張曉萍 張文 戚鵬飛 朱仁愿 李潔 張彩霞 邱國(guó)玉

摘 要 目的：建立海藻及其混偽品中17種氨基酸的含量測(cè)定方法并進(jìn)行聚類分析，為海藻藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法：取18批樣品（S1～S6為真品、S7～S18為混偽品），經(jīng)酸水解后，采用氨基酸全自動(dòng)分析儀測(cè)定氨基酸含量。色譜柱為L(zhǎng)CAK06/Na型磺酸基強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂分離柱，流動(dòng)相為緩沖液-再生液系統(tǒng)（梯度洗脫），流速為洗脫泵0.45 mL/min、衍生泵0.25 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為440 nm（脯氨酸）、570 nm（其余氨基酸），進(jìn)樣量為50 μL。采用PASW Statistics 18.0軟件，以“平方Euclidean距離”為度量標(biāo)準(zhǔn)使用組間聯(lián)接的聚類方法對(duì) 18批樣品進(jìn)行聚類分析。結(jié)果：17種氨基酸均分離良好，空白無干擾;其質(zhì)量濃度與峰面積的線性關(guān)系良好（r均大于0.998），線性范圍上下限分別為48.06 μg/L（胱氨酸）、1.501 μg/L（甘氨酸）;精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD均小于2%;平均加樣回收率為90.60%～101.56%（RSD為0.88%～2.15%，n=6）。海藻及其混偽品樣品中均檢出17種氨基酸，其中谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、纈氨酸的含量相對(duì)較高。聚類分析結(jié)果顯示，18批樣品可以聚為4類，S1～S6為一類，S7～S9為一類，S10～S12 、S16～S18為一類，S13～S15為一類，與海藻真品與其混偽品的鑒定結(jié)果相一致。結(jié)論：該方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好，可用于海藻及其混偽品的氨基酸定量分析及真?zhèn)螀^(qū)分。

關(guān)鍵詞 海藻;混偽品;陽離子交換色譜法;柱后衍生;氨基酸

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish the method for content determination of 17 kinds of amino acids in Sargassum and its adulterants， and to carry out cluster analysis， so as to provide reference for quality control of Sargassum. METHODS： Totally of 18 batches of sample （S1-S6 as certified product， S7-S18 as adulterants） were collected. After acid hydrolysis， amino acids contents were detected by using automatic amino acid analyzer. The separation was performed on LCAK06/Na sulfonic acid cation exchange resin column with mobile phase consisted of buffer-regeneration system （gradient elution） at the flow rate of 0.45 mL/min （elution pump） and 0.25 mL/min （derivative pump）. The detection wavelengths were set at 440 nm （proline） and 570 nm （other amino acids）， and the sample size volume was 50 μL. PASW Statistics 18.0 software was used， and cluster analysis was conducted by using group connection method of cluster analysis with “square Euclidean distance” as the measurement standard. RESULTS： 17 kinds of amino acids were well separated without interference from blank sample. The linear relationship between mass concentration and peak area was good （all r were over 0.998）， and the upper and lower limits of the linear range were 48.06 μg/L （cystine） and 1.501 μg/L （glycine）， respectively; RSDs of precision， reproducibility and stability tests were lower than 2%. The average recoveries were between 90.60%-101.56%（RSDs were 0.88%-2.15%，n=6）. 17 kinds of amino acids were detected in Sargassum and its adulterants， among which the contents of glutamic acid， aspartic acid， leucine， alanine， glycine and valine were relatively high. Results of cluster analysis showed that 18 batches of sample were clustered into 4 categories， i.e. S1-S6 into one category; S7-S9 into one category; S10-S12， S16-S18 into one category; S13-S15 into one category; which was consistent with the identification result of Sargassum and its adulterants. CONCLUSIONS： The method is simple， rapid， accurate and reproducible， and can be used for the quantitative analysis and identification of amino acids in Sargassum and adulterants.

