覃煒玲 湯敏中 徐霄 陳學(xué)杰

【摘要】?目的?檢測(cè)鼻咽癌患者血漿中BART-miRNAs的表達(dá)情況，評(píng)價(jià)它們對(duì)鼻咽癌診治的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法?采用反轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)111例首診鼻咽癌患者、42例治療后復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者、22例非鼻咽癌患者及24名健康體檢者血漿中BART-miRNAs，統(tǒng)計(jì)分析其與鼻咽癌患者臨床特點(diǎn)的關(guān)系，以及治療前后的變化，繪制ROC曲線，計(jì)算AUC，評(píng)估其作為鼻咽癌診斷工具的性能。結(jié)果?鼻咽癌患者血漿中EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p相對(duì)表達(dá)水平顯著高于非鼻咽癌患者與健康體檢者（P<0.05），均與患者N分期和臨床分期相關(guān)（P<0.05），且在治療后顯著下降（P<0.05），而治療后轉(zhuǎn)移患者相對(duì)表達(dá)水平顯著升高。單獨(dú)檢測(cè)診斷鼻咽癌的AUC為0.829和0.833，聯(lián)合檢測(cè)診斷鼻咽癌的AUC為0.860。結(jié)論?檢測(cè)血漿中EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p，可為鼻咽癌診療以及分期等進(jìn)一步研究提供有效依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】?鼻咽癌;EBV;BART-miRNAs;EBV-miR-BART7-3p;EBV-miR-BART17-5p

中圖分類號(hào)：R739.6?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2020.12.004

【Abstract】?Objective?To detect the expression of BART-miRNAs in plasma of patients with nasopharyngeal carcinoma， and evaluate their clinical application values in the diagnosis and treatment of nasopharyngeal carcinoma.Methods?RT-PCR was used to detect BART-miRNAs in plasma of 111 patients with first diagnosed nasopharyngeal carcinoma， 42 patients with recurrent / metastatic nasopharyngeal carcinoma after treatment， 22 patients without nasopharyngeal carcinoma and 24 healthy controls. And then， relationship between BART-miRNAs and clinical characteristics of patients with nasopharyngeal carcinoma， as well as the changes before and after treatment， were statistically analyzed. ROC curve was drawn， AUC was calculated， and its performance as a diagnostic tool for nasopharyngeal carcinoma was evaluated.Results?The relative expression levels of EBV-miR-BART7-3p and EBV-miR-BART17-5p in the plasma of nasopharyngeal carcinoma patients were significantly higher than those of patients without nasopharyngeal carcinoma and healthy people （P < 0.05），?which were all correlated with N stage and clinical stage of patients （P < 0.05）， and decreased significantly after treatment （P < 0.05）， and the relative expression level of metastatic patients increased significantly after treatment. The AUC of single detection for diagnosis of nasopharyngeal carcinoma was 0.829 and 0.833， and that of?combined diagnosis of was 0.860.Conclusion?The detection of EBV-miR-BART7-3p and EBV-miR-BART17-5p in plasma can provide an effective basis for the diagnosis， treatment and staging of nasopharyngeal carcinoma.

【Key words】?nasopharyngeal carcinoma; EBV; BART-miRNAs; EBV-miR-BART7-3p; EBV-miR-BART17-5p

