■李 彬 何開蓉 張遨然 胡聲迪 富相奎 孫 群 朱正鵬*

（1.四川大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，四川成都610064；2.新希望六和股份有限公司，北京100102；3.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院，黑龍江哈爾濱150086）

豆粕作為飼料工業(yè)中應(yīng)用最為廣泛的植物性蛋白原料，但其中存在多種抗?fàn)I養(yǎng)因子，對(duì)養(yǎng)分的消化、吸收、代謝以及畜禽的健康和生產(chǎn)性能造成不良影響。而有相關(guān)研究報(bào)道，微生物發(fā)酵處理可以促進(jìn)豆粕中的大分子蛋白質(zhì)分解為小肽和氨基酸，并產(chǎn)生多種微生物及消化酶、酸、維生素、大豆異黃酮等多種活性因子[1]；同時(shí)可以有效降解或者消除豆粕中存在的抗?fàn)I養(yǎng)因子[2-3]，從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的生物利用率。結(jié)合近年發(fā)酵豆粕的研究進(jìn)展及市場應(yīng)用情況，常用的發(fā)酵豆粕一般經(jīng)過烘干處理，不僅增加加工成本，并且其中的一些熱敏性營養(yǎng)物質(zhì)和微生物在烘干過程中也會(huì)發(fā)生變性或損失；而濕基發(fā)酵豆粕則省去了烘干處理這一環(huán)節(jié)，直接添加到配合飼料中，有相關(guān)研究報(bào)道在蛋雞配合飼料添加適量的濕基發(fā)酵豆粕可以有效提高蛋重、改善蛋品質(zhì)[4]。本試驗(yàn)通過在日糧中添加5%濕基發(fā)酵豆粕，研究其對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能和蛋品質(zhì)的影響，為實(shí)際生產(chǎn)中用濕基發(fā)酵豆粕代替豆粕的應(yīng)用效果進(jìn)一步提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料和方法

1.1 制備濕基發(fā)酵豆粕

本試驗(yàn)濕基發(fā)酵豆粕為新希望六和有限公司研發(fā)自制，試驗(yàn)用的所有豆粕均為同一批次。篩選乳酸桿菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌的最佳組合模式，并優(yōu)化豆粕發(fā)酵過程中的各項(xiàng)工藝參數(shù)，發(fā)酵7 d后，檢測發(fā)酵豆粕中的活菌、抗?fàn)I養(yǎng)因子和氨基酸等指標(biāo)。

1.2 試驗(yàn)蛋雞、日糧及管理

1.2.1 試驗(yàn)蛋雞

選取6 000 羽健康的23 周齡羅曼粉殼蛋雞隨機(jī)分為2組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)500只雞。試驗(yàn)共分為12個(gè)單元，每個(gè)單元包含167個(gè)籠子（32.48 cm×35.56 cm），每個(gè)籠子3 只雞，個(gè)別籠子2 只雞。所有試驗(yàn)蛋雞均來源于樂山群康蛋雞場，試驗(yàn)方案按照新希望六和股份有限公司動(dòng)物保護(hù)利用委員會(huì)的準(zhǔn)則進(jìn)行。

1.2.2 試驗(yàn)日糧

本試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧配方符合NRC（1994）蛋雞營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。在基礎(chǔ)日糧中用5%濕基發(fā)酵豆粕代替等量豆粕配制試驗(yàn)日糧。試驗(yàn)組日糧中的活菌數(shù)量分別為乳酸桿菌1.2×107CFU/g、酵母菌1.3×106CFU/g、枯草芽孢桿菌6×105CFU/g（見表1）。

1.2.3 試驗(yàn)管理

所有蛋雞均飼養(yǎng)于環(huán)境控制舍內(nèi)（溫度維持24 ℃，相對(duì)濕度60%）。雞舍控制通風(fēng)，光周期采用16L∶8D, 光照強(qiáng)度5.4 Lux，光照時(shí)間6:00～22:00。適應(yīng)期為3 d，試驗(yàn)周期6周，所有蛋雞均為自由采食和飲水。從適應(yīng)期開始根據(jù)分組飼喂相應(yīng)日糧，每日分早晚飼喂2次。

