何春華 張斌忠 王胤達(dá) 董來榮

(嘉興學(xué)院附屬第二醫(yī)院腫瘤外科，浙江 嘉興 314000)

胃癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，其預(yù)后比較差，對(duì)患者健康造成嚴(yán)重威脅。隨著胃癌診治技術(shù)的不斷發(fā)展，胃癌的預(yù)后有所改善，但胃癌的早期診斷率仍比較低，使部分患者不能及時(shí)診治，導(dǎo)致生存率仍不樂觀〔1〕。探索胃癌發(fā)生發(fā)展的標(biāo)志物對(duì)早期防治胃癌和改善胃癌預(yù)后具有重要意義。微小RNA(miR)在動(dòng)植物中廣泛存在，在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用〔2〕。miR-93-5p為新發(fā)現(xiàn)的miRNA，在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常，在惡性腫瘤的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用〔3，4〕。本文對(duì)胃癌患者血清miR-93-5p水平進(jìn)行研究，探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 收集2011年1月至2013年11月嘉興學(xué)院附屬第二醫(yī)院老年胃癌患者160例和同期老年健康體檢者160例分別作為胃癌組和對(duì)照組。胃癌患者均為首診、病理證實(shí)為胃癌；兩組簽署知情同意書、年齡≥60歲。研究經(jīng)嘉興學(xué)院附屬第二醫(yī)院倫理委員會(huì)審批后進(jìn)行。胃癌組年齡(67.85±6.76)歲，腫瘤最大徑(4.87±1.92)cm；TNM分期Ⅰ期37例、Ⅱ期58例、Ⅲ期51例、Ⅳ期14例；局部浸潤深度T1 32例、T2 44例、T3 51例、T4 33例；分化程度：低分化128例、中分化18例、高分化14例；對(duì)照組年齡(68.13±7.02)歲，男110例、女50例。兩組年齡、性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2研究方法 miR-93-5p測(cè)定：抽取患者外周靜脈血5 ml，置于離心機(jī)中離心(2 000 r/min)10 min，分離血清，加入Trizol提取總RNA，酶標(biāo)儀測(cè)定RNA質(zhì)量和濃度，將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以U6為內(nèi)參照，在PCR儀中擴(kuò)增，PCR條件為：95℃ 10 min；95℃ 20 s、60℃ 30 s、72℃ 30 s，共42個(gè)循環(huán)。以2-ΔΔCT表示血清miR-93-5p水平。PCR試劑盒及miR-93-5p引物購自美國ABI公司。

1.3隨訪 胃癌術(shù)后通過門診或電話隨訪，隨訪截止時(shí)間為2018年11月30日。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析血清miR-93-5p對(duì)胃癌的診斷價(jià)值，采用Kaplan-Meier法繪制患者生存曲線，預(yù)后影響因素采用Cox分析。

2 結(jié) 果

2.1胃癌患者血清miR-93-5p水平 與對(duì)照組血清miR-93-5p水平(1.00±0.08)比較，胃癌組血清miR-93-5p水平明顯升高(1.86±0.14，t=67.464，P<0.001)。

2.2不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93-5p水平比較 不同性別、年齡、腫瘤最大徑、分化程度者血清miR-93-5p水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；不同TNM分期、局部浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者血清miR-93-5p水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，TNM分期高、局部浸潤深度深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者血清miR-93-5p水平明顯高于TNM分期低、局部浸潤深度淺、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 不同胃癌臨床病理特征患者血清miR-93-5p水平比較

2.3血清miR-93-5p診斷胃癌的效能 采用ROC曲線分析血清miR-93-5p診斷胃癌的效能，根據(jù)約登指數(shù)計(jì)算血清miR-93-5p最佳界值為1.324，ROC曲線下面積為0.871，95%CI為0.868～0.874，根據(jù)此界值判斷胃癌的靈敏度為71.25%(114/160)，特異度為96.25%(154/160)。見圖1。