KEYWORDS? ?Sargassum; Adulterants; Cation exchange chromatography; Post-column derivatization; Amino acids

海藻為海產(chǎn)藻類植物的總稱。中藥海藻（以下簡(jiǎn)稱“海藻”）始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，具有軟堅(jiān)散結(jié)、消痰、利水之功效，多用于癭瘤、瘰疬、睪丸腫痛、痰飲水腫等癥[1]。2015年版《中國(guó)藥典》（一部）收載的海藻為馬尾藻科植物海蒿子[Sargassum pallidum（Turn.）C.Ag.]或羊棲菜[S. fusiforme（Harv.）Setch.]的干燥藻體，前者習(xí)稱“大葉海藻”，后者習(xí)稱“小葉海藻”[2]。但是目前市場(chǎng)上除藥典收載的品種外，尚有銅藻[S. horneri（Turn.）C. Ag.]、亨氏馬尾藻[S. henslowianum C. Ag.]、瓦氏馬尾藻[S. vachellianum Grev.]和海黍子[S. kjellmanianum Yendo.]等其他藻類植物冒充海藻大量流通，不僅干擾了藥材市場(chǎng)的正常運(yùn)行，還會(huì)影響用藥的安全有效性[3-6]。

海藻富含多種功效性成分，如多糖、無機(jī)元素、氨基酸、脂肪酸、蛋白質(zhì)、維生素、甾體等[7-11]，具有抗腫瘤、抗凝血、抗氧化、增強(qiáng)免疫等藥理作用[12]。2015年版《中國(guó)藥典》中海藻含量測(cè)定項(xiàng)下收載了以巖藻糖為對(duì)照品、用紫外分光光度法測(cè)定海藻中海藻多糖含量的方法[2]。研究表明，海藻中粗蛋白含量為8.00%[11]。考慮到氨基酸作為組成蛋白質(zhì)的基本單位，且有文獻(xiàn)研究表明，甘氨酸、精氨酸等與心血管系統(tǒng)健康密切相關(guān)[13-14]，海藻中的氨基酸與其生物活性也具有一定相關(guān)性[15]，因此擬將該類成分含量作為海藻藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。此外，國(guó)內(nèi)目前有關(guān)于海藻中海藻多糖提取及含量測(cè)定的研究[9]，以及藻類產(chǎn)品中植物激素[16]、微量元素[17]、脂肪酸[18]、外源性有害物質(zhì)重金屬[19]、農(nóng)藥殘留量[20]等的研究，但尚未見從中藥材真?zhèn)舞b別角度對(duì)海藻及其混偽品中所含氨基酸類成分進(jìn)行分析的研究報(bào)道?；诖耍驹囼?yàn)采用陽離子交換色譜柱結(jié)合柱后衍生法，對(duì)海藻及混偽品中的17種氨基酸含量進(jìn)行測(cè)定，并采用聚類分析方法對(duì)樣品進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分類，以期為海藻藥材的質(zhì)量控制及深入研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

S-433D型氨基酸全自動(dòng)分析儀（包括S5200型全自動(dòng)進(jìn)樣器、S4300型氨基酸反應(yīng)模塊、S7130型溶劑存放單元、S2100型梯度泵等）、LCAK06/Na型磺酸基強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂分離柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）均購自德國(guó)Sykam公司;ME204/02型萬分之一天平、S220-K型酸度計(jì)[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司];DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;N-WVAP112型氮吹儀（美國(guó)Organomation公司）;Milli-Q IQ7000型超純水系統(tǒng)[密理博（中國(guó)）有限公司]。

1.2 藥品與試劑

氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（H型）：含有天冬氨酸（Asp）、蘇氨酸（Thr）、絲氨酸（Ser）、谷氨酸（Glu）、丙氨酸（Ala）、甘氨酸（Gly）、胱氨酸（Cys）、纈氨酸（Val）、蛋氨酸（Met）、異亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、組氨酸（His）、賴氨酸（Lys）、精氨酸（Arg）、脯氨酸（Pro）等17種氨基酸混合對(duì)照品（德國(guó)Sykam公司，批號(hào)：09070113，每種氨基酸濃度均為2.5 μmol/mL）;甲醇為色譜純，茚三酮、檸檬酸、檸檬酸三鈉、硼酸、乙醇、濃鹽酸、氫氧化鈉及其他試劑均為優(yōu)級(jí)純，水為超純水。

