孫建 顏廷獻(xiàn) 葉艷英 梁俊超 樂美旺 饒?jiān)铝? 顏小文 周紅英

摘? 要：研究繁殖群體量對(duì)芝麻種質(zhì)資源遺傳完整性的影響，以確定適宜的繁殖群體量，為種質(zhì)資源更新繁殖提供理論參考。利用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)育成品種和地方種質(zhì)2種不同類型的芝麻種質(zhì)資源的不同群體量的遺傳參數(shù)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示：（1）育成品種：隨機(jī)抽取了10、15、20、25、30、35和40株的7個(gè)群體量梯度，24對(duì)引物共擴(kuò)增到DNA位點(diǎn)525個(gè)，平均每對(duì)引物擴(kuò)增21.88個(gè)，多態(tài)性位點(diǎn)24個(gè)，占總位點(diǎn)數(shù)的4.57%。隨著群體量的不斷增加，擴(kuò)增總位點(diǎn)數(shù)和遺傳相似系數(shù)均表現(xiàn)為不斷增加，多態(tài)性位點(diǎn)比率和遺傳距離均呈現(xiàn)先升后降趨勢(shì)。當(dāng)群體量達(dá)到35～40株時(shí)，遺傳相似系數(shù)達(dá)到一定高值（0.998 73和1.000 00），遺傳距離降低到一定程度（0.000 64和0.000 00）。聚類結(jié)果顯示群體量為35和40株的群體被緊密聚在一起，因此可認(rèn)為育成品種的繁殖群體量達(dá)到35～40株時(shí)可以保持其遺傳完整性;（2）地方種質(zhì)：隨機(jī)抽取10、15、20、25、30、35、40、45、50、55和60株的11個(gè)群體量梯度，24對(duì)引物共擴(kuò)增到DNA位點(diǎn)552個(gè)，平均每對(duì)引物擴(kuò)增23.00個(gè)，多態(tài)性位點(diǎn)44個(gè)，占總位點(diǎn)數(shù)的7.97%。隨著群體量的不斷增加，擴(kuò)增總位點(diǎn)數(shù)波動(dòng)上升，多態(tài)性位點(diǎn)比率和遺傳距離呈先升后降然后再輕度變化的趨勢(shì)。遺傳相似系數(shù)則隨群體量的增大表現(xiàn)為先下降后上升然后輕度下降后再次回升的趨勢(shì)，并于群體量為40和60株時(shí)達(dá)到最大值0.99758。聚類結(jié)果顯示群體量為50、55和60株的群體被緊密聚在一起，因此可認(rèn)為地方種質(zhì)的繁殖群體量達(dá)到50～55株時(shí)可保持其遺傳完整性;（3）在芝麻種質(zhì)資源繁育中，不同類型的種質(zhì)資源由于其遺傳背景的純度存在差異，應(yīng)選擇不同的繁殖群體量以保持其遺傳完整性。

關(guān)鍵詞：芝麻;種質(zhì)資源;繁殖群體量;遺傳完整性;SRAP

中圖分類號(hào)：S565.3? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

Effects of Regeneration Population on the Genetic Integrity of Sesame Germplasm Using SRAP Markers

SUN Jian， YAN Tingxian， YE Yanying， LIANG Junchao， LE Meiwang*， RAO Yueliang， YAN Xiaowen， ZHOU Hongying

Crops Research Institute， Jiangxi Academy of Agricultural Sciences / Jiangxi Research Station of Crop Gene Resource & Germplasm Enhancement， Ministry of Agriculture and Rural Affairs / Nanchang Branch of National Center of Oilcrops Improvement / Jiangxi Province Key Laboratory of Oilcrops Biology， Nanchang， Jiangxi 330200， China

