李永林,夏志遠(yuǎn),鄭哲,孫凱,莫耀南
(1.河南科技大學(xué)法醫(yī)學(xué)院,河南 洛陽 471023;2.迪安鑒定虛擬解剖研究中心,北京 100192)
19世紀(jì)以來,電化學(xué)分析法發(fā)展迅速,是一種便捷、靈敏、準(zhǔn)確的微量和痕量分析方法,可分為電導(dǎo)分析法、電位分析法、伏安法等[1]。其中,電導(dǎo)分析法是通過測量溶液的電導(dǎo)率(electrical conductivity,EC)來表示溶液傳導(dǎo)電流的能力,其能力大小主要與溶液中離子和導(dǎo)電小分子物質(zhì)的濃度成正比。尸體腐敗是多種組織成分分解的綜合過程,以往的研究方法注重研究某種成分的變化規(guī)律,對腐敗進(jìn)程的復(fù)雜性難以準(zhǔn)確反映。EC反映的是溶液中多種帶電物質(zhì)的總體濃度,從宏觀上對腐敗過程進(jìn)行定量分析,更符合尸體腐敗分解規(guī)律。通過測定EC研究死后尸體腐敗規(guī)律可以為法醫(yī)學(xué)研究提供理論基礎(chǔ),本文將近年來EC在生物組織新鮮程度測定、推斷死亡時間和法醫(yī)埋藏學(xué)(forensic taphonomy)3方面的研究成果進(jìn)行綜述,以期為相關(guān)研究提供參考資料。
食品科學(xué)對肉類的研究較為成熟,在評價肉類新鮮程度方面已有較為成熟的指標(biāo),如EC、揮發(fā)性鹽基氮(total volatile basic nitrogen,TVB-N)、pH值與菌落總數(shù)等[2-3]。其中TVB-N是各種蛋白質(zhì)在酶和細(xì)菌的作用下腐敗分解產(chǎn)生的堿性含氮物質(zhì)的總和。TVB-N可以客觀反映肉類的變質(zhì)腐敗程度,是我國國家標(biāo)準(zhǔn)指標(biāo),但TVB-N的測定操作相對復(fù)雜且耗時,不利于樣本的快速檢測。在尋找測定肉類新鮮程度和貨架期指標(biāo)的過程中,有學(xué)者[4-5]發(fā)現(xiàn),不同種肉類浸漬液EC與TVB-N呈高度線性相關(guān),可實現(xiàn)對肉類品質(zhì)進(jìn)行簡便、快速的評價。作為評價肉類新鮮程度的一種簡便、靈敏的檢測指標(biāo),EC已經(jīng)廣泛應(yīng)用于肉類產(chǎn)品新鮮度的檢測。例如,YAO等[6]運用EC對鯽魚新鮮度與儲藏溫度、儲藏時間的關(guān)系進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)EC值隨儲藏時間的延長而增加,溫度越高,EC值變化率越大,并建立了基于EC評價鯽魚新鮮度的動力學(xué)模型。楊秀娟等[7]應(yīng)用EC評價豬肉的新鮮度,發(fā)現(xiàn)隨著肉的腐敗變質(zhì),EC值逐漸增加,認(rèn)為豬肉EC值≤1.37mS/cm,可評為新鮮豬肉。盡管法醫(yī)學(xué)尸體腐敗與食品科學(xué)肉類變質(zhì)過程存在一定的差異,如在體與離體組織的差異、腐敗程度的差異等,但離體組織在體外同樣發(fā)生組織自溶、腐敗,并可以觀察到有規(guī)律的變化,借鑒和改進(jìn)食品科學(xué)對離體組織的研究方法,使之與法醫(yī)尸體組織變化研究相適應(yīng),可以為法醫(yī)學(xué)研究提供新的思路。XIA等[8]建立了與法醫(yī)學(xué)尸體組織腐敗研究相適應(yīng)的TVB-N電導(dǎo)滴定測定法,研究并測定了大鼠死后13d內(nèi)肌肉TVB-N的含量變化,發(fā)現(xiàn)TVB-N與PMI存在高度相關(guān)性,為尸體腐敗程度評估及晚期PMI推斷提供了基本方法。
