武子敬 ，李佳旭 ，胡彥武 ，杜躍中 ，鐘乃順 ，馬雙欣

（1.通化師范學(xué)院，通化134002；2.吉林人參研究院，通化134001；3.通化市朝鮮族學(xué)校，通化134001）

運(yùn)動(dòng)耐力是反映機(jī)體疲勞最直接、客觀的指標(biāo)。大量研究證明，劇烈運(yùn)動(dòng)可以促使活性氧的產(chǎn)生，而活性氧可導(dǎo)致機(jī)體運(yùn)動(dòng)性疲勞及運(yùn)動(dòng)損傷。適量的活性自由基承擔(dān)著免疫和信號(hào)傳遞等重要的生理功能，但過(guò)多的自由基則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜上脂類物質(zhì)的過(guò)氧化、細(xì)胞膜破壞等一系列問(wèn)題[1]。所以本論文主要研究松塔多糖是否能通過(guò)提高機(jī)體抗氧化能力，防止自由基增多，增強(qiáng)小鼠運(yùn)動(dòng)機(jī)能，來(lái)延緩小鼠的疲勞產(chǎn)生，從而提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力[2]。

松塔，為松科植物的種子，成熟后內(nèi)有松子。長(zhǎng)約6～10cm，寬約3cm。呈棕褐色，具有多層鱗片，鱗片中夾著松子。松塔的主要成分包括萜類、木質(zhì)素、烯類、醇類、酮類等[3，4]，其中多糖是松塔主要活性成分之一。本文將通過(guò)小鼠疲勞轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)及肝糖原含量的測(cè)定，對(duì)松塔多糖的提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力作用進(jìn)行研究。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

由長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心提供的雌性小鼠(合格證號(hào)：SCXK(遼)2015-0001)，體重 20～22g。 在恒溫(22±2)℃的條件下；相對(duì)濕度(65±4)%。小鼠自由進(jìn)食和飲水。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

小鼠灌胃器；疲勞轉(zhuǎn)棒儀（成都泰盟科技有限公司ZB-200）；電子天平（上海越平科學(xué)儀器有限公司）；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) （上海儀電分析儀器有限公司）；水浴鍋（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司）；移液器；試管；玻璃棒；燒杯。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

無(wú)水乙醇（分析醇）；甲醇（分析醇）；濃硫酸（分析醇）；蒸餾水；雙蒸水；糖原試劑盒(南京建成生物工程研究所20181206)。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取松塔多糖

取200g的干松塔，每次用10倍的水提取2h，重復(fù)進(jìn)行2次。將2次的提取液過(guò)濾并濃縮至200mL。加入4倍的無(wú)水乙醇，置于4℃的冰箱中24h，然后抽濾，然后微熱干燥24h，得到粗制松塔多糖。將粗制松塔多糖溶于蒸餾水中，用適量6%H2O2溶液脫色，在50℃的水浴鍋，讓其恒溫反應(yīng)30min，過(guò)濾。濾液放入離心機(jī)4500r·min-1中10min，上清液濃縮至適量，干燥后得到精制的松塔多糖[5，6]。

2.2 確定給藥劑量

將小鼠隨機(jī)分成4組，每組10只。分別設(shè)置空白組進(jìn)行對(duì)照，給予同樣劑量的雙蒸水；然后將松塔多糖配置高、中、低三個(gè)劑量組，分別為 2.4mg·kg-1、1.8mg·kg-1、1.2mg·kg-1。

2.3 抗疲勞實(shí)驗(yàn)

連續(xù)給小鼠灌藥7d，第7d末次給藥30min后，設(shè)定疲勞轉(zhuǎn)棒儀轉(zhuǎn)速16r·min-1，當(dāng)轉(zhuǎn)棒勻速運(yùn)動(dòng)時(shí)，將小鼠放在旋轉(zhuǎn)棒上，同時(shí)遮擋通道落棒感應(yīng)器，系統(tǒng)發(fā)出提示音，觸發(fā)計(jì)時(shí)器計(jì)時(shí)，當(dāng)任意通道的小鼠落棒時(shí)，對(duì)應(yīng)的液晶顯示器上的通道將停止計(jì)時(shí)。統(tǒng)計(jì)各組小鼠在轉(zhuǎn)棒上的時(shí)間，并比較對(duì)照組和給藥組小鼠的在疲勞轉(zhuǎn)棒儀上停留的時(shí)間長(zhǎng)短，數(shù)據(jù)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 肝糖原的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)之后注意要將小鼠迅速處死，不可停留過(guò)長(zhǎng)時(shí)間，會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，然后將小鼠的肝臟拿出。用NaCl水溶液沖洗后，表面的水分吸干，稱取一定重量大約75mg[7]。按一定比例加入堿液體積后于試管中水浴加熱20min。注意水分蒸發(fā)等因素，要在試管口扎保鮮膜并打幾個(gè)孔。水浴結(jié)束之后要注意冷卻。另取一直試管，加入雙蒸水7.2mL，按表1加入試劑制成含量為1%的肝糖原檢測(cè)液，沸水浴加熱5min，冷卻后測(cè)定吸光度值，注意要在620nm下測(cè)定[8]。計(jì)算結(jié)果，填入表3。