Abstract： The effect of regeneration population on the genetic integrity of sesame germplasm was studied to determine the appropriate population size and provide theoretical references for germplasm renewal and reproduction.The genetic parameters of two different types of sesame germplasm including released cultivar and local germplasm were analyzed using SRAP markers. （1） Released cultivar： Seven gradients of population size including 10， 15， 20， 25， 30， 35 and 40 were selected randomly. 24 pairs of primers were co-amplified to 525 loci， with an average of 21.88 loci per primer pairs， including 24 polymorphic loci， accounting for 4.57% of the total locus. With the increase of population size， the total amplification loci and genetic similarity coefficient increased， and the ratio of polymorphic loci and genetic distance increased and then decreased. When the population size reached 3540 plants， the genetic similarity coefficient reached a certain high value （0.998 73 and 1.000 00）， and the genetic distance decreased to a certain degree （0.000 64 and 0.000 00）. The clustering results showed that the populations with 35 and 40 were closely clustered. So the genetic integrity could be maintained when the population size of released cultivar reached 3540. （2） Local germplasm： Eleven gradients of population size including 10， 15， 20， 25， 30， 35， 40， 45， 50， 55 and 60 were selected randomly. 24 pairs of primers were co-amplified to 552 DNA locus， with an average of 23.00 locus per primer pairs， and including 44 polymorphic loci， accounting for 7.97% of the total loci. With the increase of population size， the total amplification loci fluctuation increased， and the ratio of polymorphic loci and genetic distance first increased， then decreased and then slightly changed. With the increase of population size， the genetic similarity coefficient first decreased， then increased， then slightly decreased and then rose again， and reached the maximum value of 0.99758 when the population size was 40 and 60 plants. The clustering results showed that the populations of 50， 55 and 60 plants were closely clustered. So it could be considered that the genetic integrity of local germplasm could be maintained when the reproductive population reached 5055 plants. （3） In the regenerating of sesame germplasm， different germplasm types should have different population size to maintain the genetic integrity because of the different genetic purity.

Keywords： sesame （Sesamum indicum L.）; germplasm; regeneration population; genetic integrity; SRAP

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2020.03.007

作物種質(zhì)資源是農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新、種業(yè)持續(xù)發(fā)展的物質(zhì)基礎(chǔ)，是保障國(guó)家食物供給安全、生態(tài)安全和能源安全的戰(zhàn)略性資源[1]。我國(guó)十分重視作物種質(zhì)資源收集保存和研究工作，自20世紀(jì)50年代以來先后收集保存340種作物50萬份資源，資源總量居世界第2位[1]。隨著種質(zhì)資源種類和數(shù)量的增長(zhǎng)，面臨的種質(zhì)更新繁殖和入庫繁育等問題也越來越突出。不管是種質(zhì)庫中已有資源的繁殖更新，還是新收集種質(zhì)的入庫繁育，必須盡可能維持原有種質(zhì)的遺傳完整性。遺傳完整性是指群體的基因型頻率分布、等位基因頻率分布等遺傳結(jié)構(gòu)得到完全的保持[2]。維持種質(zhì)資源的遺傳完整性就是在繁殖過程中保持親代和子代之間最大的遺傳相似性和最低的遺傳變異，是種質(zhì)資源安全保存和更新繁殖的核心問題[3]。遺傳完整性一直是種質(zhì)資源研究的重要內(nèi)容，大量的研究從形態(tài)學(xué)[4-6]、生理生化[7-8]和分子的角度檢測(cè)分析種質(zhì)資源的遺傳完整性。尤其是隨著分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（Random Amplified Polymorphism DNA， RAPD）[9-12]、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（Restriction Fragment Length Poly morp hism，RFLP）[9-10]、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（Amplified Fragment Length Polymorphism， AFLP）[13-15]、簡(jiǎn)單重復(fù)序列間擴(kuò)增（Inter Simple Sequence Repeat， ISSR）[10， 12， 16]、相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性（Sequence— Related Amplified Polymorphism， SRAP）[17-18]、簡(jiǎn)單重復(fù)序列（Simple Sequ ence Repeat， SSR） [19-20]、基于表達(dá)序列標(biāo)簽的簡(jiǎn)單重復(fù)序列（Expressed Se qu ence Tag-Simple Seq uence Repeat， EST-SSR）[21]和單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymorphism， SNP）[22]等越來越多的標(biāo)記應(yīng)用到種質(zhì)遺傳完整性的分子檢測(cè)研究中。

