★ 向云亞 藍(lán)榮 徐晶晶*

（廈門(mén)醫(yī)學(xué)院/福建省中藥精加工與健康產(chǎn)品開(kāi)發(fā)研究室 福建 361023）

參麥袋泡茶由北沙參、麥冬、桔梗、菊花、西洋參、甘草6 味中藥組成，具有養(yǎng)陰清肺，生津利咽的功效，適用于緩解咽干音啞和口干舌燥等癥。為了有效控制制劑質(zhì)量且保證臨床療效，本試驗(yàn)對(duì)該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，建立了袋泡茶中西洋參、菊花定性的薄層色譜鑒別方法，同時(shí)建立高效液相色譜法對(duì)袋泡茶中人參皂苷Re、人參皂苷Rb1的含量進(jìn)行測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters2695 型高效液相色譜儀（美國(guó)Waters 公司），XPE105 型1/10 萬(wàn)電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司），QEZ-100 高速粉碎機(jī)（浙江屹立工貿(mào)有限公司），WD-9403C 型紫外儀（北京市六一儀器廠），TH-II 型薄層加熱器（上?？普苌萍加邢薰荆?。

1.2 試藥 聚酰胺薄膜（浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠），硅膠G 薄層板（青島海洋化工有限公司），西洋參對(duì)照藥材（批號(hào)：010-67095219）、菊花對(duì)照藥材（批號(hào)：010-67095219）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，擬人參皂苷F11 對(duì)照品（批號(hào)：wkp17081103）、人參皂苷Rb1 對(duì)照品（批號(hào)：wkp18020808）、人參皂苷Re 對(duì)照品（批號(hào)：wkp17091811）、人參皂苷Rg1 對(duì)照品（批號(hào)：wkp17111503）、綠原酸對(duì)照品（批號(hào)：wkp17112007）均購(gòu)自四川省維克奇生物科技有限公司，參麥袋泡茶（自制，批號(hào)180510、180511、180512），乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 西洋參 本品1 袋，取內(nèi)容物，加甲醇25mL，加熱回流30min，濾過(guò)，濾液蒸干，加水20ml 使殘?jiān)芙?，用水飽和的正丁醇振搖提取2 次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用水飽和的正丁醇洗滌2 次，每次10mL，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)眉状?mL 使其溶解，作為供試品溶液［1-2］。按參麥袋泡茶處方，除去西洋參，模擬工藝同法制成陰性對(duì)照溶液。另取西洋參對(duì)照藥材1g，按照上述同樣的方法制成對(duì)照藥材溶液。再取擬人參皂苷F11 對(duì)照品、人參皂苷Rb1、Re、Rg1 對(duì)照品適量，加甲醇制成各含2mg·mL-1的溶液，作為混合對(duì)照品溶液，待用。按照薄層色譜法（中國(guó)藥典2015 年版通則0502），吸取供試品、陰性對(duì)照、對(duì)照藥材以及混合對(duì)照品四種溶液各6μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以在5℃～10℃放置12h 的三氯甲烷- 乙酸乙酯- 甲醇- 水（15∶40∶22∶10）的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)后取出并晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，分別置于日光和紫外燈（365nm）下檢視。從薄層色譜圖可以看出：樣品色譜在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)或熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)位置上無(wú)干擾（圖1）。

圖1 西洋參薄層色譜圖

2.1.2 菊花 本品1 袋，取內(nèi)容物，加石油醚20 mL，超聲處理10min，棄去石油醚，藥揮干，加稀鹽酸、乙酸乙酯1mL 和50mL，超聲30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)眉状?mL 使其溶解，作為供試品溶液［1］。按參麥袋泡茶處方，除去菊花，模擬工藝同法制備陰性對(duì)照溶液。另取菊花對(duì)照藥材1 g，按照上述同樣的方法制備對(duì)照藥材溶液。取綠原酸對(duì)照品適量，用乙醇配制成每0.5mg·mL-1的對(duì)照品溶液。按照薄層色譜法（中國(guó)藥典2015 年版通則0502），分別吸取供試品、陰性對(duì)照、對(duì)照藥材以及混合對(duì)照品四種溶液各1μL，點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯- 乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1∶15∶1∶1∶2）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)后取出并晾干，置紫外燈（365nm）下檢視［3］。從薄層色譜圖中可以看出：樣品色譜與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照色譜在相應(yīng)位置上無(wú)干擾（圖2）。

