王 卉 陸蕓瑤 吳立翔 喻 垚 李光新 郭變琴

microRNA(miRNA)具有組織特異性、穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)，越來(lái)越多的miRNA被用來(lái)作為癌癥診斷的標(biāo)志物[1]。研究發(fā)現(xiàn)miR-126在胃腸道腫瘤、甲狀腺腫瘤、肺癌等多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)異常[2]。CA125是用于卵巢癌篩查的腫瘤標(biāo)志物，許多研究顯示，CA125在其他癌癥及免疫性疾病中也有重要作用[3]。

miR-126和CA125在乳腺癌中的研究相對(duì)較少，因此本研究檢測(cè)了乳腺癌患者腫瘤組織中miR-126的含量及血漿中CA125的含量，同時(shí)分析其與患者臨床病理特征間的關(guān)系，希望這些新的標(biāo)志物可以為乳腺癌的診斷和治療提供依據(jù)。

資料與方法

1.臨床資料:收集重慶大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2017年1月～2018年1月間凍存的石蠟包埋乳腺癌組織標(biāo)本26例，所有患者均經(jīng)病理科醫(yī)生確診，術(shù)前均未接受放療、化療，且臨床病理資料完整,患者平均年齡52.08±7.92歲。根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(AJCC)和國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)有關(guān)乳腺癌的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期5例，Ⅱ期12例，Ⅲ期7例，Ⅳ期2例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者16例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者10例。癌旁組織36例，患者平均年齡 40.89±12.27歲。回顧乳腺癌患者的臨床病理資料，獲得26例患者的血漿CA125檢測(cè)結(jié)果，隨機(jī)抽取同期檢測(cè)的健康對(duì)照血漿CA125檢測(cè)結(jié)果39例，平均年齡43.92±15.31歲。本研究經(jīng)筆者醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，且所有患者均簽署知情同意書(shū)。

2.試劑與儀器:石蠟包埋組織切片miRNA 提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技有限公司，miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、miR-126及內(nèi)參U6的特異性莖環(huán)引物購(gòu)自美國(guó)GeneCopoeia公司，SYBR?Premix Ex Taq 試劑盒購(gòu)自寶生物工程有限公司，CA125檢測(cè)試劑購(gòu)自德國(guó)西門(mén)子公司。CFX-Connect熒光定量PCR儀、NanoDrop 1000核酸濃度測(cè)定儀、Fresco17 高速冷凍離心機(jī)購(gòu)自美國(guó)Thermo公司，ADVIA Centaur CP全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀購(gòu)自德國(guó)西門(mén)子公司。

3.實(shí)驗(yàn)方法: (1)使用石蠟包埋組織切片miRNA 提取試劑盒提取乳腺癌及癌旁組織石蠟切片中的miRNA。經(jīng)NanoDrop 1000 核酸濃度測(cè)定儀檢測(cè)獲得的miRNA的純度及濃度合格后，用miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物按照 SYBR?Premix Ex Taq 試劑盒提供的方法檢測(cè)組織中miR-126的含量。上述實(shí)驗(yàn)進(jìn)行3次重復(fù)。(2)按照西門(mén)子ADVIA Centaur CP全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫儀使用說(shuō)明，檢測(cè)乳腺癌患者及健康對(duì)照血漿中CA125的含量。

結(jié) 果

1.miR-126在乳腺癌患者癌旁組織和腫瘤組織中的含量:實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)26例乳腺癌患者腫瘤組織及36例癌旁組織中miR-126的含量，結(jié)果顯示二者間miR-126的含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.139,圖1)。

圖1 miR-126在乳腺癌患者癌旁組織和腫瘤組織中的水平

2.CA125在健康對(duì)照及乳腺癌患者血漿中的含量:應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)26例乳腺癌患者化療前及39例健康對(duì)照血漿中CA125的含量，與對(duì)照組比較，乳腺癌患者血漿中CA125含量明顯升高(P=0.012,圖2)。

圖2 CA125在健康對(duì)照及乳腺癌患者血漿中的含量

3.乳腺癌患者化療前血漿中CA125的含量與臨床病理特征間的關(guān)系:以乳腺癌患者血漿中CA125含量的中位數(shù)為分界點(diǎn)，分為高含量組和低含量組。乳腺癌患者化療前血漿中CA125的含量與患者區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)(P=0.010)，與年齡(P=0.560)、腫瘤直徑(P=0.226)、臨床分期(P=0.086)等無(wú)關(guān)(表1)。