種質(zhì)資源的遺傳完整性在繁殖過程中受種子老化、繁殖世代數(shù)、繁殖群體量、繁殖環(huán)境、選擇壓力、植株密度與授粉和收獲方式等因素的影響[11， 23-24]。其中，繁殖群體量是指自然隨機(jī)交配條件下的理想群體大小，當(dāng)繁殖群體量足夠大時(shí)才有可能保持其原有的遺傳結(jié)構(gòu)[25]。當(dāng)然，在實(shí)際生產(chǎn)過程中，不可能將繁殖群體量無限擴(kuò)大，適宜的群體量是繁殖時(shí)需要考慮的重要因素。適宜的繁殖群體量既要有利于群體遺傳結(jié)構(gòu)的保持，維持其遺傳完整性，又要有利于降低繁殖工作量和成本，節(jié)省人力、物力[21， 25]，因此，確定適宜的繁殖群體量就顯得尤為重要。關(guān)于繁殖群體量對(duì)種質(zhì)遺傳完整性的研究已經(jīng)在玉米[4]、棉花[5]、蠶豆[15]、燕麥[20， 25]、高粱[26]、煙草[27]等許多作物中開展。

芝麻（Sesamum indicum L.）是我國(guó)重要的優(yōu)質(zhì)油料作物，其天然異交率在5%～23%之間[28]，在我國(guó)種植歷史悠久，分布區(qū)域廣泛，種質(zhì)資源十分豐富。關(guān)于芝麻種質(zhì)資源繁殖群體量的研究多以種子產(chǎn)量作為判定標(biāo)準(zhǔn)[29-30]，而從遺傳完整性角度進(jìn)行研究的報(bào)道很少[21]。馮祥運(yùn)等[29]對(duì)芝麻的3個(gè)育成品種和1個(gè)地方種質(zhì)進(jìn)行了繁殖更新群體大小的研究，根據(jù)農(nóng)藝性狀和種子量等確定有效繁殖群體的株數(shù)不少于25株，實(shí)際繁殖群體以40～50株為宜。馬緣生等[30]利用8份芝麻種質(zhì)進(jìn)行了繁殖群體大小的研究，結(jié)合同工酶多樣性驗(yàn)證分析，從產(chǎn)量的角度提出了芝麻繁殖群體不能少于25株，以40～50株為宜。張艷欣等[21]利用15對(duì)EST-SSR標(biāo)記對(duì)中期庫中的1份地方種質(zhì)的群體量大小進(jìn)行研究，認(rèn)為群體量大小至少為30～35株可代表該種質(zhì)遺傳特性，田間種植應(yīng)采用不小于60～70株進(jìn)行繁殖。本研究以2種不同的種質(zhì)類型，即育成品種（遺傳純度較高）和從農(nóng)家收集的地方種質(zhì)（遺傳純度一般）為材料，采用多態(tài)性較為豐富的SRAP標(biāo)記，比較分析了不同類型種質(zhì)資源繁殖群體量對(duì)其遺傳完整性的影響，完善和豐富了芝麻種質(zhì)資源繁育遺傳完整性研究的相關(guān)內(nèi)容，為芝麻種質(zhì)資源更新繁殖提供了理論參考。

1? 材料與方法

1.1? 材料

本研究所用材料為2種種質(zhì)資源類型，即育成品種和地方種質(zhì)。育成品種為江西省農(nóng)科院作物所育成的黑芝麻品種贛芝9號(hào)，種子由育種單位提供，為較大面積繁育的良種，品種純度較好。地方種質(zhì)采集于江西省進(jìn)賢縣梅莊鎮(zhèn)一農(nóng)戶家，為農(nóng)戶家多年自留自種的地方品種，品種純度一般。