鼻咽癌系一種來源于鼻咽黏膜的上皮細(xì)胞惡性腫瘤，其發(fā)病與環(huán)境因素、EBV感染、遺傳因素等密切相關(guān)，我國(guó)鼻咽癌發(fā)病和死亡仍處于世界較高水平，發(fā)病與死亡高發(fā)的區(qū)域主要集中在兩廣地區(qū)，發(fā)病率都在10/105以上[1～3]。鼻咽癌早期易漏診，絕大部分新發(fā)鼻咽癌病例為局部晚期（Ⅲ期、Ⅳ期）[4]。隨著放射治療技術(shù)的發(fā)展，鼻咽癌的治療已從傳統(tǒng)的放化療發(fā)展為以放療為主的綜合治療階段[5]。然而，由于仍然缺乏高效能低毒性的靶向藥物與新的治療方法，鼻咽癌患者不得不承受放射治療與化療藥物帶來的損傷與毒副作用，許多患者在治療后出現(xiàn)了放射性鼻竇炎、放射性中耳炎、放射性顱神經(jīng)損傷、放射性腦病等，還有不同程度的骨髓抑制、貧血、低蛋白血癥等，這無疑加重了患者的疾病負(fù)擔(dān)。尋找敏感特異的生物標(biāo)志物可能是提高鼻咽癌治愈率、獲得良好預(yù)后以及減少疾病負(fù)擔(dān)的關(guān)鍵所在。EBV miRNAs在鼻咽癌中的表達(dá)譜已被廣泛研究，BART-miRNAs高表達(dá)于鼻咽癌組織中[6～9]。在鼻咽癌細(xì)胞中，BART-miRNAs約占總miRNA含量的15.57%，然而在病毒和細(xì)胞基因的總體調(diào)控影響中，BART-miRNAs卻占相當(dāng)大的比例，有著很關(guān)鍵的作用[6，9]。因此， BART-miRNAs作為鼻咽癌診斷的血清學(xué)標(biāo)志物的用途以及是否適合在臨床推廣應(yīng)用則需要更大的樣本量加以研究與驗(yàn)證。此次研究通過檢測(cè)鼻咽癌患者治療前后、非鼻咽癌患者以及健康體檢者血漿中BART-miRNAs的表達(dá)情況，分析它們與患者臨床特點(diǎn)、分期、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移等的關(guān)系，以及治療前、中、后的水平改變，評(píng)價(jià)它們?cè)诒茄拾┰\治中的臨床應(yīng)用價(jià)值，并評(píng)估它們是否能用來準(zhǔn)確預(yù)測(cè)預(yù)后及監(jiān)測(cè)鼻咽癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，以期為鼻咽癌的早診早治與預(yù)后評(píng)估等提供有效、可靠的依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?研究對(duì)象

收集2019年8月～2020年3月間在梧州市紅十字會(huì)醫(yī)院就診的鼻咽癌患者血液樣本，以同階段就診的非鼻咽癌患者與健康體檢者作為對(duì)照，記錄他們?cè)\斷時(shí)的年齡、性別、診斷、臨床分期、病史和轉(zhuǎn)移狀態(tài)等臨床信息。所有鼻咽癌患者均經(jīng)過鼻咽活檢病理檢查確診，并根據(jù)WHO分類方法分類，既往無其他惡性腫瘤史;均行MRI檢查、CT掃描等常規(guī)檢查方法，評(píng)估患者腫瘤情況、淋巴結(jié)播散程度以及是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的情況，并根據(jù)鼻咽癌中國(guó)分期2017版進(jìn)行準(zhǔn)確分期。治療方案由主診醫(yī)師依照個(gè)體化原則，科學(xué)合理制訂。收集首診鼻咽癌患者治療結(jié)束時(shí)的血液樣本，以分析治療過程中BART-miRNAs表達(dá)水平的變化。所有樣本均為患者診療過程中臨床檢測(cè)后剩余的血液樣本，所有納入分析的樣本臨床診斷信息完整可溯源，對(duì)于臨床診斷信息保存不完整，樣本量不足或源記錄不清晰的樣本則被剔除;人為因素（如操作不當(dāng)、操作過程樣本污染等）或儀器問題導(dǎo)致無法完成實(shí)驗(yàn)過程的樣本則被剔除;實(shí)驗(yàn)重復(fù)孔結(jié)果之間差異大的樣本剔除。

1.2?研究方法

1.2.1?樣本采集與儲(chǔ)存

所有血液樣本均在采集后6小時(shí)之內(nèi)處理，離心分離出血漿，分裝到RNase-free凍存管中，置于零下80℃的低溫冰箱保存，用于后續(xù)血漿RNA的提取和檢測(cè)。

1.2.2?參照的選擇與序列

選擇合成的Caenorhabditis elegans microRNA，cel-miR-39-3p作為RNA提取、cDNA合成以及PCR期間變化的參照。從miRBas 中獲取各目標(biāo)序列，其中EBV-miR-BART7-3p為5-CAUCAUAGUCCAGUGUCCAGGG-3;EBV-miR-BART17-5p為5-UAAGAGGACGCAGGCAUACAAG-3;cel-miR-39-3p為5-UCACCGGGUGUAAAUCAGCUUG-3。