表1 乳腺癌患者化療前血漿中CA125的含量與臨床病理特征間的關(guān)系

4.CA125在乳腺癌患者化療前血漿中不同區(qū)域淋巴結(jié)臨床分類中的含量:為了進(jìn)一步分析CA125的含量與乳腺癌患者區(qū)域淋巴結(jié)臨床分類的關(guān)系(N0：無(wú)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；N1：同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可移動(dòng);N2：同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,固定或融合；N3：同側(cè)鎖骨下/上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)，筆者分析了不同區(qū)域淋巴結(jié)臨床分類中CA125的含量，結(jié)果顯示N2組CA125的含量比N0組增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.017);其他組CA125含量?jī)蓛杀容^，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖3)。

圖3 CA125在乳腺癌患者化療前不同區(qū)域淋巴結(jié)臨床分類中的含量

討 論

乳腺癌是世界女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，盡管有許多治療乳腺癌的方法，它仍是導(dǎo)致女性癌癥死亡的主要原因[4,5]。許多乳腺癌患者在初診時(shí)已到中晚期，這是導(dǎo)致乳腺癌復(fù)發(fā)和治療失敗的主要原因。因此探究一種簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)成本低且能預(yù)測(cè)乳腺癌發(fā)生、發(fā)展情況的腫瘤標(biāo)志物具有重要的意義。

CA125又稱黏蛋白16或MUC16,是一種黏蛋白家族的膜糖蛋白，由MUC16基因編碼[6，7]。CA125最早是在卵巢癌的小鼠模型中發(fā)現(xiàn)的，研究發(fā)現(xiàn)人類的胸膜、腹膜間皮細(xì)胞、乳腺導(dǎo)管、細(xì)支氣管上皮、子宮內(nèi)膜、輸卵管及卵巢等均會(huì)表達(dá)CA125。正常生理狀態(tài)下(如女性月經(jīng)期或孕期)僅有極少量的CA125進(jìn)入血液循環(huán)中[1]。臨床上CA125常被用來(lái)篩查和診斷卵巢癌，也有少量研究探討了CA125作為腫瘤標(biāo)志物在乳腺癌的診斷、監(jiān)測(cè)與預(yù)后中的作用[8]。本研究中，乳腺癌患者血漿中的CA125含量明顯高于健康對(duì)照。這一結(jié)果與多項(xiàng)研究相符。Zhang等[9]分析比較了65例乳腺癌患者和50例健康對(duì)照血清中CA125的含量，結(jié)果顯示乳腺癌患者血清中CA125含量明顯高于健康對(duì)照。另有研究報(bào)道，151例乳腺癌患者的血清CA125水平顯著高于180例健康對(duì)照[8]。筆者的另一個(gè)發(fā)現(xiàn)是CA125的含量與患者區(qū)域淋巴結(jié)臨床分類相關(guān)，這與Zhang等[9]的研究結(jié)果相一致。而且Fang等[8]研究也發(fā)現(xiàn)高表達(dá)CA125的乳腺癌患者中有54.3%存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。伴隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者CA125升高的原因可能是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)的過(guò)程中浸潤(rùn)至胸膜、腹膜間皮細(xì)胞、乳腺導(dǎo)管等，機(jī)體應(yīng)激性分泌了大量的CA125[10]。

miR-126在胃腸道腫瘤、生殖系統(tǒng)腫瘤及肺癌等中，可通過(guò)對(duì)PI3K、KRAS、EGFL7、CRK等基因的調(diào)節(jié)，參與癌細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲[2]。乳腺癌中，miR-126參與癌細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)移[11，12]。Wang等[13]研究表明，與癌旁組織比較，乳腺癌組織中miR-126的表達(dá)下調(diào)。筆者的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者腫瘤組織和癌旁組織中miR-126的含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能是由于本研究的樣本量偏少，并且收集的乳腺癌患者合并了不同的基礎(chǔ)疾病，如高血壓、糖尿病等，不同疾病狀態(tài)可能對(duì)miR-126的表達(dá)有一定的影響。

乳腺癌的轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致乳腺癌患者死亡最重要的原因之一,多數(shù)患者在轉(zhuǎn)移后5～10年死亡[14～16]。轉(zhuǎn)移性乳腺癌的早期發(fā)現(xiàn)與治療一直是研究者努力攻克的難題。CA125在乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中表達(dá)普遍升高，但其預(yù)警作用還需開(kāi)展深入研究。