易先國(guó)

（信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院，河南信陽(yáng) 464000）

從植物中提取的生物活性物質(zhì)對(duì)改善家禽生產(chǎn)性能和免疫狀態(tài)具有重要作用。植物提取物對(duì)家禽的有益作用包括刺激采食量、改善生長(zhǎng)和產(chǎn)蛋性能、激活免疫系統(tǒng)、抗菌和抗氧化作用。馬鞭草是一種多年生草本植物，在東北亞國(guó)家廣泛生長(zhǎng)，傳統(tǒng)上，它作為一種中草藥被用于保護(hù)文物和治療胃炎和動(dòng)脈粥樣硬化。馬鞭草汁由漆酚（60% ～65%）、膠狀底物（4% ～8%）、糖蛋白（2% ～5%）、漆酶（1%）和水（20% ～25%）組成，漆酚是具有抗菌、抗氧化活性的一種油性有機(jī)成分（陳興麗等，2010）。由于上述作用，馬鞭草可以作為飼料添加劑以提高豬和肉雞的健康狀況和生產(chǎn)性能（Cho 等，2012 ；Lohakare 等，2006）。但有報(bào)道稱，漆酚作為馬鞭草的主要抗原，在動(dòng)物中表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗原性，可能具有毒性作用（Cheong 等，2010）。因此，建議在實(shí)際使用前進(jìn)行脫毒，如采用聚合工藝或通過(guò)簡(jiǎn)單的加熱。但在動(dòng)物試驗(yàn)中使用的馬鞭草并沒有被脫毒，盡管鮮有研究報(bào)道指出未脫毒的馬鞭草具有有害影響（劉珈伲等，2015 ；Lohakare 等，2006）。因此，本試驗(yàn)以蛋雞為研究動(dòng)物，評(píng)估日糧脫毒馬鞭草添加水平對(duì)其產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、血清、肝臟脂質(zhì)組成及盲腸微生物菌群的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)將200 只52 周的海蘭褐殼蛋雞，隨機(jī)分為4 組，每組50 只（10 只/ 重復(fù)）。對(duì)照組日糧采用玉米- 小麥- 豆粕型，其他3 組日糧分別在對(duì)照組日糧中添加0.05%、0.1% 和0.2% 的脫毒馬鞭草。試驗(yàn)共進(jìn)行6 周，蛋雞基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)成分見表1。試驗(yàn)期間雞只自由采食和飲水，雞舍環(huán)境維持在（20±3）℃，光周期16 h 光照、8 h 黑暗。每天均添加新鮮飼料，每周記錄飼料攝入量。

1.2 生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì) 每天記錄雞蛋數(shù)量和稱量蛋重。計(jì)算產(chǎn)蛋量和平均蛋重時(shí)剔除異常雞蛋（即不包括軟殼、無(wú)殼或破蛋）。分別在試驗(yàn)第2、4 和6 周，從每個(gè)重復(fù)體中分別收集5 枚雞蛋，稱重后，在室溫下保存過(guò)夜，以便后續(xù)分析。用蛋殼強(qiáng)度儀測(cè)定完整雞蛋的蛋殼強(qiáng)度，采用千分尺測(cè)定蛋殼厚度，全自動(dòng)蛋品質(zhì)儀測(cè)定蛋殼顏色、蛋白高度和哈夫單位，用羅氏比色扇測(cè)定蛋黃顏色。

表1 蛋雞基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)成分

1.3 樣品采集與分析 在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇2 只雞稱重后，翅下靜脈采血，血液樣本收集在促凝真空管中，4℃下2000×g 離心15 min，置于-80℃保存至分析。采用試劑盒比色法測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）和谷轉(zhuǎn)氨酶（GPT）活性和總膽固醇的含量。收集肝臟和腹脂后稱重，-80℃保存。用氯仿/ 甲醇（2 ∶1 體積比）從蛋黃和肝臟中提取總脂，以正己烷：二乙醚：甲酸（85 ∶15 ∶0.1 體積比）為顯色溶劑，在硅膠柱上用薄層色譜法分離肝臟和蛋黃中各脂質(zhì)組分的含量。