1.2.3?BART-miRNAs的提取

采用天根生化科技生產(chǎn)的miRcute血清/外周血miRNA提取分離試劑盒從血漿中提取總RNA，即血漿200 μL與900 μL的裂解液MZA混勻，最終RNA在60 μL RNase-free Water中洗脫，保存于-80℃，直到進(jìn)一步處理。提取過程中，所有樣本加入等量的cel-miR-39-3p（InvitrogenTM mirVanaTM miRNA Mimics），以監(jiān)測(cè)RNA提取的偏倚。

1.2.4?反轉(zhuǎn)錄與實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

取9.16 μL總RNA加入2.84 μL反轉(zhuǎn)錄體系中，與3 μL的5×RT引物混勻，制備cDNA。反轉(zhuǎn)錄試劑盒TaqMan?MicroRNA Reverse Transcription Kit來自美國(guó)Applied Biosystems，反轉(zhuǎn)錄程序?yàn)椋?6℃ 30 min，42℃ 30 min反轉(zhuǎn)錄，85℃ 5 min終止反應(yīng)，4℃保溫。取2 μL的cDNA作為模板加入18 μL配制好的PCR體系進(jìn)行擴(kuò)增。其中，配制PCR體系的TaqMan?Universal Master Mix Ⅱ（no UNG）以及PCR試劑盒TaqManTMSmall RNA Assay均來自美國(guó)Applied Biosystems。擴(kuò)增條件為：95℃ 10 min，1個(gè)循環(huán);95℃ 15 s，60℃ 60 s，50個(gè)循環(huán)。

1.2.5?結(jié)果計(jì)算與分析

查看擴(kuò)增圖譜，判斷有無擴(kuò)增，然后根據(jù)需要調(diào)整基線和閾值，查看每孔的Ct值。模板的豐度越低，Ct值越大，Ct值>40為低表達(dá)或不表達(dá)。取3孔Ct值的平均值作為終值，對(duì)于分析后的Ct值，運(yùn)用2-ΔCt法來計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量，ΔCt=Ct目的基因-Ct參照。模板豐度越低，Ct值越大，ΔCt也越大，相應(yīng)的2-ΔCt值越小，為方便數(shù)據(jù)計(jì)算，所得數(shù)值均放大10 000倍。

1.3?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用IBM SPSS Statistics 26.0軟件對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，結(jié)果各組數(shù)據(jù)均不符合正態(tài)分布，因而以中位數(shù)（四分位間距）[M（P25～P75）]描述各指標(biāo)水平。采用K-W檢驗(yàn)對(duì)各指標(biāo)在鼻咽癌患者、非鼻咽癌患者與健康體檢者中的表達(dá)差異進(jìn)行分析;采用K-W檢驗(yàn)對(duì)各指標(biāo)與患者T分期、N分期及臨床分期的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;采用Mann-Whitney U 秩和檢驗(yàn)對(duì)各指標(biāo)與患者年齡、性別及M分期的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;采用Friedman秩和檢驗(yàn)對(duì)各指標(biāo)在治療前中后的差異進(jìn)行分析;采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)分析兩變量的相關(guān)性，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，雙側(cè)檢驗(yàn)。通過繪制ROC曲線，計(jì)算與比較ROC曲線下面積AUC，以評(píng)估各指標(biāo)作為鼻咽癌診斷工具的性能。根據(jù)約登指數(shù)（Youden）最大原則選出最佳截?cái)嘀担?jì)算靈敏度與特異度。

2?結(jié)?果

2.1?研究對(duì)象臨床資料特點(diǎn)

研究中對(duì)下列血漿樣本進(jìn)行了檢測(cè)與分析：111例首診治療前鼻咽癌患者、42例治療后復(fù)發(fā)和（或）轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者、22例非鼻咽癌患者以及24名健康體檢者，各組間性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2?EBV-miR-BART7-3p、EBV-miR-BART17-5p在各組中的表達(dá)情況

剔除實(shí)驗(yàn)重復(fù)孔結(jié)果之間差異大的樣本后，首診鼻咽癌患者治療前血漿中EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p的表達(dá)水平明顯高于非鼻咽癌患者和健康體檢者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001），表明EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p在鼻咽癌患者血漿樣本中是特異并且可被檢測(cè)的。見表2。