1.3 產(chǎn)蛋性能

每日早上收集余料，記錄日耗料量，觀察雞群的健康和飲食狀況，記錄蛋雞死亡只數(shù)；每日下午定時(shí)計(jì)數(shù)蛋雞產(chǎn)蛋數(shù)量、異常蛋數(shù)量（包括破蛋、臟蛋、軟殼蛋和畸形蛋）以及稱量蛋重。計(jì)算產(chǎn)蛋率、臟蛋率、破蛋率、軟殼蛋率、畸形蛋率、合格蛋率、平均蛋重以及料蛋比。

1.4 樣本收集

分別在試驗(yàn)開始前（第0周）、第3周和第6周，每個(gè)重復(fù)收集20 枚雞蛋，采用蛋品質(zhì)自動(dòng)分析儀測定蛋重、蛋白高度、蛋黃比色、哈夫單位（Haugh unit），分離蛋黃稱量蛋黃重以及蛋殼重，并計(jì)算蛋白重。

在試驗(yàn)第2、4、6周收集新鮮糞便并在-20 ℃下儲(chǔ)存。測定糞便中的水分、粗蛋白、鈣和磷的含量；測定飼料和糞便中的酸不溶灰分（AIA）含量。并根據(jù)下列計(jì)算公式，計(jì)算粗蛋白、鈣及磷的表觀代謝率。

表1 日糧配方組成及營養(yǎng)成分（飼喂基礎(chǔ)值）

1.5 參數(shù)測定

根據(jù)AOAC 國際標(biāo)準(zhǔn)方法，分析發(fā)酵豆粕、日糧及糞便中的水分（AOAC, 920.36）和粗蛋白（AOAC,984.13）；分析發(fā)酵豆粕及日糧中的氨基酸（AOAC,994.12）；分析日糧及糞便中的鈣（AOAC, 927.02）和磷（AOAC, 965.17）。采用微生物平板計(jì)數(shù)法測定濕基發(fā)酵豆粕和日糧中的活菌數(shù)。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒（ELISA 試劑盒）測定發(fā)酵豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子含量，如大豆抗原蛋白（大豆球蛋白，β-伴大豆球蛋白）；用氣相色譜法測定大豆低聚糖（蔗糖、棉籽糖和水蘇糖）。采用菌落計(jì)數(shù)培養(yǎng)法，對(duì)發(fā)酵豆粕和日糧中的益生菌群進(jìn)行測定（乳桿菌、酵母菌、枯草桿菌）。利用多功能蛋品質(zhì)分析儀（EMT-7300, Robotmation, 日本）測定雞蛋品質(zhì)，如蛋重、蛋白高度、蛋黃顏色和哈夫單位；蛋黃和蛋殼分開稱重。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，以P≤0.05 表示差異顯著，P≤0.01 表示差異極顯著，試驗(yàn)結(jié)果用"平均值±標(biāo)準(zhǔn)差"表示。

2 結(jié)果

2.1 濕基發(fā)酵豆粕的營養(yǎng)成分

表2 濕基發(fā)酵豆粕和豆粕中的營養(yǎng)與抗?fàn)I養(yǎng)因子成分

由表2可知，濕基發(fā)酵豆粕產(chǎn)生了大量的活性益生菌，其中乳酸菌2.3×108CFU/g、酵母菌1.5×109CFU/g和枯草芽孢桿菌1.9×107CFU/g。并且，與普通豆粕相比，濕基發(fā)酵豆粕中粗蛋白、可溶性蛋白質(zhì)（包括堿性和酸性）、總酸和有效磷的值分別增加2.98、3.73、13.23、1.89個(gè)百分點(diǎn)和0.31個(gè)百分點(diǎn)；而其抗?fàn)I養(yǎng)因子含量大幅度降低，大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白的濃度分別從108.89 mg/g 降 至63.20 mg/g 及101.31 mg/g 降 至28.84 mg/g。

2.2 對(duì)產(chǎn)蛋性能的影響

表3結(jié)果表明，添加5%濕基發(fā)酵豆粕對(duì)產(chǎn)蛋率、破蛋率、軟殼蛋率、料蛋比、平均日采食量和平均蛋重?zé)o顯著影響（P＞0.05）（見表3），但降低了破蛋率（P=0.06）、臟蛋率（P＜0.01）、畸形蛋率（P＜0.01），從而提高了合格蛋率（P＜0.01）。