1.3 藥材

海藻及其混偽品樣品來源于蘭州市食品藥品檢驗(yàn)所日常監(jiān)督檢驗(yàn)、2017年甘肅省中藥飲片專項(xiàng)抽驗(yàn)評(píng)價(jià)性檢驗(yàn)以及項(xiàng)目組產(chǎn)地調(diào)研收集的樣品，經(jīng)蘭州市食品藥品檢驗(yàn)所張彩霞副主任中藥師鑒定，分別為馬尾藻屬植物海蒿子、羊棲菜、銅藻、亨氏馬尾藻、瓦氏馬尾藻、海黍子[21]的干燥藻體。樣品信息詳見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 試液 （1）緩沖液A：分別稱取檸檬酸三鈉11.8 g、檸檬酸6 g，置于1 L量瓶中，加適量水溶解，再加甲醇65 mL和濃鹽酸6 mL，加水定容，搖勻，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.45，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，即得。（2）緩沖液B：分別稱取檸檬酸三鈉19.6 g、氫氧化鈉3.1 g、硼酸5.0 g，置于1 L量瓶中，加適量水溶解并定容，搖勻，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH至10.85，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，即得。（3）再生液C：分別稱取氫氧化鈉20.0 g、乙二胺四乙酸0.2 g，置于1 L量瓶中，加適量水溶解并定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，即得。（4）樣品稀釋液：稱取檸檬酸三鈉11.8 g，置于1 L量瓶中，加入濃鹽酸10.4 mL，用水溶解并稀釋至1 L，搖勻，用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH 至2.20，經(jīng)0.45 μm 濾膜濾過，即得。（5）鉀鈉緩沖液：量取水500 mL，加入醋酸鉀196.0 g、三水乙酸鈉272.0 g后，緩緩攪拌使溶解，再加入乙酸200 mL，用水定容至1 L，經(jīng)0.45 μm 濾膜過濾，即得。（6）茚三酮溶液：量取甲醇600 mL，加入茚三酮20 g、苯酚2 g，不斷攪拌至茚三酮完全溶解，經(jīng)0.45 μm 有機(jī)濾膜濾過，然后向?yàn)V液中加入鉀鈉緩沖液400 mL，并轉(zhuǎn)移至棕色試劑瓶中，從底部吹入氮?dú)饧s3～5 min，即得。

2.1.2 混合對(duì)照品溶液 精密吸取氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4 mL至10 mL量瓶中，加樣品稀釋液稀釋并定容，作為混合對(duì)照品溶液（單個(gè)氨基酸濃度均為100 μmol/L）。

2.1.3 供試品溶液 稱取樣品粉末（過三號(hào)篩）約0.5 g，精密稱定，置于20 mL水解管中（切勿沾壁），精密加入6 mol/L鹽酸10 mL，真空脫氣，在充氮?dú)鉅顟B(tài)下封口，置于110 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中水解20 h;取出，搖勻，放冷至室溫;打開水解管，精密移取1 mL水解液置于25 mL燒杯中，80 ℃水浴蒸干，殘?jiān)?5 mL樣品稀釋液溶解完全，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，即得。