2.3?首診鼻咽癌患者治療前血漿EBV-miR-BART7-3p、EBV-miR-BART17-5p的表達(dá)與鼻咽癌患者臨床特點(diǎn)的關(guān)系

血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p的相對(duì)表達(dá)水平均因患者的淋巴結(jié)播散情況（N分期）與臨床分期不同而存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表3。

2.4?治療對(duì)血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p表達(dá)的影響

首診鼻咽癌患者中，41例患者具有綜合放化療結(jié)束時(shí)的血液樣本，其中16例患者同時(shí)具有2個(gè)療程化療后及綜合放化療結(jié)束時(shí)采集的血液樣本，研究中均對(duì)這些樣本進(jìn)行檢測(cè)。為了分析治療對(duì)血漿中EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p表達(dá)水平的影響，評(píng)價(jià)它們是否能用來準(zhǔn)確評(píng)估療效，研究中還檢測(cè)了鼻咽癌患者2療程化療后與綜合放化療結(jié)束時(shí)，血漿中EBV-miR-BART7-3與EBV-miR-BART17-5p的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，隨著治療的進(jìn)行，血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p表達(dá)水平顯著下降，治療后，兩者的表達(dá)水平顯著低于治療前（P<0.001）。見表4。

2.5?綜合治療后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者血漿中EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p的表達(dá)情況

綜合治療后發(fā)生復(fù)發(fā)和（或）轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者，血漿EBV-miR-BART7-3p和EBV-miR-BART17-5p的相對(duì)表達(dá)量顯著高于非鼻咽癌患者與健康體檢者（P<0.05）;與首診鼻咽癌患者比較，血漿EBV-miR-BART7-3p的表達(dá)水平較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;綜合治療后發(fā)生復(fù)發(fā)和（或）轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者血漿EBV-miR-BART17-5p的相對(duì)表達(dá)量雖高于首診鼻咽癌患者，但是差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見圖1、2。

進(jìn)一步比較綜合治療后復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者血漿中EBV-miR-BART7-3p和EBV-miR-BART17-5p表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)綜合治療后發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)，血漿EBV-miR-BART7-3p和EBV-miR-BART17-5p表達(dá)的水平顯著高于首診非轉(zhuǎn)移（M0）或轉(zhuǎn)移（M1）鼻咽癌患者，也高于治療后發(fā)生復(fù)發(fā)的患者（P<0.05）。見圖2、3。

2.6?EBV-miR-BART7-3p、EBV-miR-BART17-5p在鼻咽癌中的診斷價(jià)值

通過制作ROC曲線，評(píng)價(jià)EBV-miR-BART7-3p、EBV-miR-BART17-5p對(duì)鼻咽癌的診斷效能（圖4）。EBV-miR-BART7-3p診斷鼻咽癌準(zhǔn)確度中等，AUC為0.829，約登指數(shù)為0.540，P<0.001，95%CI為（0.755～0.903）;EBV-miR-BART17-5p診斷鼻咽癌準(zhǔn)確度中等，AUC為0.833，約登指數(shù)為0.691，P<0.001，95%CI為（0.757～0.908）。見表5。

3?討?論

EBV-BART-miRNAs在鼻咽癌中的作用機(jī)制已被廣泛研究，EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等息息相關(guān)，強(qiáng)大、多效的生物學(xué)功能是其成為鼻咽癌診斷標(biāo)志物并在臨床推廣應(yīng)用的有力依據(jù)，市場(chǎng)前景廣闊[4，10～17]。此次研究中，我們比較了首診鼻咽癌患者治療前與非鼻咽癌患者、健康體檢者血漿中EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p的相對(duì)表達(dá)水平，結(jié)果顯示EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p在鼻咽癌患者血漿中相對(duì)高表達(dá)，在非鼻咽癌患者與健康體檢者血漿中相對(duì)低表達(dá)甚至不表達(dá)，與先前報(bào)道相似[13～14，18～19]，進(jìn)一步驗(yàn)證了檢測(cè)血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p對(duì)于診斷鼻咽癌的臨床意義。

