，c-erbB-2 蛋白在乳腺癌組織中的陽性表達(dá)率顯著高于乳腺癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 PTK6 和c-erbB-2 蛋白在乳腺不同組織學(xué)類型中的表達(dá)（n, %）

2.2 浸潤性乳腺癌中PTK6、c-erbB-2 蛋白陽性表達(dá)與臨床病理特征之間關(guān)系

如表2 所示，PTK6 蛋白陽性表達(dá)隨著組織學(xué)分級的增加而增高，組織學(xué)分級Ⅰ級和Ⅱ- Ⅲ級的陽性表達(dá)率分別為48.6% 和71.6%，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而在腫瘤直徑、年齡、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及ER、PR 受體分組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。c-erbB-2蛋白陽性表達(dá)在組織學(xué)分級、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移分組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而在其余幾項(xiàng)分組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

2.3 PTK6 與c-erbB-2 蛋白在浸潤性乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析

如表3 所示，在75 例PTK6 蛋白陽性表達(dá)的浸潤性乳腺癌組織中，c-e r b B-2 蛋白的陽性表達(dá)率為5 7.3%（4 3/7 5）；41 例PTK6 蛋 白 陰 性 表 達(dá) 的 浸潤性乳腺癌組織中，c-erbB-2 蛋白的陽性表達(dá)率為34.1%（14/41），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Spearman 相關(guān)分析表明二者密切相關(guān)（rs=0.222，P＜0.05），見表3。

3 討論

乳腺癌是女性中最常見的惡性腫瘤，乳腺癌發(fā)病率逐年上升，目前已成為我國女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，且有低齡化趨勢[1]。分子標(biāo)志物在乳腺癌診斷、判斷預(yù)后和治療方案中的價(jià)值越來越受到人們的重視。愈來愈多的證據(jù)表明，HER 家族成員參與乳腺癌發(fā)生發(fā)展，而與c-erbB-2 有關(guān)聯(lián)的一些蛋白也成為了研究的熱點(diǎn)[2]。

表2 浸潤性乳腺癌組織中PTK6、c-erbB-2 蛋白陽性表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系（n, %）

表3 浸潤性乳腺癌組織中PTK6 蛋白與c-erbB-2 蛋白表達(dá)的相關(guān)性（n）

PTK6 在乳腺癌細(xì)胞和大約2/3 的原發(fā)性乳腺癌組織中表達(dá)升高，但在正常的乳腺上皮組織表達(dá)低或檢測不到，這表明PTK6 可能與乳腺組織癌變有關(guān)[3]。本研究進(jìn)一步探討了PTK6 蛋白表達(dá)與c-erbB-2 蛋白表達(dá)之間的關(guān)系，經(jīng)spearman 相關(guān)分析，結(jié)果顯示，PTK6 蛋白表達(dá)與c-erbB-2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)，即隨著c-erbB-2 蛋白陽性率的增高，PTK6 蛋白陽性率亦增高，這也是為什么c-erbB-2 陽性表達(dá)的乳腺癌患者療效不佳的原因之一。

綜上所述，PTK6 蛋白和c-erbB-2 蛋白在乳腺癌中的表達(dá)較正常乳腺組織明顯增加，且與組織學(xué)分級有關(guān)，提示其可能在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的促進(jìn)作用，PTK6蛋白和c-erbB-2 蛋白在乳腺癌中表達(dá)呈正相關(guān)，從而提示PTK6 蛋白可能是上調(diào)c-erbB-2 蛋白表達(dá)的一種激酶，在HER 表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中可能發(fā)揮重要的作用，因此在乳腺癌靶向治療中，PTK6 可能會成為細(xì)胞質(zhì)治療靶點(diǎn)，PTK6 蛋白可能會成為乳腺癌新的標(biāo)志物。但目前關(guān)于PTK6 在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用、預(yù)后意義以及與受體酪氨酸激酶家族的關(guān)系研究甚少，今后本研究小組將側(cè)重于PTK 與HER 受體的信號通路研究，可為乳腺癌的臨床治療開辟新的途徑。