表3 添加濕基發(fā)酵豆粕對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

2.3 對(duì)養(yǎng)分表觀代謝率的影響

表4結(jié)果表明，添加5%濕基發(fā)酵豆粕，對(duì)蛋雞糞便中的水分和鈣表觀代謝率無顯著影響（P＞0.05），而粗蛋白和磷的表觀代謝率極顯著提高（P=0.01）。

表4 添加濕基發(fā)酵豆粕對(duì)養(yǎng)分表觀代謝率的影響

2.4 對(duì)蛋品質(zhì)的影響

表5可見，添加5%濕基發(fā)酵豆粕，雞蛋的蛋黃比色在試驗(yàn)第6 周顯著降低（P＜0.01）；哈夫單位（Haugh Unit）在試驗(yàn)第6 周顯著增加（P= 0.05）。而整個(gè)試驗(yàn)階段，蛋重、蛋白高度、蛋黃重、蛋殼重和蛋白重?zé)o顯著差異（P＞0.05）。

表5 添加濕基發(fā)酵豆粕對(duì)雞蛋品質(zhì)的影響

3 討論

3.1 濕基發(fā)酵豆粕對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

本試驗(yàn)研究表明，通過篩選菌種和控制發(fā)酵參數(shù)，可以使豆粕中合成大量的活性益生菌，如乳酸菌（2.3×108CFU/g）、酵母菌（1.5×109CFU/g）和枯草芽孢桿菌（1.9×107CFU/g），大幅度提升了豆粕營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用率；并且微生物發(fā)酵在一定程度上消除或降解了豆粕中大豆球蛋白（63.20 mg/g）、β-伴大豆球蛋白（28.84 mg/g）、蔗糖、棉籽糖、水蘇糖等抗?fàn)I養(yǎng)因子，而單胃動(dòng)物體內(nèi)無直接消化上述抗?fàn)I養(yǎng)因子的酶，但在發(fā)酵過程中產(chǎn)生了相應(yīng)的酶，消除或減輕這些抗?fàn)I養(yǎng)因子的作用，釋放出部分養(yǎng)分可被動(dòng)物利用，從而使豆粕的整體營養(yǎng)價(jià)值進(jìn)一步改善。配制后的日糧中仍含有大量的活性益生菌，其中乳酸桿菌、酵母菌和枯草芽孢桿菌的含量分別為1.2×107、1.3×106、6×105CFU/g。其中，酵母菌和芽孢桿菌的存在為乳酸菌的生長繁殖創(chuàng)造了厭氧環(huán)境，而乳酸菌大量繁殖產(chǎn)生乳酸，降低了腸道中pH值，有效抑制了腸道中有害菌如大腸桿菌的繁殖，保持了腸道健康的微生態(tài)環(huán)境，改善了動(dòng)物腸道機(jī)能[5]。

本研究還發(fā)現(xiàn)，5%濕基發(fā)酵豆粕代替等量豆粕在蛋雞上的飼喂效果更好，蛋雞的破蛋率、臟蛋率和畸形蛋率明顯降低，合格蛋率顯著提高（P＜0.01）；且蛋雞的料蛋比、平均日采食量和平均蛋重均未顯著變化。其中，破蛋率、臟蛋率和畸形蛋率相對(duì)降低，說明發(fā)酵豆粕對(duì)雞蛋合格率提高有一定的促進(jìn)作用，這可能與發(fā)酵豆粕中富含小肽和氨基酸有關(guān)，不需分解可直接滿足機(jī)體需要，節(jié)省產(chǎn)蛋能耗，并且直接或間接地發(fā)揮生理作用和代謝調(diào)節(jié)，協(xié)調(diào)機(jī)體對(duì)各種養(yǎng)分的吸收利用，更有利蛋雞最大限度發(fā)揮生產(chǎn)性能[6]；也可能與濕基發(fā)酵豆粕中的有益菌改善了腸道健康有關(guān)，陳國營等[7]研究表明發(fā)酵豆粕中的有益菌在腸道內(nèi)定植，通過分泌維生素、氨基酸及多種消化酶，抑制有害菌的生長，使蛋雞的腸道處于健康、穩(wěn)定的狀態(tài)，各種養(yǎng)分的利用率顯著提高，從而促進(jìn)蛋雞生產(chǎn)性能的充分發(fā)揮，因此，降低了異常蛋率。綜上所述，添加5%濕基發(fā)酵豆粕代替等量豆粕可在一定程度上改善蛋雞的產(chǎn)蛋性能，并且影響效果顯著。

