史慧靜

(濮陽市油田總醫(yī)院，河南 濮陽 457001)

帕金森病(PD)是較為常見的一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變，發(fā)病原因可能為遺傳、炎癥、氧化應(yīng)激、環(huán)境、環(huán)境毒物等造成的代謝障礙，主要病理變化為黑質(zhì)紋狀體的多巴胺能神經(jīng)元變性，確切發(fā)病機制尚不明確[1-3]。有研究表明[4-5]，機體自身免疫與PD存在一定聯(lián)系，Th9可參與炎性反應(yīng)的發(fā)生，還可介導一系列自身免疫性疾病，是一種新型的輔助性T細胞亞群。白細胞介素-9(IL-9)為細胞因子，也呈現(xiàn)過高的表達水平，其作用可能與促進神經(jīng)損傷引起炎性反應(yīng)等相關(guān)，但臨床有關(guān)IL-9在PD表達作用的相關(guān)研究甚少[6-7]。本研究探討了IL-9與T細胞亞群Th9在PD患者中表達的臨床價值，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院2017年3月—2018年3月收治的PD患者73 例作為觀察組，其中男38 例，女35 例，年齡(63.23±5.52) 歲；選擇本院同期體檢中心健康志愿者70 例作為對照組，其中男39 例，女31 例，年齡(62.32±5.10) 歲。兩組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意，研究對象均同意并簽署知情同意書。

納入標準：患者自愿入組，配合治療；經(jīng)外周血生化檢驗，炎癥指標未見異?；颊?；均符合中國帕金森病診斷標準(2016版)。

排除標準：孕婦及哺乳期婦女；小腦病變者；腦外傷、腦卒中、腦膜炎病史患者；無法配合治療的患者；神經(jīng)系統(tǒng)疾病史患者；患有行為、語言和記憶力障礙伴嚴重癡呆者[8]。

1.2 方法

1.2.1 采集標本

研究對象禁食12 h，次日清晨采空腹靜脈血，并置于肝素抗凝管內(nèi)，將采集的全血分為2 份，一份離心后進行血清分離，對其進行酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)實驗，另一份血樣采取密度提取離心法進行分離外周血單個核細胞(PBMC)。

1.2.2 Th9細胞流式檢測

24孔板內(nèi)各孔加入離子霉素1 μL(1 μg/μL)，佛波醇酯類多克隆刺激劑5 μL(10 ng/μL)，莫能霉素4 μL(0.5 μg/μL)，各孔內(nèi)約加入PBMC 2×106個，均由美國Enzo公司提供。加入1 mL的RPMI 1640培養(yǎng)基后對其進行5 h刺激。將細胞收集于離心管內(nèi)進行離心，采用PBS進行洗滌，共洗滌2 次，然后將上清液去掉，加入破膜液500 μL，避光，時間為30 min，離心、去掉上清液、洗滌2 次，將藻紅蛋白-抗人IL-9抗體加入，避光30 min，洗滌2 次，250 μL PBS重懸，然后進行檢測，并對所有標本進行同型對照(由美國eBio-Science公司提供同型對照抗體)。結(jié)果以CD4+，IL-9+T細胞在CD4+T細胞中比例統(tǒng)計。

1.2.3 血清IL-9的檢測

血清IL-9的表達采用ELISA法進行檢測，操作嚴格依據(jù)試劑盒進行(購自上海博耀生物科技有限公司)。

1.3 觀察指標

對PD患者外周血中IL-9的表達水平、Th9細胞的比例、H-Y分期與PD患者外周血中IL-9表達的關(guān)系、H-Y分期與PD患者外周血Th9比例的關(guān)系進行分析。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組外周血中IL-9表達水平比較

觀察組患者外周血IL-9表達水平為(15.98±3.01) pg/mL，對照組為(7.61±0.81) pg/mL，兩組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(t=11.23，P<0.05)。

2.2 兩組外周血中Th9細胞比例的比較

觀察組外周血中Th9細胞的比例為(1.31±0.31)%，對照組為(0.62±0.10)%，兩組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(t=8.692，P<0.05)。

2.3 H-Y分期與PD患者外周血中IL-9表達的關(guān)系

依據(jù)H-Y分期法將觀察組患者分為5期，1期22 例，2期20 例，3期17 例，4期10 例，5期4 例。對照組外周血IL-9表達水平為(7.61±0.81) pg/mL，觀察組中1期為(12.34±1.54) pg/mL，2期為(15.73±0.82) pg/mL，3期為(17.48±1.14) pg/mL，4期為(19.57±0.92) pg/mL，5期為(21.42±1.05) pg/mL。觀察組各期與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學意義(t分別為12.31，29.23，30.26，40.24，31.45，P<0.05)，觀察組各亞組間比較，差異具有統(tǒng)計學意義(F=79.24，P<0.05)。

2.4 H-Y分期與PD患者外周血Th9的比例關(guān)系

對照組外周血Th9比例為(0.62±0.13)%，觀察組1，2，3，4，5期患者外周血Th9比例分別為(0.79±0.19)%，(1.19±0.07)%，(1.51±0.11)%，(1.69±0.09)%，(1.83±0.12)%。對照組與觀察組各期比較，差異均有統(tǒng)計學意義(t分別為5.998，17.244，26.357，27.478，18.369，P<0.05)；觀察組各亞組間比較，差異均有統(tǒng)計學意義(F=169.356，P<0.05)。

3 討 論

PD是一種老年人常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，主要特征為黑質(zhì)-基底神經(jīng)節(jié)病變，患者多發(fā)生不同程度的認知障礙和運動神經(jīng)功能障礙，近年來發(fā)病率呈逐漸上升趨勢[9-10]。病理狀態(tài)下的炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)會導致神經(jīng)元代謝紊亂，是PD的發(fā)病原因，此外，由α-突觸核蛋白的聚集導致的免疫反應(yīng)也是重要的發(fā)病原因[11-12]。有研究表明，PD患者T細胞免疫存在異常，患者CD4+T/CD8+T比值較之前降低。

CD4+T存在不同的亞群，Th9亞群是新的一種亞群。輔助性CD4+T細胞可以分為不同的亞群，Th9亞群是分泌專一的以細胞因子IL-9為主的一種新亞群。有研究表明，Th9和IL-9參與眾多的炎性反應(yīng)和免疫性疾病[13]。有學者指出，結(jié)腸炎的發(fā)生、進展均有Th9的參與。也有研究表明，Th9在結(jié)腸炎患者腸組織的顯著增高，表明Th9比例的增高在炎性反應(yīng)中對其自身的免疫反應(yīng)具有抑制作用[14]。綜上所述，Th9在外周和中樞的免疫性疾病及炎性疾病中具有重要作用，IL-9對Th9具有調(diào)節(jié)作用。本文結(jié)果表明，觀察組患者外周血中IL-9的表達水平和外周血中Th9的比例較對照組均明顯增高，且隨著病情的進展，Th9和IL-9在PD發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮了重要作用。