2.2 色譜條件

采用氨基酸全自動(dòng)分析儀進(jìn)行測(cè)定[22]。色譜柱為L(zhǎng)CAK06/Na型磺酸基強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂分離柱;流動(dòng)相分別為緩沖液A、緩沖液B、再生液C，梯度洗脫（程序見表2），流速為0.45 mL/min;衍生液為茚三酮溶液，流速為0.25 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為440 nm（Pro）和570 nm（其余16種氨基酸）;進(jìn)樣量為50 μL。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別精密吸取“2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液（編號(hào)：S7）適量，并以樣品稀釋液為空白，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示，混合對(duì)照品溶液和供試品溶液中17種氨基酸均分離良好，空白無干擾，色譜圖見圖1。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精密吸取氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液5份，分別加樣品稀釋液配制成單個(gè)氨基酸濃度均為20、40、80、120、200 μmol/L的系列對(duì)照溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積（y）為縱坐標(biāo)、氨基酸質(zhì)量濃度（x，單位換算為μg/L）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，詳見表3。結(jié)果表明，17種氨基酸在各自質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好（r>0.998）。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取“2.1.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，17種氨基酸峰面積的RSD為0.08%～1.52%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一樣品（編號(hào)：S7）5份，每份0.5 g，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果，17種氨基酸含量的RSD為0.50%～1.98%（n=5），表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下同一供試品溶液（編號(hào)：S7），分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12、16、20、24 h時(shí)按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，17種氨基酸峰面積的RSD為0.80%～1.51%（n=10），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已測(cè)得含量的樣品（編號(hào)：S7）6份，每份0.5 g，精密加入“2.1.2”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液1 mL，按照“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，詳見表4。結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確度良好。

2.4 樣品含量測(cè)定

取18批樣品（S1～S18），按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。各樣品平行測(cè)定3次，取平均值，結(jié)果見表5。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

Tab 4 Results of recovery tests （n=6）

[編號(hào) ? ? ?氨基酸 加樣回收率范圍，% 平均加樣回收率，% RSD，% 1 Asp 97.41～101.82 99.25 1.90 2 Thr 95.76～101.62 98.75 2.15 3 Ser 97.52～103.40 99.74 2.11 4 Glu 98.39～102.51 100.03 1.44 5 Gly 98.54～101.82 100.38 1.38 6 Ala 97.44～100.58 99.44 1.30 7 Cys 88.44～92.88 90.60 1.92 8 Val 93.41～99.18 95.81 2.08 9 Met 93.52～98.38 95.97 1.63 10 Ile 96.80～99.24 97.96 1.03 11 Leu 99.58～102.98 101.56 1.45 12 Tyr 93.52～96.23 95.11 1.07 13 Phe 95.81～98.18 97.11 0.88 14 His 92.92～96.43 95.09 1.66 15 Lys 92.48～98.05 96.36 2.14 16 Arg 96.71～99.20 97.93 1.06 17 Pro 96.24～98.90 97.63 0.93 ]

2.5 聚類分析

采用Excel 2007軟件匯總含量測(cè)定原始數(shù)據(jù)。結(jié)果顯示，海藻真品及其混偽品中均含有所測(cè)出17種氨基酸，且各氨基酸成分含量與總氨基酸含量的變化趨勢(shì)保持一致，其中Glu、Asp、Leu、Ala、Gly、Val含量相對(duì)較高，且包括2種人體必需氨基酸。采用PASW Statistics 18.0軟件，根據(jù)17種氨基酸含量使用組間聯(lián)接的聚類方法對(duì)18批樣品進(jìn)行聚類分析，以“平方Euclidean距離”為度量標(biāo)準(zhǔn)，繪制海藻及其混偽品中氨基酸含量的樹狀圖，見圖2。

由圖2可知，18批樣品可聚為4類，S1～S6一類，S7～S9聚為一類，S10～S12、S16～S18聚為一類，S13～S15聚為一類，與種源鑒定結(jié)果相符，表明本方法可將海藻與其混偽品區(qū)別。

3 討論

3.1 氨基酸分析檢測(cè)方法的選擇

由于大多數(shù)氨基酸本身不具有紫外吸收和熒光發(fā)射的特性，所以通常需要將其衍生化后再采用儀器測(cè)定，常用方法主要為高效液相色譜法[23]、氣相色譜法[24]、分光光度法[25]、近紅外法 [26]、高效陰離子交換色譜積分脈沖安培檢測(cè)法[27]、氨基酸分析儀測(cè)定法等[22]，各有優(yōu)缺點(diǎn)。例如，氣相色譜法是將氨基酸衍生為易氣化的物質(zhì)進(jìn)行分析，雖然方法靈敏度高、分析時(shí)間短，但衍生試劑種類少、衍生操作復(fù)雜;近紅外法雖然樣品前處理簡(jiǎn)便，但檢測(cè)靈敏度低、定量準(zhǔn)確度差。氨基酸分析儀測(cè)定法作為液相色譜分析法中重要的一類，專為氨基酸分析而設(shè)計(jì)，它是一種柱后衍生法，先采用陽離子交換樹脂分離氨基酸混合物，再以柱后茚三酮衍生法進(jìn)行樣品檢測(cè)。該方法前處理過程簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)穩(wěn)定性和重復(fù)性好。為此，本試驗(yàn)采用氨基酸分析儀檢測(cè)海藻及其混偽品中氨基酸含量。

