李瑞海，賈天柱

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600）

性狀描述是對中藥品種進行真?zhèn)舞b別的一個過程，但性狀鑒別只能解決中藥是與不是的問題，而不能解決質(zhì)量好壞的問題。雖然通過長期的經(jīng)驗積累，根據(jù)經(jīng)驗可初步判斷中藥質(zhì)量好壞，但這種經(jīng)驗是一個非量化值，不客觀，也沒有實驗數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，更沒有和藥典相關(guān)成分含量高低的關(guān)聯(lián)。本研究力求將蒺藜的性狀描述和其成分含量關(guān)聯(lián)起來，進而從中藥的性狀來判斷所含有效成分的高低，初步判斷其質(zhì)量的優(yōu)劣。本研究收集了18批蒺藜樣品，根據(jù)藥典蒺藜項下的性狀，建立了蒺藜的性狀描述，對樣品性狀描述分組并利用感官評分法對其性狀描述進行量化評分，同時利用比色法對蒺藜的黃酮和皂苷成分進行含量測定，利用相似性公式進行計算，找出相似性，從而揭示蒺藜性狀外觀與主要成分的聯(lián)系。本研究試圖從性狀外觀上找到與蒺藜質(zhì)量的聯(lián)系和關(guān)系，進而從性狀外觀上初步判斷蒺藜質(zhì)量的好壞，為蒺藜經(jīng)驗鑒定和中藥炮制品質(zhì)量提供一定的理論基礎(chǔ)，也為其他中藥材的此類研究提供了一定的思路[1-3]。

1 儀器與材料

UV5200分光光度計（日立日本）；HC-2062離心機（中科安徽）；QS64超聲提取器（奧特賽恩斯天津）；UV SL2.1工作站（日立日本）；SF-130B粉碎機（上海冠聯(lián)）；微波爐（格蘭仕P70F23P-G5）。

18個蒺藜購于全國多個地區(qū)，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)王榮祥教授鑒定符合藥典要求；蒺藜苷元對照品（25R-Spiro-stan-4-ene-3,12-dione，實驗室自制，純度≥98%）、蘆丁對照品（大連美侖，批號20180403，純度99.5%）；鹽酸等試劑均為分析純（國藥集團公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

取蒺藜苷元，加甲醇制成0.021mg·mL-1溶液，取蘆丁加稀乙醇制成0.015mg·mL-1溶液。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 取蒺藜樣品 細(xì)粉0.5g，精密稱定，置圓底瓶中，精密加甲醇50mL，稱定重量，加熱回流2h，放冷，再稱重，甲醇補失重，搖勻，濾過，精吸續(xù)濾液10mL，回收至干，殘渣加正丁醇飽和的水10mL，用水飽和正丁醇提取5次，每次10mL，合并正丁醇液，用氨試液洗2次，每次5mL，正丁醇液蒸干，殘渣加80%甲醇移至并定容至50mL量瓶中，搖勻即得[4]。

2.2.2 取蒺藜樣品 細(xì)粉0.4g，精密稱定，加石油醚25mL索氏提取器提取4h，石油醚棄去，藥渣干燥，加甲醇25mL回流4h，甲醇液蒸至干，用稀乙醇定容至25mL容量瓶中，搖勻，即得[5]。

2.3 測定方法

2.3.1 精密量取蒺藜苷元3mL或2.2.1項下供試品各2～4mL置具塞試管中，揮干溶劑，精密加高氯酸5ml，搖勻，置60℃水浴保溫15min，取出后立即冰水浴冷卻至室溫，以同法為空白，在285nm波長處測定。

2.3.2 分別取蘆丁3mL和2.2.2項下供試品2～4mL于25mL的容量瓶中加 1mL的5%NaNO2搖勻5min，加1mL的10%硝酸鋁，搖勻靜置5min，加10mL的0.1%NaOH溶液，用水至容量瓶刻度，靜置15min，同法作為空白，在波長510nm下測定[6]。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取蒺藜苷元對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置具塞試管中，按2.3.1項下285nm測定。另精密吸取蘆丁對照品 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，置于25mL的容量瓶中，按2.3.2項下方法制備，在510nm處測量吸收度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖1。得回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)見表1、2。

圖1 蒺藜苷元和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of Tribulus terrestris aglycone and Rutin

表1 蒺藜苷元和蘆丁的質(zhì)量和吸收度Tab.1 Quality and absorption of Tribulus terrestris aglycone and Rutin

表2 蒺藜苷元和蘆丁的回歸方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)Tab.2 Regression equation,linear range and correlation coefficient of Tribulus terrestris and Rutin

2.5 精密度試驗

精密吸取蒺藜苷元、蘆丁對照品，按2.3項下方法測量吸收度，連續(xù)測定吸光度6次，結(jié)果見表3，RSD為0.83、0.92%，表明儀器的精度良好。

表3 精密度試驗結(jié)果Tab.3 Precision test results

2.6 重復(fù)性試驗

取1號樣品6份，按2.2項下方法制備樣品，按2.3項下方法測量吸收度，結(jié)果見表4，RSD（n=6）分別為1.17%，0.72%，說明本方法重復(fù)性良好。

表4 重復(fù)性試驗結(jié)果（mg·g-1）Tab.4 Repeatability test results（mg·g-1）

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，按2.2項下方法制備，在0，10，20，30，40，60min 時間點測定吸光度，結(jié)果見表 5，RSD（n=6）分別為 1.06%，1.07%，表明對照品在60min內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定可靠。