無(wú)菌取盲腸內(nèi)容物進(jìn)行微生物檢測(cè)。在無(wú)菌、冰冷的PBS 溶液中，將盲腸內(nèi)容物勻漿，稀釋后涂于選擇性瓊脂上進(jìn)行目標(biāo)菌株的計(jì)數(shù)。分別用總平板計(jì)數(shù)瓊脂培育基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和乳酸細(xì)菌培養(yǎng)基對(duì)總細(xì)菌、大腸菌和乳酸菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。每片37℃孵育24 ～72 h，計(jì)數(shù)菌落。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 所得數(shù)據(jù)采用SAS 軟件一般線性模型程序進(jìn)行分析。采用正交多項(xiàng)式對(duì)比法測(cè)定日糧脫毒馬鞭草不同添加水平對(duì)各指標(biāo)的線性和二次曲線效應(yīng)。如果P ＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 脫毒馬鞭草對(duì)產(chǎn)蛋性能、組織器官相對(duì)重量的影響 由表2 可知，日產(chǎn)蛋量隨日糧脫毒馬鞭草添加水平的增加表現(xiàn)為顯著線性和二次曲線增加（P ＜0.05），各處理對(duì)蛋雞日采食量和蛋重的影響無(wú)顯著差異（P ＞0.05）。此外，平均蛋重隨日糧脫毒馬鞭草添加水平的增加表現(xiàn)為顯著線性和二次增加（P ＜0.05）。日糧脫毒馬鞭草添加水平對(duì)肝臟和腹脂相對(duì)重量的影響無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.2 脫毒馬鞭草對(duì)蛋品質(zhì)的影響 由表3 可知，隨著日糧脫毒馬鞭草濃度的升高，蛋殼厚度顯著線性增加（P ＜0.05），但各處理對(duì)蛋殼顏色、蛋黃顏色、蛋殼強(qiáng)度和哈弗單位均無(wú)顯著影響（P ＞0.05）。

2.3 脫毒馬鞭草對(duì)血清生化指標(biāo)以及肝臟和蛋黃脂肪組成的影響 由表4 可知，日糧添加不同水平的脫毒馬鞭草對(duì)蛋雞血清膽固醇含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均無(wú)顯著影響（P ＞0.05），同時(shí)對(duì)肝臟膽固醇、甘油三酯、磷脂和蛋黃磷脂含量也無(wú)顯著影響（P ＞0.05）。蛋黃膽固醇含量隨脫毒馬鞭草濃度的升高表現(xiàn)為顯著線性降低（P ＜0.05），而蛋黃甘油三酯含量有顯著線性降低趨勢(shì)（P=0.06）。

表2 脫毒馬鞭草添加水平對(duì)產(chǎn)蛋性能、組織器官相對(duì)重量的影響

2.4 脫毒馬鞭草對(duì)蛋雞盲腸微生物組成的影響 由表5 可知，脫毒馬鞭草對(duì)盲腸細(xì)菌總量和大腸桿菌含量均無(wú)顯著影響（P ＞0.05），但盲腸乳酸菌含量隨日糧脫毒馬鞭草添加水平的升高表現(xiàn)為顯著線性升高（P ＜0.05）。

3 討論

馬鞭草提取物作為中草藥可以用于治療胃炎和動(dòng)脈粥樣硬化，對(duì)動(dòng)物具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。Song 等（2010）、Lohakare 等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，在不影響肉雞生長(zhǎng)性能的前提下，飼料中添加馬鞭草提取物可以提高肉雞脂肪消化率，改善豬肉的氧化穩(wěn)定性。本研究評(píng)估了不同脫毒馬鞭草添加水平對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能、蛋品質(zhì)、脂代謝和盲腸菌群的影響。值得注意的是，與對(duì)照組相比，飼糧中添加脫毒馬鞭草可提高產(chǎn)蛋性能和雞蛋質(zhì)量。Kang等（2008）報(bào)道，在飲水中添加馬鞭草提取物可顯著提高蛋雞產(chǎn)蛋量和蛋品質(zhì)，同時(shí)也顯著改善粗蛋白質(zhì)和粗灰分的消化率。作者推測(cè)，產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)的提高可能與馬鞭草介導(dǎo)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)利用增強(qiáng)有關(guān)。