圖2 菊花薄層色譜圖

2.2 人參皂苷Re、人參皂苷Rb1含量測(cè)定

2.2.1 溶液的配制

2.2.1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取人參皂苷Re、人參皂苷Rb1對(duì)照品各4.00、10.18mg，用甲醇定容到10mL 的容量瓶中，作為混合對(duì)照品溶液，放冰箱冷藏備用。

2.2.1.2 供試品溶液的制備 取制劑（批號(hào)：180510）1 袋，精密稱(chēng)定，置具塞三角瓶中，精密加入水飽和的正丁醇50mL，密塞，搖勻，稱(chēng)重，置水浴中加熱回流提取1.5h，靜置冷卻，補(bǔ)足失重，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25mL，蒸干，用甲醇適量使殘?jiān)芙夂筠D(zhuǎn)移并定容到10mL 容量瓶中，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.1.3 陰性樣品溶液的制備 按處方量比例稱(chēng)取除西洋參外的其他藥材制備陰性樣品，并按照供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

2.2.2 色 譜 條 件 Kromasil C18色 譜 柱（4.6mm×250mm,5μm），流 動(dòng) 相 為 乙 腈- 水，按表1 的流動(dòng)相梯度洗脫，柱溫30 ℃，流速1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm［4-6］，進(jìn)樣量10μL。分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液進(jìn)行含量測(cè)定，供試品溶液與對(duì)照品溶液相應(yīng)峰保留時(shí)間一致且各組分相鄰成分之間分離度較好，陰性樣品無(wú)干擾，見(jiàn)圖3。

表1 人參皂苷Re、Rb1含量測(cè)定的流動(dòng)相梯度

圖3 三種溶液的高效液相色譜圖

2.2.3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液2、5、10、15、20、25μL 注入液相色譜儀進(jìn)行含量測(cè)定，以質(zhì)量為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，求得人參皂苷Re 和人參皂苷Rb1的回歸方程分別為：Y=236519X+7039.6（r=0.9999），Y=221521X-139554（r=0.9999），線性范圍分別為0.800～10.000，2.216～25.450μg。

2.2.4 精密度實(shí)驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣6 次，記錄峰面積。求得人參皂苷Re 和人參皂苷Rb1峰面積的RSD 分別為0.73%、0.36%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取供試品（批號(hào)：180510）共6 份，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)行含量測(cè)定，求得人參皂苷Re 和人參皂苷Rb1含量的RSD 分別為1.60%、1.01%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μL，分別于0、2、4、6、12、24h 進(jìn)行測(cè)定，記錄峰面積。測(cè)得人參皂苷Re 和人參皂苷Rb1峰面積的RSD 分別為1.34%、1.17%，表明供試品溶液在24h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量（批號(hào)：180510）的樣品約0.5g，共6 份，分別置于具塞錐形瓶中，精密加入混合對(duì)照品溶液1mL，按照供試品溶液制備方法制備即得。過(guò)濾后取10μL 按“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定含量，計(jì)算平均加樣回收率。求得人參皂苷Re 和人參皂苷Rb1的平均回收率分別為99.73%、102.37%；RSD 分別為1.32%、1.68%。見(jiàn)表2。

表2 人參皂苷Re和人參皂苷Rb1加樣回收率實(shí)驗(yàn)

2.2.8 樣品含量測(cè)定 取3 批（批號(hào)：180510、180511、180512）參麥袋泡茶制劑，按“2.2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 3批次參麥袋泡茶中人參皂苷Re、Rb1含量

3 討論

3.1 薄層鑒別藥材的選擇 本制劑由北沙參、麥冬、桔梗、菊花、西洋參、甘草6 味中藥組成，在對(duì)處方中的藥材進(jìn)行薄層鑒別過(guò)程中，除了西洋參和菊花外，其他藥材未能出現(xiàn)達(dá)到符合要求的結(jié)果，故只將西洋參和菊花列入定性鑒別中。實(shí)驗(yàn)證明，西洋參和菊花的薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾，重復(fù)性良好。

3.2 含量測(cè)定指標(biāo)性成分的選擇 本研究最初選用人參皂苷Re、人參皂苷Rb1及人參皂苷Rg13 種成分作為制劑含量測(cè)定的指標(biāo)性成分，在優(yōu)化色譜條件過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)其它成分對(duì)人參皂苷Rg1干擾較大，無(wú)法獲得好的分離效果。人參皂苷Re、人參皂苷Rb1作為西洋參主要的指標(biāo)性成分，在方法學(xué)考察中均符合要求，故重新選取人參皂苷Re、人參皂苷Rb1作為參麥袋泡茶的含量測(cè)定指標(biāo)性成分。