賈磊 李豪 白鴻太 陳國(guó)勇 魏思東

肝細(xì)胞癌(HCC)是常見(jiàn)的惡性腫瘤，其發(fā)病率位于所有惡性腫瘤第3位，僅我國(guó)每年導(dǎo)致33萬(wàn)多例肝癌的相關(guān)死亡，病死率居于惡性腫瘤前列[1]。目前肝癌最好的治療方式仍是根治性的手術(shù)切除，肝癌根治性手術(shù)術(shù)后在6、12、24個(gè)月時(shí)的復(fù)發(fā)率分別為27.0%、39.7%和45.6%，近半都在兩年內(nèi)復(fù)發(fā)，5年相對(duì)生存率為12.1%[2]，術(shù)后復(fù)發(fā)制約了患者的長(zhǎng)期生存。如何預(yù)測(cè)肝癌復(fù)發(fā)對(duì)治療具有重要的意義。我們通過(guò)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，肝癌組織CD34和Ki-67的表達(dá)能夠預(yù)測(cè)肝癌的術(shù)后復(fù)發(fā)，為肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的預(yù)測(cè)提供了方向。

資料與方法

一、一般資料

回顧性分析從2014年10月至2018年12月我院因肝細(xì)胞癌行根治性手術(shù)治療患者的臨床資料及病理免疫組化結(jié)果，排除術(shù)前證實(shí)有肝內(nèi)外轉(zhuǎn)移、無(wú)法行根治性手術(shù)、或根治性手術(shù)前給予過(guò)介入或射頻消融手術(shù)、術(shù)后無(wú)隨訪、病理資料不全、不能定性或無(wú)免疫組化結(jié)果的患者資料后。共50例患者納入統(tǒng)計(jì)分析。

二、 資料采集

收集患者的性別、年齡、是否患有乙肝、腫瘤最大直徑、臨床病理結(jié)果、免疫組化結(jié)果和復(fù)發(fā)的時(shí)間。

三、復(fù)發(fā)時(shí)間及分組

所有患者行根治性手術(shù)切除，于術(shù)后定期復(fù)查彩超、甲胎蛋白(AFP)等，當(dāng)彩超提示腫物或AFP再次升高，懷疑復(fù)發(fā)之后再進(jìn)一步進(jìn)行增強(qiáng)CT、MRI明確診斷。以手術(shù)后2年內(nèi)復(fù)發(fā)定義為早期復(fù)發(fā)組，2至5年復(fù)發(fā)定義為晚期復(fù)發(fā)組，早期復(fù)發(fā)組及晚期復(fù)發(fā)組合并定義為復(fù)發(fā)組， 5年內(nèi)未復(fù)發(fā)者定義為治愈組。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 22.0數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料采取例數(shù)和百分比表示，單因素分析采用χ2檢驗(yàn)、Fisher確切概率法；計(jì)量資料使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，差異比較采取t檢驗(yàn)，3組間比較使用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、患者一般資料比較

在納入統(tǒng)計(jì)的50例患者中，其中32例男性，18例女性；14例患者早期復(fù)發(fā)，16例晚期復(fù)發(fā)，20例未復(fù)發(fā)；首先將早期復(fù)發(fā)和晚期復(fù)發(fā)合稱(chēng)為復(fù)發(fā)組共30例，未復(fù)發(fā)的治愈組20例。復(fù)發(fā)組年齡(53.5±1.9)歲，治愈組(50.6±3.9)歲。腫瘤最大直徑復(fù)發(fā)組為(5.4±0.7)cm，治愈組(4.9±0.6)cm。復(fù)發(fā)組96.7%(29/30)患有慢性乙型肝炎，治愈組80%(16/20)患慢性乙型肝炎。一般資料比較復(fù)發(fā)組和治愈組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

二、復(fù)發(fā)組和治愈組免疫組化分析

通過(guò)對(duì)兩組患者的免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，CD34的陽(yáng)性表達(dá)在復(fù)發(fā)組明顯高于治愈組(P<0.05)，復(fù)發(fā)組和治愈組表達(dá)率分別為73.3%(22/30)和45.0%(9/20)。Ki67的表達(dá)在復(fù)發(fā)組高于治愈組(P<0.05)，復(fù)發(fā)組和治愈組表達(dá)率分別為(39.0±3.3)%和(25.3±5.1)%；同時(shí)我們分析了兩組間CD10、CK19、Hep、Arg和GPC-3的表達(dá)，結(jié)果顯示這些蛋白的陽(yáng)性率在復(fù)發(fā)組均稍高于治愈組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

三、早期復(fù)發(fā)組、晚期復(fù)發(fā)組和治愈組免疫組化分析

為進(jìn)一步分析是否CD34和Ki67的表達(dá)在不同時(shí)間段復(fù)發(fā)組有差異，我們把早期復(fù)發(fā)組、晚期復(fù)發(fā)組和治愈組免疫組化結(jié)果再進(jìn)一步對(duì)比。結(jié)果顯示CD34早期復(fù)發(fā)組陽(yáng)性表達(dá)為71.4%(10/14),晚期復(fù)發(fā)為75%(12/16)，和治愈組三組進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，χ2=4.129，P=0.127，三組之間無(wú)差異。Ki67早期復(fù)發(fā)組的表達(dá)為41.4±5.0(%)，晚期復(fù)發(fā)組為(36.9±4.5)%，治愈組為(25.3±5.1)%，3組行方差分析，F(xiàn)=2.943，P=0.063，不能認(rèn)為三組間有差異。

