■戴 維 薛俊敬 班 博 李四元 方熱軍*

（1.湖南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，湖南長沙410128；2.湖南畜禽安全生產(chǎn)協(xié)同創(chuàng)新中心，湖南長沙410128）

隨著生活水平的改善，人們對畜禽產(chǎn)品質(zhì)量的要求逐漸提高，品質(zhì)優(yōu)良、綠色、安全的畜禽產(chǎn)品越來越受到人們的關注與青睞?，F(xiàn)代畜禽生產(chǎn)中通常使用抗生素、驅(qū)蟲劑、促生長素等化學藥品來促生長、防控疾病，但其過度使用導致藥物殘留和耐藥菌株等問題，因此，尋找抗生素的替代品顯得格外重要[1-3]。Lei 等[4]報道，基礎飼糧中添加淀粉芽孢桿菌可使肉雞生產(chǎn)性能顯著提高，改善腸道菌群平衡以及提高其對營養(yǎng)物質(zhì)的消化率。董水麗等[5]研究發(fā)現(xiàn)，用EM 菌飼喂肉雞，具有促生長、提高成活率作用，且能顯著降低肉雞料重比，改善了雞舍內(nèi)的生存環(huán)境。Choi 等[6]通過試驗證明，飼糧添加發(fā)酵益生菌可以調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，促進斷奶仔豬生長，提高飼料消化率。EM 菌作為一種復合微生態(tài)制劑，其能夠通過調(diào)控畜禽消化道內(nèi)環(huán)境，改善機體腸道菌群平衡，促進畜禽對營養(yǎng)物質(zhì)的消化率來提高飼料報酬、生產(chǎn)性能和改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)，此外還具有無殘留、無毒副作用等特點[7-11]，其主要由乳酸菌、酵母菌、放線菌、光合細菌、雙歧桿菌、醋酸桿菌及發(fā)酵系列的絲狀菌等5 科10 屬80 多種好氧性或厭氧性微生物組成的一種多功能復合微生態(tài)制劑[12]。本試驗以26周齡羅曼粉殼蛋雞為試驗對象，旨在研究飼糧中添加不同比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)以及抗氧化性能的影響，為復合微生態(tài)制劑在蛋雞生產(chǎn)應用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

復合微生態(tài)制劑為EM 菌：由湖南錦泰源農(nóng)業(yè)科技有限公司提供，含乳酸菌（≥2×108CFU/kg）、酵母菌（≥3×107CFU/kg）。

1.2 試驗動物及飼糧

選取體重相近的26 周齡健康羅曼粉殼蛋雞240 只，由湖南鵬暉農(nóng)牧有限公司提供，試驗基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗設計

采取單因子試驗設計，將240 只健康、體重相近的26 周齡羅曼粉殼蛋雞隨機分為3 個處理，分別是對照組、試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組，每個處理5 個重復，每個重復16 只雞。對照組飼喂基礎日糧；試驗Ⅰ組飼喂基礎日糧+1.5%復合微生態(tài)制劑；試驗Ⅱ組飼喂基礎日糧+3%復合微生態(tài)制劑。預試期7 d，正試期42 d，分試驗前期（0～21 d）和試驗后期（22～42 d）。

1.4 飼養(yǎng)管理

本試驗在湖南省益陽市安化縣某蛋雞場進行，三層立體籠養(yǎng)。試驗期內(nèi)每天上午和下午各飼喂1次，自由采食、飲水，每日撿蛋1 次，清糞2 次，恒定光照。每天監(jiān)測雞舍空氣質(zhì)量，并記錄雞舍內(nèi)的溫度、濕度；打掃雞舍清潔衛(wèi)生，并定期用百毒殺對雞舍進行噴霧消毒；參照常規(guī)免疫程序進行免疫接種；試驗期間時時觀察雞群的健康狀況。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

1.5 樣品采集

蛋樣與血清樣：試驗期第21、42 d，以重復為單位隨機收集雞蛋6 枚，置于4 ℃冰箱保存，用于蛋品質(zhì)測定。試驗期結(jié)束空腹12 h 后每只蛋雞進行翅靜脈采血5 ml（每重復取2 只），自然凝固待血清析出后，3 000 r/min，離心10 min，取上清液分裝到1.5 ml離心管后置于-80 ℃保存待測。

