張衛(wèi)，吳茜★，權(quán)志博，李彥魁，李卓

（1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，陜西 西安；2.西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西 西安）

0 引言

目前，國(guó)內(nèi)大多數(shù)檢驗(yàn)科對(duì)胸腹水標(biāo)本的細(xì)胞學(xué)計(jì)數(shù)和分類仍處于手工操作階段，該法步驟繁瑣，時(shí)間長(zhǎng)。由于受到操作人員、操作習(xí)慣、熟練程度等因素的影響，因而產(chǎn)生了結(jié)果重復(fù)性差的問(wèn)題。這不僅困擾實(shí)驗(yàn)室人員，也干擾臨床醫(yī)生為病人用藥。因此，尋求便捷的方法在保證檢驗(yàn)報(bào)告準(zhǔn)確的前提下來(lái)提高效率，縮短實(shí)驗(yàn)室內(nèi)周轉(zhuǎn)時(shí)間(TAT)為臨床提供檢驗(yàn)結(jié)果已成為當(dāng)務(wù)之急。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源與主要試劑

標(biāo)本來(lái)源于2018年8月至2019年8月，西安醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院住院患者的胸腹水標(biāo)本505份。其中，男性389例，女性107例，年齡位于15歲到80歲不等，中位年齡45歲。

儀器與試劑：Sysmex XN-350血液分析儀以及配套檢測(cè)試劑以及體液模式所用的質(zhì)控品和定標(biāo)品，Olympus 雙目顯微鏡，瑞氏-吉姆薩染色液，牛鮑計(jì)數(shù)板，微量吸管，冰醋酸。

1.2 方法

1.2.1 儀器精密度調(diào)試

儀器精密度參考文獻(xiàn)[1]，取3份通過(guò)手工法計(jì)數(shù)，白細(xì)胞總數(shù)分別為WBC＜50×106/L、WBC（50～300）×106/L、和WBC＞300×106/L的胸腹水標(biāo)本，在室溫下每份標(biāo)本用Sysmex XN-350血細(xì)胞分析儀體液模式連續(xù)測(cè)定10次，得出白細(xì)胞總數(shù)（計(jì)算出各自的標(biāo)準(zhǔn)差（SD）與變異系數(shù)（CV）。CV≤30%表示精密度在允許的范圍，并具有良好的重復(fù)性。

1.2.2 線性范圍驗(yàn)證

取1份WBC計(jì)數(shù)約500×106/L的胸腹水標(biāo)本，分別按200%、100%、80%、60%、40%、20%、10%用生理鹽水稀釋。稀釋后，每個(gè)稀釋度連續(xù)檢測(cè)5次，計(jì)算出均值。將實(shí)際值與理論值作比較，計(jì)算Y=ax+b，進(jìn)行線性回歸分析。

1.2.3 臨床胸腹水樣本的測(cè)定

將每份樣本混勻后分成三份。第一份使用Sysmex XN-350血細(xì)胞分析儀體液模式檢測(cè)，記錄其白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類結(jié)果。第二份使用牛鮑計(jì)數(shù)板充池計(jì)數(shù)白細(xì)胞，對(duì)濃度過(guò)大的標(biāo)本，用白細(xì)胞稀釋液稀釋后計(jì)數(shù)。第三份離心后，取適量沉淀涂片，瑞氏染色6min后顯微鏡分類200個(gè)細(xì)胞。WBC分類計(jì)數(shù)參照NCCLS H20-A規(guī)定的方法，為保證鏡檢結(jié)果的一致性和準(zhǔn)確性，選取2名經(jīng)過(guò)形態(tài)學(xué)考核合格的人員采用雙盲法進(jìn)行。取2人WBC分類及計(jì)數(shù)結(jié)果的均值與血細(xì)胞分析儀體液模式測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。當(dāng)兩人結(jié)果差距超過(guò)30%時(shí)，由第三人進(jìn)行復(fù)檢，選取兩名差別較小的結(jié)果取平均值。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 18.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，相關(guān)性分析采用Pearson檢驗(yàn)，計(jì)算相關(guān)系數(shù)(r)值和斜率a值，利用配對(duì)t檢驗(yàn)，計(jì)算出每組的t值和P值，當(dāng)P＜0.05時(shí)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度分析

血細(xì)胞分析儀體液模式對(duì)高、中、低3份WBC濃度的胸腹水標(biāo)本各進(jìn)行10次計(jì)數(shù)和分類測(cè)定，計(jì)算出均值(x)、標(biāo)準(zhǔn)差(SD)與變異系數(shù)(CV)。結(jié)果顯示CV均＜30%，在廠商規(guī)定的使用范圍內(nèi)。說(shuō)明本次使用的血細(xì)胞分析儀體液模式對(duì)胸腹水標(biāo)本W(wǎng)BC的計(jì)數(shù)具有良好的重復(fù)性。白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果(見表1)。

表1白細(xì)胞計(jì)數(shù)精密度結(jié)果

2.2 線性范圍驗(yàn)證

通過(guò)計(jì)算，白細(xì)胞的線性方程為Y=0.983x+0.629，R2為0.999，符合廠商規(guī)定的a值范圍1.0±0.05和R2＞0.951的要求。WBC的線性范圍為（1.02-10.3）×106/L，結(jié)果見圖1。

圖1 白細(xì)胞計(jì)數(shù)線性范圍驗(yàn)證

2.3 兩種檢測(cè)方法白細(xì)胞總數(shù)結(jié)果比較

低值組：≤50×106/L的胸腹水標(biāo)本測(cè)定后進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示低值組P＜0.05，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)中值組：（50～300）×106/L、高值組：＞300×106/L兩組胸水標(biāo)本分別進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示P值均大于0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。線性相關(guān)分析表明兩者呈正相關(guān)（r＞0.9）。結(jié)果見圖3。

