李虹穎， 王 利， 劉海月， 王宏軍*， 蔣 紅*

（1.錦州醫(yī)科大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧錦州 121001；2.錦州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)療學(xué)院，遼寧錦州 121013）

細(xì)菌性爛鰓病是養(yǎng)魚(yú)過(guò)程中一種常見(jiàn)的魚(yú)病，傳染迅速、發(fā)病時(shí)間較長(zhǎng)，魚(yú)苗至成魚(yú)期間均可感染，往往給養(yǎng)魚(yú)業(yè)帶來(lái)重大的經(jīng)濟(jì)損失。中草藥復(fù)方制劑在防治水生動(dòng)物疾病中有著廣泛的應(yīng)用，不僅可減小化學(xué)藥物帶來(lái)的耐藥性與藥殘超標(biāo)等問(wèn)題，而且還符合發(fā)展水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的原則（王玉堂，2014）。大黃芩魚(yú)散為魚(yú)用抗菌類中草藥制劑，有清熱解毒的功效，主治魚(yú)蝦類的細(xì)菌性爛鰓病。但獸藥典收錄的復(fù)方中草藥多為散劑，一般以拌料或飲水給藥，因此可能出現(xiàn)混合不均，不能很好地發(fā)揮療效等問(wèn)題（王宏江等，2009）。泡騰片中所含的泡騰崩解劑遇水可快速崩解，從而促進(jìn)藥用有效成分的快速分解；且崩解時(shí)產(chǎn)生大量泡沫，增加了藥物與皮膚的接觸面積，能夠更快的發(fā)揮療效（刁昱，2013）。因此，本研究旨在開(kāi)發(fā)大黃芩魚(yú)復(fù)方中草藥泡騰片，并通過(guò)單因素及響應(yīng)面試驗(yàn)選取最優(yōu)制備工藝。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 大黃提取物（西安瑞林生物科技有限公司）；黃芩提取物（陜西藤邁生物科技有限責(zé)任公司）；魚(yú)腥草提取物（江西億森植物香料有限公司）；酒石酸、碳酸氫鈉、甘露醇（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）；PEG-6000（天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠）。

DHG-9245A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒有限公司）；小型手動(dòng)壓片機(jī)（鶴壁市恒鑫儀器儀表有限公司）；雷磁PHS-3C型pH計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 大黃芩魚(yú)泡騰片制備工藝 按陀海燕等（2018）報(bào)道的方法，將提取物分別制成軟材，干燥過(guò)篩后，得酸、堿性顆粒。將其按比例混勻，壓片即可。

1.2.2 綜合評(píng)分法 按董曉睿 （2017）和傅金龍（1987）報(bào)道的方法及藥典要求確定優(yōu)先順序，權(quán)重系數(shù)分別是0.443、0.387和0.170，綜合評(píng)分=pH×0.443+崩解時(shí)限×0.387+發(fā)泡量×0.170。 根據(jù)綜合評(píng)分越小越好的原則（毛文英等，2018），選擇適合因素水平。

1.2.3 單因素試驗(yàn) 按照劉潭等（2017）報(bào)道的方法，設(shè)崩解劑用量、酸堿比、PEG-6000用量及甘露醇用量四個(gè)因素不同水平對(duì)綜合評(píng)分的影響，各因素水平見(jiàn)表1。

表1 單因素水平表

1.2.4 響應(yīng)面試驗(yàn) 在單因素試驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，采用Design-Expert 8.0.6中的Box-Behnke設(shè)計(jì)試驗(yàn)，以綜合評(píng)分為響應(yīng)值優(yōu)化泡騰劑制備工藝參數(shù)。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 根據(jù)張玲（2010）報(bào)道方法，通過(guò)Design-Expert 8.0.6進(jìn)行方差分析，P＜0.01時(shí)，模型或各因素影響差異極顯著；0.01＜P＜0.05時(shí)，差異顯著；P＞0.05時(shí)，差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn) 由圖1A可知，泡騰崩解劑用量為60%時(shí)，綜合評(píng)分為最優(yōu)；由圖1B可知，酸堿比0.6:1時(shí)，綜合評(píng)分為最優(yōu)；由圖1C可知，當(dāng)PEG-6000用量為5%時(shí)，綜合評(píng)分為最優(yōu)；圖1D所示，綜合評(píng)分在甘露醇用量為1%時(shí)達(dá)到最低值，當(dāng)甘露醇的用量不斷增大時(shí)，綜合評(píng)分也不斷升高，因此甘露醇最佳用量選為1%。

