屠穎晶

（福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，福建 福州 350002）

三七又名田七、金不換、人參三七[1]，味甘微苦，性溫。分布于江西、湖北、廣東、廣西等地，多為人工栽培。三七是產(chǎn)于我國特有的名貴中藥材，也是最早的藥食同源植物中的一種[2]。三七同時(shí)也是云南白藥的主藥，外用具有散瘀活血、消腫定痛之功效[3-4]，內(nèi)服可以促進(jìn)造血、調(diào)節(jié)血脂和血壓、抗血栓、抗心肌缺血、調(diào)節(jié)免疫功能等功效[5-6]。三七的主要化學(xué)成分為黃酮、皂苷、氨基酸，其中三七皂苷具有較高的藥用活性，用于心腦血管疾病類的藥品、保健品的制備等。

本文采用5種不同的分離提純方法，對(duì)三七粉中人參皂苷Re含量進(jìn)行測(cè)定，研究不同的分離提純方法下三七粉人參皂苷Re含量的差異，確定最佳提取方法，為三七粉的進(jìn)一步深度開發(fā)提供更好的參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

材料：三七粉，購于藥店。

試劑：無水乙醇(AR)、正丁醇(AR)、乙醚(AR)、甲醇(AR)、香草醛(AR)，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；硫酸(AR)，購于西隴科學(xué)股份有限公司。

耗材：中性氧化鋁/XAD-2 SPE小柱（1 g/4g，10 mL），購于上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

DK-S26型 水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；

BSA-224S型 電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司）；

UV-2700型 紫外可見光光度計(jì)（日本島津公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 三七粉中人參皂苷Re的提取分離

方法1：水溶液超聲提取-大孔樹脂柱分離純化法[7]

精密稱取樣品約0.1 g，加入20 mL 85%乙醇，超聲30 min，過濾，提取液蒸干，加水溶解，過中性氧化鋁/XAD-2 SPE小柱（即大孔吸附樹脂填料的型號(hào)為XAD-2），用25 mL水以0.15 mL/min流速洗柱，棄洗脫液，用25 mL 85%乙醇洗脫，收集洗脫液于50 mL雞心瓶中，在60 ℃下減壓蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓⒍ㄈ葜?5mL，此溶液為樣液1。

方法2：乙醚脫脂-索氏抽提法[8]

精密稱取樣品約0.1 g，用中性濾紙包好，于索氏抽提器中，加入適量乙醚，水浴微沸回流抽提1 h，棄乙醚，并揮盡濾紙和殘?jiān)械囊颐?。往濾紙和包裹的殘?jiān)尤脒m量甲醇浸泡過夜，次日微沸回流進(jìn)行索氏抽提，抽提回流6次后，收集甲醇抽提液于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干。用30 mL蒸餾水溶解殘?jiān)⒅糜诜忠郝┒分?，加?0 mL正丁醇（用水飽和過的）進(jìn)行萃取，共萃取4次。收集上層萃取液，水浴蒸干，用適量甲醇溶解殘?jiān)?，并定容?5 mL，此溶液為樣液2。

方法3：甲醇索氏抽提法[9]

精密稱取樣品約0.1 g，用中性濾紙包好，于索氏抽提器中，加入適量甲醇浸泡過夜，次日微沸回流進(jìn)行索氏抽提，抽提回流6次后，收集甲醇抽提液于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干。用30 mL蒸餾水溶解殘?jiān)⒅糜诜忠郝┒分?，每次加?0 mL正丁醇（用水飽和過的）進(jìn)行萃取，共萃取4次。收集上層萃取液，水浴蒸干，用適量甲醇溶解殘?jiān)⒍ㄈ葜?5 mL，此溶液為樣液3。

方法4：乙醚脫脂-甲醇超聲提取法

精密稱取樣品約0.1 g，用中性濾紙包好，于索氏抽提器中，加入適量乙醚，水浴微沸回流抽提1 h，棄乙醚，并揮盡濾紙和殘?jiān)械囊颐?。將濾紙和殘?jiān)糜诰呷F形瓶中，加入甲醇20 mL，超聲提取30 min后過濾，濾液用適量甲醇定容至25 mL，此溶液為樣液4。