1.2? 方法

1.2.1? 試驗(yàn)設(shè)計(jì)? 將收集的種子于發(fā)芽皿中進(jìn)行萌發(fā)，7 d后隨機(jī)選擇一定數(shù)量的幼苗子葉及上胚軸混合進(jìn)行DNA提取以構(gòu)成不同大小的群體。在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，育成品種隨機(jī)選擇10、15、20、25、30、35、40個(gè)單株幼苗，地方種質(zhì)隨機(jī)選擇10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60個(gè)單株幼苗，均重復(fù)3次。

1.2.2? DNA提取與質(zhì)量檢測(cè)? DNA提取方法和質(zhì)量檢測(cè)參照孫建等[31]的方法，以種子發(fā)芽后的子葉和下胚軸為材料，采用CTAB法提取基因組總DNA，提取過程中以RNase A消化去除RNA，通過紫外分光核酸測(cè)定儀測(cè)定DNA質(zhì)量和濃度，并在1%的瓊脂糖凝膠上電泳檢測(cè)其質(zhì)量。質(zhì)量合格后用ddH2O稀釋到50 ng/μL放置20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3? SRAP引物與PCR擴(kuò)增? 本研究使用SRAP正反引物共13條，引物序列信息詳見表1。引物是根據(jù)Li等[32]設(shè)計(jì)引物的原則設(shè)計(jì)而成，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司（Sangon）合成。參照孫建等[31]建立的SRAP的PCR體系（15 ?L）：DNA 100 ng、正反引物各50 ng、1反應(yīng)緩沖液、dNTPs 200 ?mol/L、MgCl2 2.0 mmol/L和Taq DNA聚合酶（購自MBI生物工程公司）1U。PCR程序參照Li等[32]得程序：94 ℃變性3 min;94 ℃ 1 min，35 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，共5個(gè)循環(huán);94 ℃1 min，50 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，共35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。用6%的聚丙烯酰胺（PAGE）凝膠進(jìn)行分離和銀染顯影。

1.3? 數(shù)據(jù)處理

統(tǒng)計(jì)清晰的SRAP擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)，在同一位點(diǎn)上有帶記為“1”，沒有帶的記為“0”。按Nei等[33]的方法在NTSYS pc2.10e分析軟件上計(jì)算遺傳相似系數(shù)（GS）和遺傳距離（GD），按照類平均法（UPGMA）進(jìn)行聚類分析。群體間聚類先在POPGENE 32軟件上計(jì)算群體間的遺傳距離，然后利用NTSYS進(jìn)行UPGMA聚類。不同群體量的平均遺傳相似系數(shù)和平均遺傳距離的差異顯著性方差分析和部分圖表制作在SPSS 18.0和Excel 2007軟件上完成。

2? 結(jié)果與分析

2.1? SRAP擴(kuò)增多態(tài)性分析

在育成品種中，24對(duì)引物共擴(kuò)增到DNA位點(diǎn)525個(gè)（表2），每對(duì)引物有效擴(kuò)增16～36個(gè)位點(diǎn)，平均21.88個(gè)。24對(duì)引物中14對(duì)引物擴(kuò)增到了多態(tài)性位點(diǎn)，單對(duì)引物擴(kuò)增的多態(tài)性位點(diǎn)最多為3個(gè)，平均每對(duì)引物擴(kuò)增的多態(tài)性位點(diǎn)為1.00個(gè)，共計(jì)24個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)。每對(duì)引物擴(kuò)增的多態(tài)性位點(diǎn)比率為0～12.50%，平均為4.57%。圖1為引物Em11/Me19擴(kuò)增結(jié)果的截圖。