臨床分期以T、N、M分期為依據(jù)，目前，磁共振成像等影像學(xué)檢查是鼻咽癌臨床分期的首要或主要檢查手段與診斷依據(jù)，但是影像學(xué)檢查則更多以解剖學(xué)特征為依據(jù)，不容易發(fā)現(xiàn)早期病變的微小瘤灶，也不易于鑒別早期鼻咽癌與其他鼻咽增生性病變，在評(píng)估腫瘤狀態(tài)與判斷預(yù)后方面存在一定缺陷。而BART-miRNAs是由活的腫瘤細(xì)胞釋放的，因此在鼻咽癌早期，監(jiān)測(cè)BART-miRNAs的表達(dá)水平的變化可能比影像學(xué)檢查更有利于發(fā)現(xiàn)早期活躍的腫瘤細(xì)胞，有助于早期鼻咽癌的發(fā)現(xiàn)與鑒別。N分期代表著淋巴結(jié)的播散程度與范圍，是獨(dú)立的預(yù)后因素之一，并能提示復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)[20]。分析數(shù)據(jù)顯示，血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p的表達(dá)水平與患者的N分期呈正相關(guān)，隨著分期的增加，表達(dá)水平顯著上升，表明檢測(cè)這兩個(gè)BART-miRNAs能較好地反映轉(zhuǎn)移瘤灶的負(fù)荷水平，對(duì)預(yù)測(cè)預(yù)后有較好的指導(dǎo)價(jià)值。此外，基于EBV-miR-BART7-3p、EBV-miR-BART17-5p的表達(dá)與N分期相關(guān)性，以及關(guān)于EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p生物學(xué)功能的研究，可以推斷檢測(cè)血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p的表達(dá)水平，理論上能提示是否存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。但此次研究結(jié)果顯示，血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p的中位表達(dá)水平在非轉(zhuǎn)移性鼻咽癌和轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者之間無顯著差異，即與M分期無關(guān)，這或許是因?yàn)镸0期與M1期患者人數(shù)相差懸殊造成結(jié)果存在偏倚。EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p以及其他BART-miRNAs的表達(dá)水平是否能更好地反映鼻咽癌的分期，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量作研究分析。

目前，臨床上常通過觸診、影像學(xué)檢查或纖維鼻咽鏡來觀察鼻咽腫物是否縮小或消退，并結(jié)合一些腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)水平的變化來判斷治療是否有效，而后續(xù)治療方案的選擇也以瘤灶的殘存情況為依據(jù)。然而，對(duì)于微小的殘存瘤灶，上述檢查手段是很難檢測(cè)到的。我們的數(shù)據(jù)顯示，41例綜合治療后的患者在治療結(jié)束時(shí)，查體或MRI提示頸部淋巴結(jié)縮小，或纖維鼻咽鏡檢查提示鼻咽腫物縮小甚至消退，或MRI提示鼻咽部瘤灶及頸部淋巴結(jié)較前縮小，臨床上以此為判斷治療有效的依據(jù)之一。檢測(cè)這41名患者血漿EBV-miR-BART7-3與EBV-miR-BART17-5p表達(dá)水平的變化，結(jié)果顯示，隨著治療的進(jìn)行，血漿EBV-miR-BART7-3與EBV-miR-BART17-5p表達(dá)水平顯著下降，與其他學(xué)者的研究結(jié)果一致[14，18～19]。BART-miRNAs是來源于活的腫瘤細(xì)胞的，隨著治療的進(jìn)行，腫瘤組織和細(xì)胞逐漸被清除、殺滅，活的腫瘤細(xì)胞減少，其分泌的BART-miRNAs隨之減少，從而循環(huán)中BART-miRNAs的檢出水平下降。盡管表達(dá)水平顯著下降，但并非均下降到無法檢出，或降低到與健康體檢者一樣的水平，19名影像學(xué)檢查或纖維鼻咽鏡檢查顯示腫物消退的患者，血漿中仍能檢測(cè)到EBV-miR-BART7-3與EBV-miR-BART17-5p。EBV-miR-BART7與EBV-miR-BART7-3p能增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞對(duì)常用于鼻咽癌治療的化學(xué)藥物順鉑的耐藥性[11]，下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性[12];EBV-miR-BART17-5p也有助于降低鼻咽癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性[15]。此外，放射會(huì)改變內(nèi)皮細(xì)胞中miRNAs的水平，而受影響的miRNAs則調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞在后續(xù)放射中對(duì)放射治療的敏感性[21]。由此我們推斷，上述因素可能最終導(dǎo)致鼻咽癌瘤灶不能被完全清除，而殘存的瘤灶或癌細(xì)胞體積十分微小，影像檢查手段難以發(fā)現(xiàn)，因而影響評(píng)估治療后腫瘤殘存情況與療效的準(zhǔn)確性，也不利于臨床上對(duì)鼻咽癌患者放療后制訂有效的后續(xù)治療方案。因此，監(jiān)測(cè)血漿中殘留存活的細(xì)胞分泌的BART-miRNAs的表達(dá)水平變化應(yīng)比影像學(xué)檢查更敏感，更能反映微小殘留瘤灶的情況，尤其是殘存的活細(xì)胞的情況，能為療效的監(jiān)測(cè)、改善治療方案與預(yù)后提供更可靠的依據(jù)。