1.6 指標測定及方法

1.6.1 生產(chǎn)性能

自正試期起，每日以重復為單位記錄當日所產(chǎn)蛋數(shù)、總蛋重，計算平均蛋重、產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率。每周定時稱量飼料，以重復為單位計算平均日采食量和料蛋比，及時記錄淘汰雞、病死雞死淘數(shù)。

產(chǎn)蛋率(%)=統(tǒng)計期內(nèi)產(chǎn)蛋總數(shù)/(存欄雞只數(shù)×統(tǒng)計期天數(shù)）×100

平均蛋重(g)=每組總蛋重/每組產(chǎn)蛋個數(shù)

平均采食量(g/d)=每組采食量總量/每組雞存欄數(shù)

料蛋比=耗料量/總蛋重

1.6.2 蛋品質(zhì)

對第21、42 d 蛋樣進行蛋品質(zhì)測定：①蛋殼強度：將完整的雞蛋置于蛋殼強度分析儀（ESTG-01型，以色列ORKA 公司）進行檢測；②用蛋品質(zhì)分析儀（EA-01 型，以色列ORKA 公司）分別測定蛋重、蛋黃顏色、蛋白高度與哈氏單位；③蛋黃比例：清除蛋黃表面蛋白及系帶，在分析天平上稱量記錄蛋黃重，與蛋重作比；公式：蛋黃比例=蛋黃重量/全蛋重；④蛋殼厚度：使用蛋殼厚度測定儀（NFN-380型，日本FHK 公司）測定蛋的銳端、鈍端和中部3 部分的蛋殼厚度，取其平均值，精確到0.02 mm；⑤蛋形指數(shù)：使用電子數(shù)顯游標卡尺（SH14100025 型，上海申韓量具有限公司），測定每枚雞蛋橫徑與縱徑，再行計算；公式：蛋形指數(shù)(%)=橫徑/縱徑×100；⑥蛋黃指數(shù)：使用電子數(shù)顯游標卡尺測定蛋黃高度與蛋黃直徑。蛋黃指數(shù)=蛋黃高度/蛋黃直徑，精確到0.02 mm。

1.6.3 血清生化指標測定

利用邁瑞B(yǎng)S-420全自動生化分析儀檢測測定血清膽固醇（TC）、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)含量。

1.6.4 血液抗氧化指標測定

利用試劑盒測定總抗氧化能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（T-SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。所有試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.7 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2016 軟件初步整理后，采用SPSS 21.0軟件進行單因素方差分析(one-way Anova)，Duncan's 法進行多重比較，P＜0.05 表示表示顯著，0.05＜P＜0.1 表示變化趨勢。測定結(jié)果以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果

2.1 不同添加比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2 可知，各處理組間各階段的平均蛋重無顯著差異（P＞0.05）。在試驗前期，與對照組和試驗Ⅰ組相比，試驗Ⅱ組料蛋比有降低的趨勢（0.05＜P＜0.1）；在試驗后期，與對照組相比，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組產(chǎn)蛋率均顯著提高（P＜0.05），與對照組、試驗Ⅰ組相比，試驗Ⅱ組平均日采食量顯著提高（P＜0.05），以及料蛋比極顯著降低（P＜0.01）；在試驗全期，與對照組、試驗Ⅰ組相比，試驗Ⅱ組平均日采食量顯著提高（P＜0.05），和料蛋比均極顯著降低（P＜0.01），與對照組相比，試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組均有提高蛋雞產(chǎn)蛋率的趨勢（0.05＜P＜0.1），其產(chǎn)蛋率分別提高了2.07%、2.56%。試驗結(jié)果表明，隨著時間的延長，試驗組蛋雞產(chǎn)蛋率明顯高于對照組，添加3%比例的微生態(tài)制劑顯著降低了蛋雞平均日采食量及料蛋比。

表2 不同添加比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 不同添加比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞常規(guī)蛋品質(zhì)的影響

由表3 可知，在試驗21 d 時，與對照組相比，試驗Ⅰ組各檢測指標均無明顯差異，但試驗Ⅱ組與對照組相比有提高蛋黃顏色、蛋殼厚度的趨勢（0.05＜P＜0.1），其中蛋黃顏色和蛋殼厚度分別提高了12.19%和5.26%；在試驗42 d 時，與對照組相比，試驗Ⅰ、Ⅱ組在蛋雞蛋重、蛋黃指數(shù)、蛋白高度、蛋形指數(shù)、哈氏單位、蛋殼強度、蛋殼厚度、蛋黃顏色方面均有不同程度的提高，其中試驗II 組與對照組相比其蛋殼厚度顯著提高（P＜0.05），但試驗Ⅰ組與試驗Ⅱ組之間各檢測指標均無明顯差異。由此說明蛋雞基礎飼糧中添加不同水平的復合微生態(tài)制劑均能改善蛋雞的蛋品質(zhì)，且3%添加水平的作用效果較好。