由表2可知，在地方種質(zhì)中，24對(duì)引物共擴(kuò)增DNA位點(diǎn)數(shù)552個(gè)，每對(duì)引物擴(kuò)增17～37個(gè)，平均23.00個(gè)。24對(duì)引物中16對(duì)引物擴(kuò)增出了多態(tài)性，單對(duì)引物擴(kuò)增出的多態(tài)性位點(diǎn)最多為8個(gè)，平均每對(duì)引物擴(kuò)增出1.83個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，一共44個(gè)。每對(duì)引物擴(kuò)增的多態(tài)性比率為0～36.36%，平均為7.97%。圖2為引物Em10/Me19擴(kuò)增結(jié)果的截圖。

上面的數(shù)字表示群體植株數(shù)。

2.2? 不同群體量對(duì)育成品種遺傳完整性的影響

在育成品種中，擴(kuò)增結(jié)果顯示，平均擴(kuò)增的DNA條帶數(shù)和總位點(diǎn)數(shù)在群體量較小時(shí)有較小的波動(dòng)變化，但總體上均呈現(xiàn)出隨群體量的增加而不斷增加的趨勢(shì)，平均擴(kuò)增的DNA條帶數(shù)由506.00條（群體量為10株）增加到520.00條（群體量為40株），擴(kuò)增的總位點(diǎn)數(shù)由511個(gè)增加到519個(gè)（表3）。多態(tài)性位點(diǎn)和多態(tài)性位點(diǎn)比率除在群體量為15株時(shí)表現(xiàn)為稍有增加之外，整體上表現(xiàn)為隨著群體量的不斷增加而減小的趨勢(shì)，均在群體量為40株時(shí)降低到0，即在群體量為40株時(shí)，隨機(jī)抽取的3次重復(fù)之間沒有檢測(cè)到多態(tài)性的存在。3次重復(fù)之間的平均相似系數(shù)也表現(xiàn)出隨群體量的不斷增大而不斷升高的趨勢(shì)，于群體量為40株時(shí)相似系數(shù)達(dá)到最高值1.00000，且群體量為35株和40株時(shí)平均相似系數(shù)沒有顯著差異。平均遺傳距離總體上表現(xiàn)為隨著群體量的不斷增加而不斷減小，于群體量為40株時(shí)平均遺傳距離為0，且群體量35株和40株時(shí)的平均遺傳距離沒有顯著差別。

圖3中的擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)（圖3A）、多態(tài)性位點(diǎn)比率（圖3B）、相似系數(shù)（圖3C）和遺傳距離（圖3D）的變化折線圖更形象地顯示，隨著群體量的不斷增加擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)和相似系數(shù)均不斷增加，于群體量為35株和40株時(shí)達(dá)到一定高值;隨著群體量的不斷增加，多態(tài)性位點(diǎn)比率和遺傳距離呈先升后降趨勢(shì)，均在群體量15株時(shí)表現(xiàn)為輕度上升，于群體量為40株時(shí)降低至0。

可見，在供試的育成品種贛芝9號(hào)中，當(dāng)群體量達(dá)到35～40株時(shí)，平均相似系數(shù)達(dá)到一定高值，平均遺傳距離降低到一定程度，且相互之間無顯著性差異，因此可認(rèn)為繁殖群體量達(dá)到35～40株時(shí)可保持該品種的遺傳完整性。