方法5：水浸提法[9]

精密稱取樣品約0.1 g，加入20 mL蒸餾水，于50 ℃水浴恒溫加熱提取1 h，過濾，蒸干濾液，殘?jiān)眉状忌倭慷啻稳芙?，定容?5 mL，此溶液為樣液5。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品20 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，此溶液為人參皂苷Re對(duì)照品儲(chǔ)備液，即每1 mL含人參皂苷Re2.0 mg。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

吸取人參皂苷Re對(duì)照品儲(chǔ)備液10、20、30、40、60、80、100 μL（相當(dāng)于人參皂苷Re20、40、60、80、120、160、200 μg）于25 mL比色管中，60 ℃以下加熱揮干溶劑甲醇。依次加入8%香草醛乙醇溶液0.5 mL、72%硫酸溶液5 mL，振搖混勻后于60 ℃恒溫水浴加熱10 min，立即用冰水浴冷卻10 min，搖勻，以試劑作空白，于544 nm波長(zhǎng)處使用1 cm的比色皿，分別測(cè)定吸光度值。

圖1 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 不同提取方法對(duì)三七粉中人參皂苷Re含量的影響

以吸光度A為縱坐標(biāo)，人參皂苷Re的含量（mg）為橫坐標(biāo)繪制吸收曲線。線性方程為Y =5.7196 x+0.0061（R2=0.9963）。結(jié)果如圖1顯示，人參皂苷Re在 0.02～0.20 μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

1.3.4 樣品中人參皂苷Re含量的測(cè)定

吸取方法1～5中最后得到的樣液1～5，于25 mL比色管中，60 ℃以下加熱揮干溶劑甲醇；之后按1.3.3中方法，按步驟讓樣液進(jìn)行顯色并測(cè)定吸光度，由回歸方程計(jì)算不同方法下人參皂苷Re含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 分光光度法測(cè)定三七粉人參皂苷Re含量

由表1可以看出，由方法4法測(cè)定出的人參皂苷Re含量最高，即乙醚脫脂-甲醇超聲提取法提取三七粉中人參皂苷Re含量最高，含量在7.6%左右。

方法1中，大孔樹脂柱分離純化法中的大孔吸附樹脂雖然可以清除部分糖類水溶性雜質(zhì)和大部分脂溶性雜質(zhì)，有一定的分離純化效果，但未經(jīng)脫脂處理的三七粉皂苷粗提物在經(jīng)過大孔樹脂柱純化時(shí)，容易堵塞樹脂孔道從而降低樹脂對(duì)皂苷的吸附率，造成含量偏低。

方法2，即乙醚脫脂-索氏抽提法提取率也比較高，但操作復(fù)雜，提取時(shí)間過長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的廢液多。

方法3提取結(jié)果說明，脂類對(duì)皂苷的提取有干擾作用，乙醚可以除去脂溶性雜質(zhì)，更有利于皂苷類物質(zhì)的溶出。皂苷極性較大，在水飽和的正丁醇中有較大的溶解度，故可用水飽和的正丁醇進(jìn)行純化。

方法5中測(cè)得的人參皂苷Re含量最低，水浸提分離純化過程中都有較大的損失，且除雜質(zhì)效果差，不利于含量測(cè)定。

2.2 精密度試驗(yàn)

稱取一份樣品，按方法4進(jìn)行分離提取后，重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算人參皂苷Re含量。人參皂苷Re的平均值為7.56%，RSD=0.82%，見表2，方法精密度良好。

表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)

稱取一份樣品，本底為75.6 mg/g，加入低中高3個(gè)不同濃度水平的標(biāo)品，按方法4進(jìn)行分離提取后依法分別測(cè)定并計(jì)算回收率，由表3可以看出人參皂苷Re的回收率為88.0%～94.7%。

表3 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論

通過采用5種不同的前處理方法，對(duì)三七粉中人參皂苷Re含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明最佳提取方法為乙醚脫脂-甲醇超聲法，該方法能有效縮短試驗(yàn)時(shí)間，操作簡(jiǎn)單、精密度好，回收率穩(wěn)定（回收率88.0%～94.7%）。