2.3 不同添加比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞血清抗氧化性能的影響

由表4可知，與對照組相比，試驗Ⅰ、Ⅱ組均可以不同程度提高蛋雞血清總抗氧化能力，試驗Ⅰ、Ⅱ組血清T-AOC 較對照組分別提高了58.22%、65.99%（P＜0.05），試驗Ⅰ組與試驗Ⅱ組之間無顯著性差異（P＞0.05）。試驗Ⅰ組血清MDA 較對照組降低了5.09%，但影響不顯著（P＞0.05）；試驗Ⅱ組血清MDA較對照組降低14.88%，差異顯著（P＜0.05）。試驗Ⅰ組與試驗Ⅱ組之間無顯著性差異（P＞0.05）。各試驗組對蛋雞血清GSH-Px 和T-SOD 影響均不大（P＞0.05），各處理組間差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 不同添加比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

復合微生態(tài)制劑對蛋雞生產(chǎn)性能的影響已有相關報道，但由于蛋雞品種、日齡以及菌種和菌種活性的不同，最適添加量也存在著較大差異。Asli等[13]報道，添加微生態(tài)制劑組對蛋重影響不顯著。崔闖飛等[14]研究也發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加400 mg/kg 和800 mg/kg 枯草芽孢桿菌對平均蛋重無顯著影響。李曉麗等[15]研究表明，添加復合微生態(tài)制劑組的產(chǎn)蛋率、平均蛋重均高于對照組，但影響不顯著，并且V2型微生態(tài)制劑顯著降低蛋雞料蛋比。本試驗中，微生態(tài)制劑組雖然對蛋雞全期產(chǎn)蛋率和平均蛋重的提高程度未達到顯著水平，但后期研究表明，隨著時間延長，試驗組產(chǎn)蛋率均高于對照組，這表明微生態(tài)制劑在蛋雞腸道區(qū)域可能需要一定時間穩(wěn)定定植，建立優(yōu)勢菌群后而發(fā)揮益生作用，與Asli 等[13]、崔闖飛等[14]、李曉麗等[15]報道一致。李萬軍等[16]研究表明，用復合微生態(tài)制劑飼喂蛋雞42 d，與對照組相比，0.15%復合微生態(tài)制劑添加組顯著降低蛋雞的日采食量和料蛋比。周嶺等[17]研究表明，添加微生態(tài)制劑組蛋雞的平均日采食量低于對照組。崔闖飛等[14]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加200、400 mg/kg 和800 mg/kg 枯草芽孢桿菌顯著降低蛋雞的平均日采食量與料蛋比。本試驗的研究結(jié)果與上述學者研究結(jié)果基本一致，說明微生態(tài)制劑能顯著降低蛋雞的平均日采食量與料蛋比，提高了蛋雞養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益，飼喂3%微生態(tài)制劑達到顯著水平。其原因可能包括2 個方面：本研究所用微生態(tài)制劑含有多種益生菌，研究認為，益生菌一方面產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸和乳酸，降低腸道pH 值，提高腸內(nèi)酸度，從而抑制有害菌的生長[18-20]；另一方面益生菌也可產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶、纖維素酶等多種消化酶，可與體內(nèi)的酶發(fā)揮協(xié)同作用，促進其腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的利用率[21-23]。

表3 不同添加比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

表4 不同添加比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞血清抗氧化指標的影響

3.2 不同添加比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞常規(guī)蛋品質(zhì)的影響