3.2 取樣量、水解時(shí)間及溫度的考察

參考文獻(xiàn)報(bào)道的藻類植物氨基酸含量[28-29]，本課題組對(duì)樣品取樣量、水解及溫度進(jìn)行了考察：分別稱取不同量（0.1、0.2、0.5、1.0 g）的樣品，依法水解反應(yīng)后制備供試品溶液，以各氨基酸成分的峰形及響應(yīng)值為指標(biāo)，選取最佳取樣量;同時(shí)，考察不同水解時(shí)間和溫度對(duì)氨基酸測(cè)定的影響。結(jié)果表明，當(dāng)取樣量為0.5 g時(shí)，各色譜峰峰形及響應(yīng)良好;不同的水解溫度和時(shí)間對(duì)水解程度有重要的影響，其中110 ℃加熱20 h可以完全水解氨基酸，最終確定了“2.1.3”項(xiàng)下樣品處理?xiàng)l件。

3.3 測(cè)定結(jié)果和聚類分析的意義

由圖2可知，18批樣品可分為4類，與樣品的種質(zhì)鑒定結(jié)果具有一致性：海藻真品海蒿子、羊棲菜為一類;其混偽品銅藻為一類，亨氏馬尾藻、海黍子為一類，瓦氏馬尾藻為一類。海藻為常用的中藥材，市場(chǎng)流通混偽品較多。由于海藻為海生植物，不便于觀察其生長(zhǎng)特性，且隨著生長(zhǎng)期的延長(zhǎng)其葉的性狀特征變異較大（從初生葉的披針形葉到次生葉的絲狀葉、多形葉在同一植株上同時(shí)存在），干燥的藥材或飲片多皺縮、卷曲或破碎，這些都給海藻的鑒定帶來了困難，使混偽品泛濫有了可乘之機(jī)，大量涌入市場(chǎng)。通過對(duì)海藻及其4種混偽品中氨基酸成分的含量測(cè)定，確定了海藻中含有的氨基酸種類及含量差異;同時(shí)，聚類分析結(jié)果證明，藥典收載的藥用來源的馬尾藻屬植物海蒿子、羊棲菜聚為一類，而銅藻、亨氏馬尾藻、瓦氏馬尾藻、海黍子的氨基酸含量與真品差異較大，都不能作為海藻代用品使用。

綜上所述，本試驗(yàn)通過對(duì)中藥海蒿子、羊棲菜及其馬尾藻科混偽品銅藻、亨氏馬尾藻、瓦氏馬尾藻、海黍子中氨基酸成分進(jìn)行定量測(cè)定和真?zhèn)螀^(qū)分，為全面反映其氨基酸組成及含量提供了數(shù)據(jù)支持，同時(shí)為海藻的全面深入研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 樓之岑，秦波.常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究：北方編：第1冊(cè)[M].北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2003：1-38.

[ 2 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：295.

[ 3 ] 崔征，李玉山，肇文榮，等.中藥海藻商品藥材的調(diào)查及原植物鑒定[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，1995，30（8）：459-460.

[ 4 ] 董焱，李玉山，崔征，等.中藥海藻及幾種類同品的性狀和組織構(gòu)造鑒別[J].中藥材，2002，25（4）：239-242.

[ 5 ] 王虹熙，郭慶梅，周鳳琴，等.海藻及其混偽品性狀顯微比較研究[J].中國(guó)海洋藥物，2016，35（3）：49-56.

[ 6 ] 劉輝.海藻及其常見偽劣藥品的鑒別[J].內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2014（29）：109-109.