2.3? 不同群體量對(duì)地方種質(zhì)遺傳完整性的影響

由表3可知，在地方種質(zhì)中，平均擴(kuò)增的DNA條帶數(shù)和總位點(diǎn)數(shù)均表現(xiàn)為波動(dòng)上升趨勢(shì)，平均擴(kuò)增的DNA條帶數(shù)由群體量為10株時(shí)的516.67條上升至群體量為60株時(shí)的546.33條，總位點(diǎn)數(shù)由522個(gè)（群體量為10株）增加到548個(gè)（群體量為50和55株），群體量為60株時(shí)稍有減少，為547個(gè)。多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)先由10個(gè)（群體量為10株和15株）增加到17個(gè)（群體量為25株），后降低到群體量為40株時(shí)的2個(gè)，然后回升至6個(gè)（群體量為50株和55株），最后在群體量為60時(shí)再次降低至2個(gè)。多態(tài)性位點(diǎn)比率也由1.91%（群體量為15株）和1.92%（群體量為10株）上升到群體量為25株時(shí)的3.21%，然后不斷下降至群體量為40株時(shí)的0.37%，后又回升至群體量為50株和55株時(shí)的1.09%，最后再次下降至0.37%（群體量為60株）。平均相似系數(shù)先下降后上升，然后輕度下降后再次回升的趨勢(shì)，于群體量為40株和60株時(shí)達(dá)到最大值0.99758，群體量為40～60株之間的相似系數(shù)差異不顯著。平均遺傳距離表現(xiàn)為先上升至群體量為25株時(shí)的0.01100，后下降至群體量為40株時(shí)的0.00123，隨后輕微上升后又于群體量為60株時(shí)下降至最低點(diǎn)0.00122，群體量為40～60株時(shí)，不同群體量的平均遺傳距離之間的差異不顯著。

圖3更為直觀地顯示出擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)（圖3A）、多態(tài)性位點(diǎn)比率（圖3B）、相似系數(shù)（圖3C）和遺傳距離（圖3D）隨群體量大小而表現(xiàn)出的變化?？傮w上，擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)波動(dòng)增長(zhǎng)至群體量為50～60株時(shí)達(dá)到一定高值。多態(tài)性位點(diǎn)比率則在群體量為40～60株時(shí)降低到一定程度，并在較低值水平

變化。相似系數(shù)表現(xiàn)為先降低后上升到一定高度后，然后輕度下降后再次上升，群體量在40～60株時(shí)的相似系數(shù)均表現(xiàn)為較高。遺傳距離先升后降，同樣在群體量為40～60株時(shí)下降至一定低值，并稍有變化。

可見，供試的地方種質(zhì)每個(gè)單株間的遺傳背景差異較大，隨機(jī)抽取的不同樣本量間的遺傳多樣性變化較大，但規(guī)律性總體上表現(xiàn)為隨著群體量的增加，遺傳完整性不斷加強(qiáng)，結(jié)合各個(gè)指標(biāo)間的變化趨勢(shì)和相似系數(shù)、遺傳距離的差異性顯著性分析，群體量為40～60株之間的差異不顯著，鑒于其變化的波動(dòng)性，繁殖群體量在40～60株之間，具體株數(shù)還有待進(jìn)一步分析。

2.4? 聚類分析

對(duì)育成品種不同群體量的SRAP擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行聚類分析。不同群體量不同重復(fù)間的聚類結(jié)果顯示（圖4A），21個(gè)樣品被聚成3大群，其中群體量為10株和15株的6個(gè)樣品被聚在一起;群體量為20株、25株和30株（2個(gè)重復(fù)）的8個(gè)樣品被聚在另一個(gè)群;而余下的群體量為35株和40株的3次重復(fù)以及群體量為30株的1次重復(fù)被較緊密地聚在一起，其中群體量為40株的3次重復(fù)、群體量為35株的2次重復(fù)分別被緊密聚在一起，可見群體量為35株和40株之間的關(guān)系最接近。群體間的聚類結(jié)果顯示（圖4B），7個(gè)取樣群體被聚成2個(gè)大類，群體量為10、15、20和25株的群體被聚在一起，群體量為30、35和40株的3個(gè)群體被聚在另一起，其中35株的群體和40株的群體被更緊密地聚在一起，它們的相似度較為接近。