本研究中，血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p的表達(dá)水平在非轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者與轉(zhuǎn)移性鼻咽癌患者之間無顯著差異，但統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，綜合治療后發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者，血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p的表達(dá)水平明顯高于首診非轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者、首診轉(zhuǎn)移鼻咽癌患者以及治療后復(fù)發(fā)的患者。BART-miRNAs由活躍的細(xì)胞釋放到細(xì)胞外環(huán)境中，血漿EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p水平顯著升高，提示殘留的EBV與鼻咽癌細(xì)胞重新活躍，EBV編碼的BART-miRNAs被大量釋放到細(xì)胞外環(huán)境中。而大量表達(dá)的BART-miRNAs再次活化多條相關(guān)的信號(hào)通路，從而增強(qiáng)了鼻咽癌的侵襲性與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力。因此，對(duì)于綜合治療后的鼻咽癌患者，監(jiān)測(cè)外周血EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p等BART-miRNAs的水平，有利于早期發(fā)現(xiàn)潛在的轉(zhuǎn)移。

研究表明，EBV-miR-BART7-3p 有助于增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞的自我更新能力和再生的干細(xì)胞特性[22]，EBV-miR-BART17-5p能促進(jìn)細(xì)胞增殖而發(fā)揮促進(jìn)癌癥發(fā)展的作用[16]，由此我們推斷，若治療不能完全清除EBV和癌細(xì)胞，殘存的EBV和癌細(xì)胞在放射與化學(xué)藥物的不斷刺激下，不僅增強(qiáng)了對(duì)放射治療與化療藥物的耐受性，而且EBV編碼的BART-miRNAs也持續(xù)對(duì)相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行調(diào)控，鼻咽癌細(xì)胞自我更新和再生的干細(xì)胞特性可能也得到了進(jìn)一步增強(qiáng)，經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的自我修復(fù)、更新后，表現(xiàn)出了更強(qiáng)大的生物學(xué)活性，更活躍的鼻咽癌細(xì)胞釋放更大量的BART-miRNAs 到細(xì)胞外，并隨循環(huán)進(jìn)一步播散到遠(yuǎn)處的組織、器官，導(dǎo)致遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生，因此循環(huán)中的BART-miRNAs含量顯著升高。此次研究中，單獨(dú)應(yīng)用EBV-miR-BART7-3p或EBV-miR-BART17-5p對(duì)鼻咽癌的診斷價(jià)值中， AUC分別為0.829和0.833，與其他學(xué)者的研究結(jié)果相似[11，19]。結(jié)果提示，檢測(cè)血漿中EBV-miR-BART7-3p與EBV-miR-BART17-5p，可為鼻咽癌早期診斷、鑒別診斷以及鼻咽癌分期系統(tǒng)的進(jìn)一步研究，提供分子生物學(xué)的依據(jù)，并為患者預(yù)后判斷、個(gè)體化治療以及監(jiān)測(cè)治療后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供有效的指導(dǎo)。

參?考?文?獻(xiàn)

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（收稿日期：2020-07-13?修回日期：2020-11-06）

（編輯：王琳葵?梁明佩）