圖1 血清miR-93-5p診斷胃癌的ROC曲線

2.4血清miR-93-5p與胃癌預(yù)后的關(guān)系 160例胃癌患者隨訪5年，根據(jù)ROC曲線約登指數(shù)計(jì)算的血清miR-93-5p=1.324為界，將患者分為高表達(dá)組92例和低表達(dá)組68例，高表達(dá)組5年總生存率(51.09%)和無病生存率(39.13%)均明顯低于低表達(dá)組(79.41%、70.59%，χ2=13.477、15.516，P<0.001)。見圖2和圖3。

2.5胃癌預(yù)后的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)分析 以血清miR-93-5p水平、TNM分期、局部浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為自變量進(jìn)行胃癌預(yù)后影響因素Cox比例分析，結(jié)果顯示：血清miR-93-5p水平、TNM分期、局部浸潤深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為胃癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)。見表2。

圖2 血清miR-93-5p與胃癌無病生存率的關(guān)系

圖3 血清miR-93-5p與胃癌累積生存率的關(guān)系

表2 胃癌預(yù)后影響因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型參數(shù)

3 討 論

胃癌患者早期癥狀缺乏特異性，難以鑒別，往往發(fā)展至晚期時(shí)才得以確診，錯(cuò)過最佳治療時(shí)機(jī)，預(yù)后比較差〔5〕。胃癌死亡率比較高的主要原因?yàn)闊o有效的早期篩查和診斷胃癌的方法〔6〕。胃鏡檢查為早期診斷胃癌的主要方法，但其為有創(chuàng)操作，難以普及；臨床常用的CA199、癌胚抗原等腫瘤標(biāo)志物在胃癌的篩查中特異性和靈敏性不足，故探討新的非侵入性胃癌診斷標(biāo)志物具有重要價(jià)值。miRNA為非編碼、單鏈小RNA，可參與多種關(guān)鍵的生理病理活動(dòng)；miRNA在惡性腫瘤的發(fā)病過程中也發(fā)揮重要作用，在惡性腫瘤的組織和細(xì)胞中，多種miRNA表達(dá)異?！?，8〕。miRNA通過調(diào)控癌基因表達(dá)或抑癌基因表達(dá)參與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，多數(shù)miRNA發(fā)揮促進(jìn)惡性腫瘤發(fā)生的作用，也有部分miRNA發(fā)揮抑制惡性腫瘤發(fā)生的作用〔9〕。多種miRNA在胃癌的發(fā)生發(fā)展中也發(fā)揮重要作用，如Feng等〔10〕研究發(fā)現(xiàn)miR-27b可通過靶向NR2F2抑制胃癌轉(zhuǎn)移；湯光華等〔11〕研究發(fā)現(xiàn)老年胃癌患者血清miR-18a水平升高，為胃癌篩查診斷中新的血清學(xué)指標(biāo)；Jin等〔12〕研究發(fā)現(xiàn)miR-582-5p可通過靶向AKT3抑制胃癌細(xì)胞的增殖。miR-93-5p位于11q22.1染色體上，屬于miR-106b-25家族，在哺乳動(dòng)物中miR-93-5p比較保守〔13〕。近來研究發(fā)現(xiàn)miR-93-5p在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常，在多種惡性腫瘤的發(fā)病中具有重要作用。如張春明等〔14〕研究發(fā)現(xiàn)喉癌組織和細(xì)胞中miR-93-5p表達(dá)升高，其為喉癌發(fā)生發(fā)展過程中的重要癌基因；胡怡然等〔15〕研究發(fā)現(xiàn)miR-93-5p在直腸癌組織中也高表達(dá)，miR-93-5p水平與直腸癌體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，其有望成為直腸癌新的生物標(biāo)志物；Wang等〔16〕研究發(fā)現(xiàn)miR-93-5p可通過下調(diào)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A基因的表達(dá)增強(qiáng)人結(jié)腸直腸癌細(xì)胞的多藥耐藥性。本研究結(jié)果表明miR-93-5p在胃癌的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，血清miR-93-5p水平和胃癌患者的病情嚴(yán)重程度關(guān)系密切，檢測(cè)血清miR-93-5p水平在胃癌篩查、嚴(yán)重程度評(píng)估和預(yù)后評(píng)價(jià)中具有重要價(jià)值。