地方種質(zhì)不同群體量不同重復(fù)間的聚類結(jié)果顯示（圖5A），33個(gè)樣品首先被聚成兩大群，群體量為10～30株的12個(gè)較小群體量的樣品被聚在一起，其余的21個(gè)樣品被聚在另一大群;在大群中，群體量為50株（2個(gè)重復(fù)）、55株（2個(gè)重復(fù)）和60株（3個(gè)重復(fù)）的7個(gè)樣品聚類最為緊密，可見群體量為50～60株之間的相似關(guān)系最為接近。群體間的聚類結(jié)果顯示（圖5B），11個(gè)取樣群體首先被聚成2個(gè)大類，群體量為10、15、20和25株的小群體量群體被聚在一起，余下的較大群體量群體被聚在一起。群體量為30～60株的7個(gè)取樣群體又被聚為3類，分別是群體量為30株和35株聚為1類、40株和45株聚為1類、以及50、55和60株聚為1類，且群體量為50株和55株的群體最為緊密地聚在一起，它們的相似度較為接近。

3? 討論

SRAP標(biāo)記操作簡(jiǎn)單、多態(tài)性好、可重復(fù)性高，是一種綜合了多種DNA分子標(biāo)記優(yōu)點(diǎn)的標(biāo)記技術(shù)，廣泛應(yīng)用于作物遺傳多樣性分析、遺傳圖譜構(gòu)建及QTLs（基因）定位研究[34-36]。在芝麻研究中，SRAP標(biāo)記同樣得到了大量應(yīng)用，車卓等[37-38]在100份黑芝麻種質(zhì)資源和18份核心收集品的育成品種（系）的SRAP分析中，每對(duì)引物分別擴(kuò)增出DNA條帶14.0條和13.9條。孫建等[39]在67個(gè)中國(guó)白芝麻品種的遺傳多樣性研究中，21對(duì)SRAP引物共擴(kuò)增出DNA條帶561條，平均每對(duì)引物擴(kuò)增帶數(shù)為26.7條。張艷欣等[40]在對(duì)209份白芝麻種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性分析中，13對(duì)SRAP引物共擴(kuò)增出180條帶，平均每對(duì)引物擴(kuò)增出13.8條。孫建等[31]利用SRAP標(biāo)記技術(shù)對(duì)20個(gè)中國(guó)主要黑芝麻品種DNA進(jìn)行遺傳基礎(chǔ)分析，23對(duì)引物共擴(kuò)增DNA帶672條，平均每對(duì)引物擴(kuò)增的帶數(shù)為29.21條。本研究在育成品種中24對(duì)SRAP標(biāo)記引物共擴(kuò)增DNA位點(diǎn)

數(shù)525條，平均每對(duì)引物擴(kuò)增位點(diǎn)21.88個(gè)，在地方種質(zhì)中24對(duì)引物共擴(kuò)增552個(gè)位點(diǎn)，平均每對(duì)引物擴(kuò)增位點(diǎn)23.00個(gè)。該擴(kuò)增結(jié)果顯示，每對(duì)SRAP引物擴(kuò)增的位點(diǎn)數(shù)介于前人在芝麻的研究結(jié)果之間[31， 37-40]，與其他作物中的研究結(jié)果相近[41-42]，可見本研究中的SRAP擴(kuò)增結(jié)果有效。