表3 脫毒馬鞭草添加水平對(duì)蛋品質(zhì)的影響

表4 脫毒馬鞭草添加水平對(duì)蛋雞血清生化指標(biāo)、肝臟和蛋黃脂肪組成的影響

表5 脫毒馬鞭草添加水平對(duì)蛋雞盲腸微生物組成的影響 lgcfu/g

在本研究中，飼糧處理對(duì)GOT、GPT 和總膽固醇水平無(wú)顯著影響。測(cè)定血清GOT 和GPT 活性可以用于評(píng)估家禽肝臟和組織損傷。馬鞭草中主要的抗原成分是漆酚，其可引起過(guò)敏性皮疹及誘導(dǎo)接觸性皮炎（Ma 等，2012）。因此，盡管目前還沒有關(guān)于馬鞭草對(duì)家畜生產(chǎn)性能和生理反應(yīng)負(fù)面影響的報(bào)道，但對(duì)含有漆酚的馬鞭草進(jìn)行解毒是有益的。無(wú)論如何，本研究使用的脫毒馬鞭草對(duì)血清GOT 和GPT 活性無(wú)顯著影響，表明其作為蛋雞飼料添加劑是安全的。有研究報(bào)道，在馬鞭草具有降膽固醇作用，如從馬鞭草提取得到的糖蛋白降低了小鼠中三酰甘油和低密度脂蛋白膽固醇的水平。Golzadeh 等（2012）發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加馬鞭草降低了肉雞超低密度脂蛋白膽固醇水平，這可能與3 - 羥基-3 甲基戊二酰輔酶A 還原酶活性降低有關(guān)，后者是一種合成膽固醇的限時(shí)酶。在本研究中，蛋黃膽固醇隨日糧脫毒馬鞭草添加水平的升高表現(xiàn)為顯著線性降低，但對(duì)血液和肝臟膽固醇均無(wú)顯著影響。肝臟是雞蛋膽固醇合成位點(diǎn)，膽固醇以低密度脂蛋白的形式轉(zhuǎn)運(yùn)到血液，通過(guò)細(xì)胞介導(dǎo)的內(nèi)吞作用在蛋黃中沉積（Kim 等，2004）。因此，本研究中脫毒馬鞭草降低蛋黃膽固醇可能是膽固醇代謝改變的結(jié)果，即膽固醇合成、降解及組織再分布或內(nèi)源性脂蛋白的合成和分泌。值得注意的是，雞蛋膽固醇含量的降低并不伴隨著產(chǎn)蛋量的降低。

Kang 等（2008）研究表明，在飲水中添加馬鞭草提取物對(duì)盲腸大腸桿菌和沙門氏菌數(shù)量無(wú)顯著影響，這與本研究發(fā)現(xiàn)的脫毒馬鞭草對(duì)細(xì)菌總數(shù)和大腸桿菌數(shù)無(wú)顯著影響的結(jié)果一致。因此，作者認(rèn)為，脫毒馬鞭草誘導(dǎo)盲腸乳酸菌數(shù)量增加具有廣闊的應(yīng)用前景，因?yàn)槿樗峋梢援a(chǎn)生乳酸來(lái)維持雞胃腸道低pH，從而抑制病原菌的過(guò)度生長(zhǎng)。

4 結(jié)論

綜上所述，日糧添加脫毒馬鞭草對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率和蛋殼品質(zhì)有顯著改善作用。蛋雞飼料添加脫毒后的馬鞭草可以增加盲腸乳酸菌的數(shù)量，降低蛋黃中膽固醇的含量。