2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化

2.2.1 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì) 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，固定選取1%的甘露醇，另外三個(gè)因素水平見(jiàn)表2。

表2 響應(yīng)面因素與水平

2.2.2 響應(yīng)面優(yōu)化結(jié)果 對(duì)表3中的結(jié)果進(jìn)行多元回歸分析，綜合評(píng)分與各因素變量之間的二次回歸方程為Y=+5.53-0.078A-0.064B+0.016C+0.058AB+0.29AC-0.040BC+0.095A2+0.10B2-0.18C2。

2.2.3 響應(yīng)面分析 通過(guò)Design-Expert 8.0.6對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示擬合模型顯著，相關(guān)系數(shù)r2=0.9325，與決定系數(shù)R2Adj=0.8456相近，表明該方程與數(shù)據(jù)有良好的擬合度（表4）。證明了擬合模型與試驗(yàn)結(jié)果吻合，表明通過(guò)模型能夠確定該泡騰片的最優(yōu)工藝。

表3 Box-Benhnken設(shè)計(jì)方案與結(jié)果

表4 回歸模型的方差分析

由圖2可知，酸堿比與泡騰崩解劑用量對(duì)綜合評(píng)分影響的相互作用差異不顯著，隨著PEG-6000用量的增加，綜合評(píng)分減小；PEG-6000用量與崩解劑之間對(duì)綜合評(píng)分影響的相互作用差異極顯著，隨著酸堿比的增加，綜合評(píng)分達(dá)到最低值；PEG-6000用量與酸堿比對(duì)綜合評(píng)分影響的相互作用差異不顯著，隨著崩解劑用量的增加，綜合評(píng)分增大。

2.2.4 優(yōu)化工藝的確定 通過(guò)Design-Expert 8.0.6分析，得到大黃芩魚(yú)復(fù)方中草藥泡騰片的最佳工藝為：崩解劑用量60%、酸堿比0.5:1、PEG-6000用量4.5%。

3 討論

3.1 評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇 層次分析法（AHP）是一種定性與定量相結(jié)合的評(píng)價(jià)方法，而綜合評(píng)分法是一種定量化的定性分析法，綜合評(píng)分完全可用AHP來(lái)確定其權(quán)重。大黃芩魚(yú)復(fù)方中草藥泡騰片的綜合評(píng)分是通過(guò)選取泡騰片質(zhì)量檢查中的崩解時(shí)限、發(fā)泡量及pH作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，再根據(jù)藥典內(nèi)多種泡騰片中對(duì)質(zhì)量檢測(cè)的要求，確定其優(yōu)先順序?yàn)閜H＞崩解時(shí)限＞發(fā)泡量。

3.2 水產(chǎn)養(yǎng)殖中泡騰劑使用情況 研究表明，中草藥提取物對(duì)于降低中草藥制劑生產(chǎn)成本、制劑配伍及新藥研究都有重要意義（顧進(jìn)華，2017）。在獸藥典中收錄的關(guān)于治療水產(chǎn)動(dòng)物疾病的成方制劑仍以散劑為主，由于水生生物生存環(huán)境的不同，對(duì)劑型進(jìn)行改進(jìn)和創(chuàng)新已成為必然趨勢(shì)，泡騰劑、微囊劑等成為了中獸藥新藥研究開(kāi)發(fā)的新方向（李樹(shù)綱等，2010）。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，已有增氧、水體消毒類的泡騰片，但鮮見(jiàn)用于魚(yú)病治療的泡騰劑。因此，大黃芩魚(yú)復(fù)方中草藥泡騰劑制備工藝的優(yōu)化對(duì)更好的發(fā)揮其療效及水產(chǎn)養(yǎng)殖具有重要意義。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，大黃芩魚(yú)復(fù)方中草藥泡騰劑最優(yōu)的制備工藝為：崩解劑用量60%、酸堿比0.5:1、PEG-6000用量4.5%、甘露醇用量1%，且該泡騰片的pH、崩解時(shí)限及發(fā)泡量均符合藥典中對(duì)泡騰片的質(zhì)量檢查要求。