圖2 低值組WBC線性分析

2.4 兩種檢測(cè)方法白細(xì)胞分類

通過(guò)上述結(jié)果，手工法和儀器法在中高值組白細(xì)胞計(jì)數(shù)上兩種方法無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。我們對(duì)高值組的白細(xì)胞進(jìn)行分類，并做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)單核細(xì)胞比例較少時(shí)，儀器法對(duì)白細(xì)胞的分類和手工法分類相比變異系數(shù)較小，但是當(dāng)單核細(xì)胞比例較大時(shí)，手工法和儀器法在白細(xì)胞分類上結(jié)果相差較大。結(jié)果見圖4。

3 討論

圖3 中高值組WBC線性分析

圖4 儀器法與手工法白細(xì)胞分類CV值比較

胸水細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類對(duì)臨床診斷疾病有重要的意義，可用于病情的預(yù)測(cè)、轉(zhuǎn)歸、以及療效觀察。然而，這項(xiàng)檢查操作的金標(biāo)準(zhǔn)主要是依靠手工計(jì)數(shù)和顯微鏡分類[2]，該法有以下缺點(diǎn)，第一，耗時(shí)，在較短時(shí)間內(nèi)難以將結(jié)果反饋給臨床，耽誤治療。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)難以提高工作效率。第二，受技術(shù)誤差影響較大，由于操作人員、熟練程度的不同，結(jié)果也不盡相同。因而，尋求一種更為便捷快速的方法來(lái)檢查體液細(xì)胞，已變得尤為重要。

近年來(lái)，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室工作者提出用血球儀或者全自動(dòng)尿沉渣儀來(lái)對(duì)體液細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類[3]。Sysmex XN-350血液分析儀采用半導(dǎo)體激光原理結(jié)合流式細(xì)胞和核酸熒光染色技術(shù)對(duì)血白細(xì)胞進(jìn)行分類和計(jì)數(shù)。本實(shí)驗(yàn)采用Sysmex XN-350血球儀的體液模式對(duì)胸腹水標(biāo)本進(jìn)行計(jì)數(shù)和分類，為驗(yàn)證該檢測(cè)的準(zhǔn)確性，我們對(duì)儀器法結(jié)果與手工法結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較分析。結(jié)果顯示，在精密度和重復(fù)性滿足要求的情況下，中、高值標(biāo)本的白細(xì)胞計(jì)數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是低值標(biāo)本的儀器法和手工法結(jié)果差別較大。Aulesa等人對(duì)白細(xì)胞＜100×106/L的標(biāo)本進(jìn)行手工法計(jì)數(shù)時(shí)，發(fā)現(xiàn)兩名人員計(jì)數(shù)結(jié)果變異系數(shù)可達(dá)30%[4]，所以差異原因較大也有可能是手工法導(dǎo)致的。XN-350血細(xì)胞分析儀體液模式檢測(cè)體液細(xì)胞下限比拜耳的 ADVIA 120血細(xì)胞分析儀體液模式檢測(cè)體液細(xì)胞下限47×106/L略高，和SysmexXE-2100血細(xì)胞分析儀體液模式檢測(cè)體液細(xì)胞下限 50×106/L 相同[2]。有學(xué)者認(rèn)為在胸腹水標(biāo)本細(xì)胞數(shù)較低的情況下，結(jié)果應(yīng)以儀器法為準(zhǔn)，以100×106/L的標(biāo)本為例， ADVIA120在檢測(cè)時(shí)，大概要計(jì)數(shù)700個(gè)細(xì)胞，而手工法一般只分100個(gè)細(xì)胞[6]。然而我們發(fā)現(xiàn)，隨著細(xì)胞濃度的減少，分類時(shí)高熒光細(xì)胞（HF）比例會(huì)假性增加。臨床上大多數(shù)胸腹水標(biāo)本細(xì)胞數(shù)量都是高于該值的[7]，在本次實(shí)驗(yàn)的505例標(biāo)本中，僅有25例標(biāo)本細(xì)胞數(shù)低于50×106/L。

中高值標(biāo)本手工法和儀器法計(jì)數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明XN-350在特定條件下可以替代手工法計(jì)數(shù)。在分類上，當(dāng)單核細(xì)胞比例較低的情況下，白細(xì)胞分類相差不大，但是當(dāng)單核細(xì)胞比例較高時(shí)，儀器法計(jì)數(shù)的單核細(xì)胞比例比手工法高，究其原因儀器可能將間皮細(xì)胞，某些腫瘤細(xì)胞分入單核細(xì)胞內(nèi)[8]。所以當(dāng)用儀器法測(cè)定胸腹水標(biāo)本時(shí)，若提示單核細(xì)胞過(guò)高，應(yīng)進(jìn)行手工法分類復(fù)檢。此外，在對(duì)細(xì)胞數(shù)量過(guò)多的標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，儀器提示“細(xì)胞數(shù)量過(guò)多，無(wú)法檢測(cè)”時(shí)，應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋到（100-300）×106/L時(shí)檢測(cè)，手工法和儀器法呈正線性相關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)表明XN-350可以用來(lái)做胸腹水標(biāo)本的細(xì)胞學(xué)分析，然而卻有一定的限制。因此，在接受到標(biāo)本后，應(yīng)對(duì)病例進(jìn)行查看，以下情況建議手工法來(lái)完成操作，1.懷疑為惡性腫瘤病人的胸水；2.用儀器法分類時(shí)，單核細(xì)胞比例過(guò)高時(shí)；3.細(xì)胞數(shù)過(guò)高或者高低的標(biāo)本。