分子標(biāo)記是研究種質(zhì)資源遺傳完整性的一種科學(xué)高效的實(shí)用技術(shù)，具有檢測(cè)位點(diǎn)多、結(jié)果真實(shí)可靠、不受環(huán)境影響等優(yōu)點(diǎn)。利用分子標(biāo)記技術(shù)分析繁殖群體量對(duì)種質(zhì)遺傳完整性的影響研究已經(jīng)在很多作物得到廣泛應(yīng)用。計(jì)懷春等[5]應(yīng)用68對(duì)SSR標(biāo)記對(duì)3個(gè)棉花品種的不同群體量進(jìn)行DNA擴(kuò)增分析，獲得236個(gè)位點(diǎn)，群體量為25、50、100和150株之間的遺傳多樣性指數(shù)和相似系數(shù)等指標(biāo)均差異不顯著，于是認(rèn)為25株可作為棉花種質(zhì)繁殖更新時(shí)的最低群體量。劉敏等[15]用AFLP標(biāo)記比較分析9個(gè)蠶豆地方種質(zhì)在繁殖群體量為20和50株時(shí)的遺傳完整性指標(biāo)，結(jié)果顯示，50株的繁殖群體量更能保持其遺傳完整性。楊苗苗等[20]利用SSR標(biāo)記分析2個(gè)燕麥品種10～ 90株繁殖群體量對(duì)遺傳完整性的影響，20對(duì)引物分別檢測(cè)到43和32個(gè)等位基因，2個(gè)品種群體量分別在大于70株和50株時(shí)，遺傳變化趨于平穩(wěn)，認(rèn)為不同品種的繁殖群體量存在差異。李俊等[25]利用20對(duì)SSR引物對(duì)燕麥育成品種燕科1號(hào)的繁殖群體量進(jìn)行研究，認(rèn)為繁殖群體量理論為50株，在實(shí)際生產(chǎn)中可加大到100株更能保持其遺傳完整性。許玉鳳等[26]在對(duì)高粱的繁殖群體量研究結(jié)果表明，25對(duì)SSR引物共檢測(cè)到58個(gè)等位基因，群體量在40株以上時(shí)等位基因頻率及多樣性指數(shù)趨于一致，故建議高粱的繁殖群體量應(yīng)在40株以上才能較好地保持其遺傳完整性。潘應(yīng)花等[27]以4份煙草種質(zhì)和1份野生種為材料，利用SSR標(biāo)記進(jìn)行不同繁殖群體量的遺傳完整性分析，結(jié)果表明普通煙草種質(zhì)的繁育群體量應(yīng)等于或大于10株、野生種應(yīng)大于20株才能保持其遺傳完整性。在芝麻繁殖群體量研究中，馮祥運(yùn)等[29]和馬緣生等[30]通過農(nóng)藝性狀和種子產(chǎn)量認(rèn)為芝麻繁殖群體量應(yīng)該大于25株，張艷欣等[21]利用15對(duì)EST-SSR引物對(duì)1份芝麻地方種質(zhì)的研究認(rèn)為至少30～35株可代表該種質(zhì)的遺傳特性。本研究中利用24對(duì)SRAP引物對(duì)2個(gè)不同類型的芝麻種質(zhì)資源的不同繁殖群體量進(jìn)行遺傳多樣性分析，結(jié)果顯示，在育成品種中檢測(cè)到DNA位點(diǎn)525個(gè)，群體量35株和40株時(shí)，其總位點(diǎn)數(shù)趨于穩(wěn)定，多態(tài)性位點(diǎn)比率很低，遺傳相似系數(shù)趨于1，遺傳距離趨于0，且35株和40株的群體量之間的差異不顯著，聚類分析也顯示35株的群體和40株的群體被緊密聚在一起，故認(rèn)為育成品種的繁殖群體量達(dá)到35～40株時(shí)，可保持其遺傳完整性。在地方品種中共檢測(cè)到DNA位點(diǎn)552個(gè)，群體量在50～60株時(shí)，總位點(diǎn)數(shù)變化較小，群體間的遺傳相似系數(shù)和遺傳距離差異不顯著，遺傳相似系數(shù)最高可達(dá)0.997 58，遺傳距離低至0.001 22，且聚類結(jié)果將50～55株的群體緊密聚在一起，結(jié)合經(jīng)濟(jì)節(jié)約的原則，故認(rèn)為地方種質(zhì)的適宜繁殖群體量為50～55株。相較上述研究結(jié)果[5， 15， 20-21， 25-27]，本研究檢測(cè)的位點(diǎn)數(shù)多、設(shè)置的群體量梯度較密，且比較了不同類型種質(zhì)的繁殖群體量，因此結(jié)果更為可靠有效。至于本研究中獲得的適宜群體量要大于前人在芝麻上的研究[21， 29-30]，這與選用的材料、標(biāo)記類型和DNA位點(diǎn)數(shù)有關(guān)。

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