[ 7 ] 管華詩，王曙光.中華海洋本草：第2卷[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2009：241-247.

[ 8 ] 許福泉，馮媛媛，郭雷，等.大葉海藻化學(xué)成分研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（15）：6658-6659.

[ 9 ] 張倩茹，王強(qiáng).中藥海藻質(zhì)量評(píng)價(jià)研究[J].中國(guó)野生植物資源，2007，26（2）：60-62.

[10] 王威，李紅巖，王艷艷，等.褐藻羊棲菜化學(xué)成分的研究[J].中草藥，2008，39（5）：657-661.

[11] 肖培根，李大鵬，楊世林.新編中藥志：第3卷[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2001：896-905.

[12] 張麗斌.羊棲菜中多酚的提取制備和體外抗氧化活性研究[D].廈門：集美大學(xué)，2013.

[13] 周瓊，陸大祥，付詠梅，等.甘氨酸對(duì)小鼠心肌缺血性損傷的防治作用研究[J].中國(guó)病理生理雜志，2002，18（4）：360-362.

[14] 韓靜，趙有璽，劉雪翠，等.精氨酸在心血管疾病中的作用[J].氨基酸和生物資源，2003，25（4）：66-68.

[15] MATSUBARA K，MATSUURA K，BACIC A，et al. Antico-agulant properties of a sulfated galactan preparation from a marine green alga，Codium cylindricum[J]. Int J Biol Macromol，2001，28（5）：395-399.

[16] 李艷，徐繼林，鄭立洋，等.高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜法同時(shí)測(cè)定羊棲菜 5個(gè)部位中 10 種植物激素含量[J].色譜，2014，32（8）：861-866.

[17] 陳耀祖，潘遠(yuǎn)江，莫衛(wèi)民.東海藥用海藻化學(xué)成分分析研究：Ⅰ：羊棲菜中微量元素分析[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），1996，30（4）：471-473.

[18] 周佩佩，周書娟，孫琪，等.柱前衍生HPLC-MS法測(cè)定海藻中脂肪酸[J].分析試驗(yàn)室，2015，34（10）：1134-1140.

[19] 陳帆，陳世理.海洋藥用羊棲菜中總砷含量的分析[J].溫州師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2002，23（6）：37-39.

[20] 孟娣，譚志軍，劉永濤，等.水產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的對(duì)比分析[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2015，31（14）：56-63.

[21] 曾呈奎，陸保仁.中國(guó)海藻志：第3卷[M].北京：科學(xué)出版社，2000：52-54.

[22] 王棘，潘雪妍，楊宏偉.HPLC法和氨基酸分析儀（AAA）法測(cè)定腸外營(yíng)養(yǎng)注射液（25）中18種氨基酸的含量的比較[J].藥物分析雜志，2012，32（6）：1085-1089.

[23] 鄭重，孫琦，石永偉，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法直接定量分析植物酵素中多種氨基酸成分[J].色譜，2015，33（3）：309-313.

[24] 張紅漫，于文濤，歐陽平凱，等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定中藥沙苑子中的氨基酸[J].氨基酸和生物資源，2004，26（2）：62-64.

[25] 胡月芳，黃志強(qiáng)，李金芳.毛細(xì)管電泳-電化學(xué)檢測(cè)法測(cè)定淮山中8種必需氨基酸含量[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2016，35（4）：471-475.

[26] 苗雨田，楊悠悠，王浩，等.全自動(dòng)氨基酸分析儀法測(cè)定不同年份黃酒中游離氨基酸的含量[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2015，6（4）：1154-1161.

[27] 吳伶俐，劉娜，徐鵬，等.離子色譜-積分脈沖安培檢測(cè)法測(cè)定榴蓮中的 17 種氨基酸[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（8）：3357-3359.

[28] 張爾賢，肖湘.幾種南海海藻的氨基酸分析[J].氨基酸雜志，1989（3）：37-39.

[29] 曹增梅，王偉偉，陳娟，等.幾種大型野生海藻游離氨基酸組成分析[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2018，33（4）：467-471.

（收稿日期：2019-07-25 修回日期：2019-12-25）

（編輯：段思怡）