表1 試劑添加量

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 松塔多糖對(duì)小鼠抗疲勞實(shí)驗(yàn)的影響

不同濃度的松塔多糖對(duì)延長(zhǎng)小鼠在疲勞轉(zhuǎn)棒儀上的時(shí)間有差別。松塔多糖低劑量組在疲勞轉(zhuǎn)棒儀上的停留時(shí)間與空白對(duì)照組無(wú)顯著差別，而松塔多糖中劑量組和松塔多糖高劑量組小鼠在疲勞轉(zhuǎn)棒儀上的時(shí)間明顯比空白對(duì)照組小鼠時(shí)間長(zhǎng)。由此得出松塔多糖能夠延緩小鼠疲勞產(chǎn)生，增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)耐力。

3.2 肝糖原含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析

松塔多糖低劑量的組、中劑量的組和高劑量的組與空白組相比小鼠體內(nèi)的肝糖原含量均有明顯提高。說(shuō)明三組不同濃度的松塔多糖均能夠增加小鼠體內(nèi)的肝糖原含量。

3.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以X±s表示，應(yīng)用軟件對(duì)其進(jìn)行方差分析，實(shí)驗(yàn)結(jié)果整理見(jiàn)表2。P＜0.05為數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.01差異極顯著[9]。通過(guò)疲勞轉(zhuǎn)棒儀實(shí)驗(yàn)可以得出，松塔多糖中劑量組和松塔多糖高劑量組能夠明顯延長(zhǎng)疲勞轉(zhuǎn)棒儀時(shí)間，具有抗疲勞的作用。松塔多糖低劑量組、松塔多糖中劑量組、松塔多糖高劑量組的小鼠肝糖原含量與空白對(duì)照組相比，都有明顯的提高。說(shuō)明松塔多糖能夠提高小鼠運(yùn)動(dòng)能力，增加運(yùn)動(dòng)耐力。

表2 不同劑量的松塔多糖對(duì)小鼠耐力實(shí)驗(yàn)的影響 （X±s）

4 討論

糖是肌肉活動(dòng)時(shí)能量的主要來(lái)源，機(jī)體內(nèi)其儲(chǔ)存形式主要為血糖和糖原，運(yùn)動(dòng)后即刻，肝糖原由于在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中作為能源物質(zhì)被利用，含量均明顯減少[9]。松塔多糖在對(duì)運(yùn)動(dòng)耐力的作用可能與肝糖原的含量有關(guān)，體內(nèi)肝糖原儲(chǔ)備量的高低是衡量機(jī)體抗疲勞能力強(qiáng)弱的重要指標(biāo)[14]。小鼠疲勞轉(zhuǎn)棒儀的時(shí)間也作為反映運(yùn)動(dòng)耐力的另一重要指標(biāo)。

有研究表明，疲勞最主要的表現(xiàn)是運(yùn)動(dòng)能力的降低，而肝糖原又是能量的儲(chǔ)備形式，糖原的含量能反映出疲勞發(fā)生的快慢或程度，是評(píng)價(jià)抗疲勞作用的常用指標(biāo)，在長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)動(dòng)中，肝糖原會(huì)減少，是造成運(yùn)動(dòng)疲勞的直接原因[10]。因此，考察運(yùn)動(dòng)后機(jī)體中肝糖原的含量，能夠間接說(shuō)明機(jī)體運(yùn)動(dòng)耐力的強(qiáng)弱。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，松塔多糖能延長(zhǎng)小鼠在疲勞轉(zhuǎn)棒儀的運(yùn)動(dòng)時(shí)間，顯著提高了小鼠體內(nèi)肝糖原的含量，延長(zhǎng)了糖原的供能時(shí)間，增強(qiáng)了小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力。