死亡時間(postmortem interval,PMI)推斷始終是法醫(yī)病理學(xué)研究的熱點與難點,傳統(tǒng)方法主要依靠死后尸體變化或尸體內(nèi)源性指標(biāo)[9-10]。機體死后因受物理、化學(xué)和生物學(xué)等各種內(nèi)外因素的作用,在尸體上發(fā)生各種不可逆的、漸進(jìn)的變化。國內(nèi)外學(xué)者依據(jù)死后變化推斷PMI提出了許多新的方法[8-10],從傳統(tǒng)的大體觀察逐步發(fā)展到組織學(xué)、物理化學(xué)、生物化學(xué)、光譜學(xué)、代謝組學(xué)等先進(jìn)的科學(xué)技術(shù)手段。但是,由于死后變化受外界環(huán)境、尸體本身等因素的影響,推斷PMI的單一方法存在諸多限制,問題依然沒有得到很好的解決[11-12]。尋找客觀、精準(zhǔn)且簡便的方法研究死后變化對于準(zhǔn)確推斷PMI具有重要意義[13]。
隨著尸體的腐敗,在各種酶類和微生物作用下,組織內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂肪等大分子逐漸發(fā)生分解,小分子物質(zhì)不斷增多,尸體組織EC發(fā)生改變。有研究[14]表明,尸體肌肉組織EC隨PMI的延長而增加,EC值呈現(xiàn)穩(wěn)定期、快速上漲期、緩慢上漲期的階段性變化,肌肉EC變化結(jié)果與法醫(yī)尸體腐敗進(jìn)程相似。該研究[15]進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),大鼠死后肌肉EC與TVB-N具有良好的線性關(guān)系,說明兩指標(biāo)在腐敗程度量化上具有一致性,EC可替代TVB-N作為評價尸體肌肉腐敗程度的指標(biāo)。
由于機體各器官組織的結(jié)構(gòu)及其致密程度、解剖位置、細(xì)菌等因素的影響,各器官組織腐敗發(fā)展速度不相同,因此不同組織的EC隨PMI的變化規(guī)律存在差異。CANTüRK等[16]對人體死后前臂皮下組織EC變化進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)死亡后細(xì)胞膜破裂,電解質(zhì)不斷流向細(xì)胞外,皮下組織EC隨PMI的延長而增加。鄭哲等[17]測定了大鼠死后腦、肝、肺、骨骼肌的EC值,研究結(jié)果表明,4種組織器官的EC值隨PMI變化呈現(xiàn)出不同的增長速率,4種組織器官EC整體上與PMI相關(guān)性均較好。之后的研究還發(fā)現(xiàn),大鼠死后肝、脾浸漬液的EC變化與早期PMI相關(guān)[18]。不同組織EC的時序性變化研究,可提高對于尸體整體腐敗規(guī)律的認(rèn)識。
機體死后變化受溫度、濕度、衣著、死亡原因等多種因素影響,溫度是占比重較大的影響因素之一[19]。周睿卿等[20]對20℃和30℃條件下家兔死后玻璃體液的EC隨PMI的變化規(guī)律進(jìn)行研究,結(jié)果顯示,兩種溫度下曲線變化規(guī)律相似,EC均隨PMI延長而持續(xù)升高,30℃條件下眼球腐敗較快,與人和動物死后眼球腐敗規(guī)律大致相同,但隨著晚期尸體的眼球腐敗破裂,玻璃體液采集較為困難。此外,有學(xué)者[21]比較了室外環(huán)境溫度和室內(nèi)恒溫環(huán)境條件下肌肉浸漬液EC值的變化,發(fā)現(xiàn)兩種環(huán)境條件下EC隨放置時間的延長而逐漸增大,但室外環(huán)境(5.7~28.2℃)下EC變化受溫度影響呈現(xiàn)晝夜變化速率的差別,表現(xiàn)為白天變化快,夜晚變化較慢,在低于13℃時,EC值增長緩慢。
法醫(yī)埋藏學(xué)是對尸體分解過程、尸體周圍環(huán)境進(jìn)行研究,從而為推斷PMI或埋藏時間、發(fā)現(xiàn)埋藏地點、重建案件現(xiàn)場等犯罪調(diào)查工作提供線索。土中埋藏的尸體由于埋藏環(huán)境、微生物、個體差異等因素的影響,其腐敗分解速率與地表尸體存在較大差異,同時由于埋藏地點隱蔽難以發(fā)現(xiàn),導(dǎo)致在案件調(diào)查時,根據(jù)土中高度腐敗及完全白骨化的尸體尋找有效證據(jù)存在較大困難[22-23]。近年來,越來越多的方法用于法醫(yī)埋藏學(xué)研究,如探地雷達(dá)、電磁探測法、遙感技術(shù)、土壤探針、地質(zhì)化學(xué)調(diào)查等[24-25]。