討 論

肝細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移其危險(xiǎn)因素的分子預(yù)測(cè)尚不明確，干細(xì)胞的理論認(rèn)為，腫瘤的復(fù)發(fā)與干細(xì)胞的存在密切相關(guān)，CD34蛋白是一種高度糖基化修飾的跨膜糖蛋白，選擇性表達(dá)于人類(lèi)干細(xì)胞表面，在細(xì)胞成熟后表達(dá)下降，肝臟病理研究顯示CD34的表達(dá)在正常肝組織、肝硬化組織、肝癌中的表達(dá)依次增強(qiáng)[3]，在研究肝臟結(jié)節(jié)性病變中發(fā)現(xiàn)，肝癌中CD34的表達(dá)明顯高于肝臟再生結(jié)節(jié)(RN)不典型增生結(jié)節(jié)(DN)，并且CD34的表達(dá)從RN到DN再到肝癌依次升高[4]，同時(shí)，在甲胎蛋白陰性的原發(fā)性肝癌中，伴有局灶性結(jié)節(jié)性增生(FNH)的患者的CD34蛋白表達(dá)明顯高于不伴有FNH的患者[5]。CD34是特異性和敏感性都比較強(qiáng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，和腫瘤的血管生成、毛細(xì)血管密度密切相關(guān)，對(duì)血管的生成起促進(jìn)作用，腫瘤的微血管越多增值指數(shù)越高；CD34分子有可能通過(guò)促進(jìn)血管生成促進(jìn)癌變的過(guò)程，研究顯示CD34陽(yáng)性表達(dá)的骨髓源性細(xì)胞被招募聚集于腦腫瘤中，支持新生的血管，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。雖有研究顯示CD34的表達(dá)在分化較好的肝癌組織中表達(dá)的陽(yáng)性較高，但因CD34和血管生成的關(guān)系，更容易形成脈管瘤栓，這就使CD34陽(yáng)性表達(dá)的肝細(xì)胞癌更容易發(fā)生血行轉(zhuǎn)移，該研究顯示CD34的表達(dá)是肝細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素，CD34的高表達(dá)可能預(yù)示肝細(xì)胞癌的不良預(yù)后，其機(jī)制可能是CD34的高表達(dá)與更容易形成脈管癌栓轉(zhuǎn)移相關(guān)。

表1 復(fù)發(fā)組與治愈組免疫組化蛋白表達(dá)比較的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

a:CD34陽(yáng)性表達(dá);b:CD34陰性表達(dá);c:Ki67高表達(dá);d:Ki67低表達(dá)

圖1CD34和Ki67在肝癌組織中的表達(dá)

Ki67 抗原是細(xì)胞增殖標(biāo)志抗原，與多種腫瘤細(xì)胞的增殖活性、細(xì)胞周期以及腫瘤的生長(zhǎng)方式、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)行為相關(guān)，其表達(dá)隨細(xì)胞周期的不同而發(fā)生改變，G0期不表達(dá)，而在G1 、S 期、G2期、M期的表達(dá)逐漸升高[6]。有研究證實(shí)Ki67的表達(dá)越弱，則其組織的分化越好，反之，Ki-67高表達(dá)，則其分化程度低[7]，相關(guān)研究也證實(shí)Ki-67 的過(guò)表達(dá)與肝細(xì)胞癌腫瘤大小、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、靜脈侵犯、浸潤(rùn)深度有關(guān)，較高的Ki-67表達(dá)可使肝細(xì)胞癌患者進(jìn)展快，預(yù)后差，其生存率明顯降低，在口腔鱗癌中也得到相似結(jié)論[8-9]。本研究發(fā)現(xiàn)，根治性手術(shù)切除術(shù)后，復(fù)發(fā)組的Ki-67和治愈組的表達(dá)有差異，且復(fù)發(fā)組Ki-67的表達(dá)明顯大于治愈組，提示Ki-67的高表達(dá)能夠預(yù)測(cè)術(shù)后肝癌復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)。

在CD34及Ki67兩種蛋白三組對(duì)比時(shí)得出結(jié)果均不能證明三組間存在差異，可能是由于對(duì)比三組間的差異使每組的數(shù)據(jù)減少，有待增加樣本量進(jìn)一步分析。細(xì)胞角蛋白(CK)19屬于膽管細(xì)胞型細(xì)胞角質(zhì)素，參與腫瘤侵襲和血管生成，CK19表達(dá)陽(yáng)性的組織分化較低[10]，CK19與不良預(yù)后有關(guān)，但本研究中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，考慮數(shù)據(jù)較少，其與復(fù)發(fā)的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。