蛋殼厚度、蛋殼強度是用來評價蛋殼質(zhì)量的常用指標。胡昌艷等[24]在羅曼蛋雞飼糧中添加復合微生物制劑飼養(yǎng)30 d 后發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加60 mg/kg 復合微生物制劑，能夠顯著提高雞蛋的蛋殼厚度，添加90 mg/kg 復合微生物制劑在一定程度上可提高蛋黃顏色。Lei 等[25]發(fā)現(xiàn)飼料添加不同水平的地衣芽孢桿菌可通過增加蛋殼厚度來有效改善雞蛋質(zhì)量。白子金等[26]將微生物制劑按不同水平添加于海蘭褐蛋雞的日糧中，評價其對海蘭褐蛋雞蛋品質(zhì)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，中等添加量提高蛋殼厚度的效果最好，對蛋黃顏色具有很好的改善作用。劉愛君等[27]研究表明蛋雞飼糧中添加乳酸菌類微生態(tài)制劑可顯著提高蛋殼厚度，一定程度上改善了蛋黃顏色，但未達到顯著水平。在本試驗條件下，與對照組相比飼糧中添加3%復合微生物制劑顯著增加了蛋殼厚度，對蛋黃顏色也有一定的改善作用，這與胡昌艷等[24]、Lei等[25]、白子金等[26]、劉愛君等[27]的報道相一致。復合微生態(tài)制劑可顯著提高雞蛋的蛋殼厚度的原因可能是復合微生態(tài)制劑為腸道創(chuàng)造了良好的消化環(huán)境，促進了鈣、磷等礦物質(zhì)的吸收利用[28-30]。對于蛋黃顏色而言，可能是復合微生態(tài)制劑促進了蛋雞對飼料中固有色素的吸收、沉積；另外復合微生態(tài)制劑在代謝過程中可產(chǎn)生番茄紅素等類胡蘿卜素，從而加深蛋黃顏色[31-32]。

3.3 不同添加比例的復合微生態(tài)制劑對蛋雞血清抗氧化性能的影響

GSH-Px和T-SOD是動物體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)的2種重要的抗氧化酶，起著清除超氧自由基、過氧化氫和過氧化物等活性氧自由基的作用。T-AOC 是反映機體的抗氧化能力的綜合性指標。MDA是脂質(zhì)過氧化的標志性產(chǎn)物，通過檢測MDA 可間接判定膜系統(tǒng)的受損程度。趙夢迪等[33]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中使用酵母菌-紅曲霉復合制劑對機體抗氧化能力有一定的調(diào)節(jié)作用，酵母菌-紅曲霉復合制劑可顯著提高蛋雞血清、肝臟及蛋黃中T-AOC，顯著降低MDA(丙二醛)的含量。孫玲等[34]研究發(fā)現(xiàn)，蛋雞飼糧中添加微生態(tài)制劑可極顯著提高血清T-AOC、降低MDA 含量。李嘉懿等[35]研究發(fā)現(xiàn)，在蛋雞飼糧中添加100 mg/kg凝結(jié)芽孢桿菌可顯著提高血清T-AOC 含量，并且在一定程度上降低MDA 含量。本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加1.5%、3%復合微生態(tài)制劑均顯著增加了血清T-AOC，其中3%復合微生態(tài)制劑添加組顯著降低了血清MAD 含量，與趙夢迪等[33]、孫玲等[34]、李嘉懿等[35]研究結(jié)果基本一致，表明復合微生態(tài)制劑在抗氧化過程中可消除機體自由基或減少活性氧的產(chǎn)生，保護蛋雞免受氧化應激損傷，維持機體的健康狀態(tài)[34，36-37]。陳家祥等[38]在麻羽肉雞飼糧中添加50 mg/kg 的地衣芽孢桿菌，研究發(fā)現(xiàn)飼糧添加地衣芽孢桿菌能顯著提高血清GSH-Px 及SOD 的活性。張鑫等[39]飼喂海蘭褐蛋雞不同微生態(tài)制劑發(fā)現(xiàn)，各試驗組的血液中GSH-Px 與SOD均顯著高于對照組。本試驗與陳家祥等[38]、張鑫等[39]研究結(jié)果不完全一致，其原因可能與試驗動物的品種、日齡以及微生態(tài)制劑的種類和添加量有一定關系，具體原因還有待進一步研究。

4 結(jié)論

綜上所述，羅曼蛋雞飼糧中添加1.5%的復合微生態(tài)制劑可顯著提高蛋雞血清T-AOC含量，添加3%的復合微生態(tài)制劑可顯著提高血清T-AOC 含量，顯著降低MDA 含量，在生產(chǎn)性能方面，飼糧中添加3%的復合微生態(tài)制劑可顯著提高試驗后期產(chǎn)蛋率，顯著降低全期的平均日采食量、料蛋比，同時極顯著提高了蛋殼厚度。蛋雞飼糧中添加復合微生態(tài)制劑，3%添加組作用效果優(yōu)于1.5%添加組。