3.2 濕基發(fā)酵豆粕對(duì)養(yǎng)分表觀代謝率的影響

本研究結(jié)果表明，添加5%濕基發(fā)酵豆粕，蛋雞的粗蛋白和磷表觀代謝率均顯著提高?？孪檐娧芯繄?bào)道，肉雞飼糧中添加發(fā)酵豆粕可以提高肉雞對(duì)鈣、磷和蛋白的吸收[8]。這可能是因?yàn)閷?duì)豆粕進(jìn)行發(fā)酵處理可能有助于大分子蛋白質(zhì)分解成容易被動(dòng)物吸收的小分子蛋白質(zhì)、小肽和氨基酸[9]。此外，由于濕基發(fā)酵豆粕中添加的益生菌在動(dòng)物腸道內(nèi)迅速定植，一方面促進(jìn)腸道絨毛的生長，另一方面可以分泌有機(jī)酸和細(xì)菌酶，降低腸道pH值，能夠改善腸道對(duì)營養(yǎng)成分的消化吸收。在試驗(yàn)中，粗蛋白和磷表觀代謝率均比對(duì)照組有所提高，表明濕基發(fā)酵豆粕更能促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)在蛋雞消化道內(nèi)分解利用，提高氮和磷在體內(nèi)的沉積。

3.3 濕基發(fā)酵豆粕對(duì)雞蛋品質(zhì)的影響

雞蛋品質(zhì)的評(píng)價(jià)包括蛋重、蛋白高度、蛋黃比色、哈夫單位、蛋黃重、蛋殼重以及蛋白重等指標(biāo)，發(fā)酵豆粕能在一定程度上改善雞蛋的品質(zhì)[10]。蛋黃比色是反映蛋黃顏色的指標(biāo)，值越大表示蛋黃顏色越深。添加5%濕基發(fā)酵豆粕在試驗(yàn)第6周顯著降低了蛋黃比色。吳俊峰等在日糧中添加枯草芽孢桿菌及發(fā)酵豆粕，蛋黃比色顯著提高[11]，與本研究結(jié)果不一致。這可能因蛋雞的品種，或發(fā)酵豆粕采用的菌種種類、數(shù)量，或益生菌的代謝調(diào)節(jié)的差異所致。張功[12]研究發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌可以產(chǎn)生多種維生素，且能促進(jìn)胡蘿卜素等和蛋黃顏色形成相關(guān)的色素沉積到蛋黃中。哈夫單位可反映蛋品新鮮度，值越大表示雞蛋越新鮮。本研究中添加濕基發(fā)酵豆粕哈夫單位（Haugh Unit）在試驗(yàn)第6 周顯著提高1.79%，這與Xu 等[13]日糧中添加枯草芽孢桿菌可以改善哈夫單位的報(bào)道一致，這可能跟小肽與蛋白的沉積作用有關(guān)，增加了與哈夫單位呈正相關(guān)關(guān)系的卵粘蛋白[14]。因此，這也從一定程度上說明，濕基發(fā)酵豆粕更有利于改善雞蛋蛋白品質(zhì)。

4 結(jié)論

添加5%濕基發(fā)酵豆粕可以改善蛋雞粗蛋白和磷的利用率，并在一定程度上改善產(chǎn)蛋性能和雞蛋品質(zhì)，但對(duì)產(chǎn)蛋率、平均蛋重等無顯著影響?；诓煌贩N蛋雞的遺傳特性和飼養(yǎng)管理等因素影響，發(fā)酵豆粕對(duì)蛋雞的影響仍需驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證。