表5 穩(wěn)定性試驗結(jié)果Tab.5 Stability test results

2.8 加樣回收試驗

精密稱取已知含量的樣品0.25g（測定蘆丁含量取 0.2g），加入蒺藜苷元 7.60mg（測定蘆丁 2.77mg），按2.2項下方法制備，按2.3項下方法測定吸光度，計算含量及回收率，結(jié)果見表6。

表6 加樣回收試驗結(jié)果Tab.6 Test results of sample adding and recovery

2.9 蒺藜飲片性狀與主要成分的相關(guān)性分析

2.9.1 各產(chǎn)地樣品含量測定 精密稱取各產(chǎn)地樣品適量，按2.2項下方法制備供試品溶液，按2.3項下方法測定，結(jié)果見表7。

表7 蒺藜樣品中總皂苷和總黃酮成分測定結(jié)果（mg·g-1）Tab.7 Determination results of total saponins and flavonoids in Tribulus terrestris samples（mg·g-1）

2.9.2 蒺藜飲片性狀描述的確定和評分 根據(jù)18批蒺藜飲片樣品，參照2015版《中國藥典》蒺藜性狀的描述，分組并評分，即“本品為不規(guī)則的段（A），根呈黑褐色，密生須根（B）。莖干質(zhì)硬（C），表面深綠色（D），無毛，被長柔毛或長硬毛（E）。葉多破碎皺縮（F），展開可見矩圓形或斜短圓形（G），被柔毛（H）。有時可見黃色小花（I），可見單一或5個放射狀排列分果瓣（J），背部黃綠色（K），隆起，有縱棱及多數(shù)小刺，并有對稱的長刺和短刺各1對（L），氣微，味苦、辛(M）”。將18批樣品，隨機取等量（200g），平鋪在桌面上，將其分成A～M部分進行評分。對于每一部分評分的標(biāo)準(zhǔn)是，如果不具有相應(yīng)性狀特點的則計0分，具有的則計1分，如果具有且相對較多的時則記2分，結(jié)果列于表4。

表4 蒺藜性狀評分與含量權(quán)衡值Tab.4 Trait trade-offs，content similarity of Tribulus terrestris

表5 蒺藜性狀與含量的相似度Tab.5 Trait trade-offs，content similarity of Tribulus terrestris

2.9.3 樣品總皂苷與總黃酮含量差異權(quán)衡方法 為了避免樣品所含總皂苷、總黃酮的量差異較大而引起的比較結(jié)果的誤差（即含量大的成分影響較大，而含量小的影響較小的狀況），將樣品的每一個總皂苷或總黃酮的含量均除以18個樣品當(dāng)中相應(yīng)的總皂苷或總黃酮含量最大的數(shù)值，得權(quán)衡值，見公式（1），結(jié)果見表4，利用公式（2）[7]，將18個蒺藜飲片性狀的A-M評分值和總皂苷與總黃酮含量的權(quán)衡值進行比較，相似度計算結(jié)果見表5。

式中 n：某一生物堿含量；contentnmax：同一生物堿含量最高值。

式中 x：性狀評分值或生物堿權(quán)衡值；y：總堿權(quán)衡數(shù)值。

3 結(jié)果與討論

從實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本品為不規(guī)則的段（A），莖干質(zhì)硬（C），展開可見矩圓形或斜短圓形（G），被柔毛（H）。有時可見黃色小花（I），可見單一或5個放射狀排列分果瓣（J），隆起，有縱棱及多數(shù)小刺，并有對稱的長刺和短刺各1對（L）等性狀描述在18個產(chǎn)地蒺藜樣品當(dāng)中均有，沒有變化的趨勢，因此不能夠進行相似性計算。

與總皂苷含量變化相比，背部黃綠色（K）為73%，氣微，味苦、辛（M）為82%相似度很高，說明果實發(fā)黃綠色和苦、辛味濃的蒺藜總皂苷含量的相對較高。而B、D、E、F和I等這些性狀與總皂苷相似度非常低，說明這些性狀與總皂苷含量沒有關(guān)系。

與總黃酮含量變化相比，表面深綠色（D）86%，葉多破碎皺縮（F）80%，相似度極高，達(dá)到80%以上，說明莖表面深綠色（D）和葉多破碎皺縮（F）的蒺藜總黃酮含量相對要高，B、E、I、K和M等這些性狀與總黃酮相對較低，說明這些性狀與總黃酮含量關(guān)系不大。

總成分是總皂苷和總黃酮的權(quán)衡值加和，代表蒺藜的總的有效成分。與之相關(guān)較大的是莖表面深綠色（D）55%，葉多破碎皺縮（F）75%和（果實）背部黃綠色（K）56%，說明具有這3個性狀的蒺藜藥材質(zhì)量相對較好。

4 結(jié)論

本實驗含量測定方法采用的是比色法，目前含測常見方法高效液相色譜法，該法只能以一個或者是幾個成分去評價藥材的質(zhì)量，相對比較片面。而比色法卻能從某類成分總體的含量去評價藥材的質(zhì)量，因而更具有客觀的代表性，且本研究針對蒺藜藥材含有皂苷和黃酮，這兩類成分是蒺藜的主要活性成分，采用比色法測定皂苷和黃酮，且實驗結(jié)果具有一定的代表意義和參考價值。本實驗方法學(xué)考察結(jié)果表明，比色法簡便易行，適合皂苷和黃酮的含量測定。

本研究對蒺藜18個產(chǎn)地性狀描述每一項分別打分，每個描述和總皂苷、總黃酮和總成分含量之間的關(guān)系進行相似度計算，揭示性狀和含量之間的關(guān)系。對于蒺藜的性狀描述的客觀量化并與成分相關(guān)性進行了初步的探討和嘗試，對中藥性狀描述的客觀、量化相關(guān)研究具有一定的借鑒作用。