吳艷輝，王杰偉，何艷玲

(北京陸橋技術(shù)股份有限公司，北京 100123)

病原微生物是食品安全最大的威脅之一。隨著經(jīng)濟(jì)全球化進(jìn)程的加快，國(guó)際食品貿(mào)易的迅速增加，食品中病原微生物的準(zhǔn)確快速鑒定越來越受到重視[1-4]。已有食品中微生物檢驗(yàn)主要采用生化鑒定方法[5-8]，該方法操作過程復(fù)雜，并具有一定的危險(xiǎn)性[9]?；趯?shí)際生產(chǎn)的需求，本實(shí)驗(yàn)室研制出一種克羅諾桿菌屬和單增李斯特氏菌干制生化鑒定(DBI)試劑盒，通過標(biāo)準(zhǔn)菌株和樣品分離菌株的鑒定試驗(yàn)，并與生化管和API 20E細(xì)菌鑒定系統(tǒng)比對(duì)，驗(yàn)證其鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性，以期滿足大量樣品準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、高效的檢測(cè)需求。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種

標(biāo)準(zhǔn)菌株：阪崎克羅諾桿菌ATCC29544、ATCC51329，大腸埃希菌CMCC44103、ATCC25922，單增李斯特氏菌ATCC19111、ATCC19115，綿羊李斯特氏菌ATCC19119，均由本實(shí)驗(yàn)室保存。

樣品分離菌株：阪崎克羅諾桿菌疑似菌株14株分離自市售嬰幼兒奶粉；單增李斯特氏菌疑似菌株30株分離自市售乳制品、肉制品及蔬菜。

1.1.2 培養(yǎng)基及試劑

腦心浸出液(BHI)肉湯、大豆酪蛋白瓊脂(TSA)培養(yǎng)基、阪崎克羅諾桿菌生化鑒定套裝及DBI試劑盒、單增李斯特氏菌生化鑒定套裝及DBI試劑盒均由北京陸橋技術(shù)股份有限公司提供；API鑒定系統(tǒng)及配套鑒定試劑為法國(guó)生物梅里埃公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 菌株活化

將標(biāo)準(zhǔn)菌株及樣品分離菌株分別接種至BHI肉湯，36 ℃培養(yǎng)18～24 h，使其活化，并轉(zhuǎn)接至TSA培養(yǎng)基備用。

1.2.2 菌株生化鑒定比對(duì)試驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)菌株及樣品分離菌株生化管鑒定試驗(yàn)分別按照各自對(duì)應(yīng)的生化鑒定套裝說明書進(jìn)行，DBI試劑盒鑒定試驗(yàn)與API細(xì)菌鑒定系統(tǒng)分別按照各自對(duì)應(yīng)的說明書進(jìn)行。比較3種生化鑒定試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株的對(duì)比試驗(yàn)

阪崎克羅諾桿菌及單增李斯特氏菌傳統(tǒng)生化管與DBI試劑盒、API生化鑒定條鑒定結(jié)果分別見表1和表2。由上述結(jié)果可知，在阪崎克羅諾桿菌及其質(zhì)控菌大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株鑒定中，DBI試劑盒與生化管對(duì)其所有生化項(xiàng)目鑒定結(jié)果完全一致，與GB 4789.40—2010《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 阪崎克羅諾桿菌檢驗(yàn)》判定標(biāo)準(zhǔn)一致；在李斯特氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株鑒定中，培養(yǎng)24 h后，DBI試劑盒鑒定結(jié)果與GB 4789.30—2010《食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)》判定標(biāo)準(zhǔn)一致，而傳統(tǒng)生化管中的鼠李糖與木糖則為假陰性，需繼續(xù)培養(yǎng)至48 h才出現(xiàn)陽性結(jié)果，表明DBI試劑盒在保證鑒定結(jié)果準(zhǔn)確的前提下，將鑒定時(shí)間縮短了24 h左右。

表1 阪崎克羅諾桿菌生化鑒定結(jié)果

注：-表示陰性，+表示陽性，/表示未檢出。表2同。

表2 單增李斯特氏菌生化鑒定結(jié)果

2.2 樣品分離菌株的對(duì)比試驗(yàn)

DBI試劑盒與生化管對(duì)樣品分離菌株鑒定結(jié)果見表3。由表可知，DBI試劑盒與生化管對(duì)從樣品中分離出的阪崎克羅諾桿菌疑似菌株鑒定結(jié)果完全一致，對(duì)單增李斯特氏菌疑似菌株鑒定結(jié)果的相符率也較高，達(dá)到90%以上，表明DBI試劑盒的鑒定結(jié)果準(zhǔn)確，可用于食品中致病菌的生化鑒定。

表3 DBI試劑盒與生化管生化鑒定結(jié)果的比較

3 討論

本研究研制的DBI試劑盒是將生化鑒定所需的所有生化試劑，經(jīng)過特殊工藝干制于特制的生化鑒定卡上，接入菌液后培養(yǎng)到一定時(shí)間，即可通過顏色變化或滴加試劑后變色來觀察結(jié)果。DBI試劑盒將生化試劑進(jìn)一步微量化，在菌懸液濃度不變的條件下，增加了體系中的菌體濃度，從而加快了反應(yīng)速度，縮短了檢測(cè)時(shí)間，尤其是在單增李斯特氏菌檢測(cè)中，糖類發(fā)酵項(xiàng)目反應(yīng)時(shí)間相對(duì)于生化管大約縮短24 h。通過對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株的鑒定試驗(yàn)，DBI試劑盒準(zhǔn)確率達(dá)到100%，與生化管同時(shí)對(duì)從樣品分離出的阪崎克羅諾桿菌和單增李斯特氏菌疑似菌株進(jìn)行鑒定，兩者相符率分別達(dá)到100%和94.1%。綜上所述，本試劑盒操作簡(jiǎn)單，對(duì)于大批量樣品檢測(cè)具有很高的實(shí)用價(jià)值，該檢測(cè)方法耗時(shí)短，提高了檢測(cè)效率，且準(zhǔn)確度高，與傳統(tǒng)液體生化管的鑒定結(jié)果基本上完全一致，在食品致病菌檢測(cè)中應(yīng)用前景廣闊。