PRINGLE等[26-29]研究了墓穴中豬尸體附近土壤水樣EC在6年埋藏期間的動態(tài)變化,結(jié)果發(fā)現(xiàn):EC在2周即達(dá)到對照組的兩倍;12~307d,EC快速上漲;307~671 d,EC呈緩慢上漲趨勢;671~840 d,EC快速下降;840~1 621 d,緩慢下降到與對照組地下水樣的EC相同。電導(dǎo)率在研究期間的變化經(jīng)過校正后可以歸類成6個線性回歸曲線,EC與埋藏時間曲線擬合程度較好(R2為0.72~0.99),同時,對另一個模擬墓穴中腐敗液體EC測定,推斷的埋藏時間與實際埋藏時間有12%的誤差。此外,該研究認(rèn)為EC的異常變化可為發(fā)現(xiàn)埋藏地點提供信息,可從墓穴中反復(fù)提取樣本液體,簡便、快速測定EC,且實驗樣本量小,為埋藏學(xué)研究提供了基本方法。
通過動物模擬實驗來評估尸體在埋藏環(huán)境中的腐敗分解過程是常用的研究方法。有學(xué)者[30]取埋藏的動物尸體(如豬、羊、牛)骨骼肌組織的周圍土壤,與去離子水按比例配成浸漬液,進(jìn)行EC測定發(fā)現(xiàn),土壤浸漬液EC隨埋藏時間均呈現(xiàn)上漲趨勢,但動物模型與尸體在土壤中的腐敗分解過程存在較大差異。也有學(xué)者[31]對用豬模擬的地下墓穴進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)隨著豬的腐敗,腐敗液體流入土壤中,尸體附近的地下水樣離子濃度增加,具有更高的EC,在27~139d和139~307d的研究期內(nèi),EC與埋藏時間呈直線正相關(guān),EC升高引起的低電阻率異常有助于探測地下墓穴。
生物體不同組織內(nèi)導(dǎo)電物質(zhì)空間分布和密度的差異,使得生物體EC呈現(xiàn)空間異質(zhì)性,這為生物EC成像奠定了理論基礎(chǔ)。目前,生物組織EC成像是生物醫(yī)學(xué)功能成像研究的重要領(lǐng)域之一,其操作簡便和無創(chuàng)的特點賦予了其潛在的優(yōu)勢和重要的研究價值[32-33]。已有研究[34]表明,EC可用于血管源性病變組織的探查,如腫瘤因其血液供應(yīng)異常增高,其EC顯著增大。也有研究[35-36]運用磁共振電阻抗成像技術(shù)(magnetic resonance electrical impedance tomography,MREIT)研究死后犬腦、豬腿EC成像,結(jié)果表明,生物組織內(nèi)電流強度與組織空間EC呈現(xiàn)顯著相關(guān)性。最重要的是,生物組織EC成像技術(shù)為研究法醫(yī)學(xué)尸體EC的時空分布和虛擬尸體檢驗提供了新的思路。人體死后EC改變規(guī)律的探究可能為早期和晚期PMI推斷帶來全新的研究模式。尸體EC全息成像,也有可能為死亡原因、活體損傷時間和損傷機制的研究提供嶄新的思路。另外,尸體EC非接觸的磁場感應(yīng)斷層成像(contactless magnetic induction tomography,CMIT)技術(shù),憑借其非接觸式和無損檢驗的特點[37],可能成為繼CT和MRI之后的一種新型虛擬解剖技術(shù)。
機體死后變化是一個復(fù)雜的過程,與之相關(guān)的死亡時間推斷、埋藏時間、腐敗尸體死亡原因診斷等也因此成了法醫(yī)學(xué)研究的難點問題。目前,生物離體組織EC與新鮮程度、放置時間或貨架期的相關(guān)性已經(jīng)得到證實。在法醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,EC用于測定尸體組織腐敗程度、推斷早期或晚期PMI、探查隱匿尸體和估計埋藏時間也得到了初步的論證。未來隨著生物體EC成像技術(shù)的進(jìn)一步完善,尸體EC全息成像的研究也將成為可能。有理由相信,隨著尸體EC全息成像技術(shù)的應(yīng)用,開啟法醫(yī)學(xué)腐敗尸體死亡原因分析、損傷機制和時間相關(guān)問題全新研究模式,將成為現(xiàn)實。