王 卉，王文豪，郝 敏

宮頸癌是女性子宮頸的原發(fā)性腫瘤，有著高發(fā)病率和高死亡率。雖在擁有宮頸癌先進(jìn)篩查系統(tǒng)的國(guó)家，宮頸癌的發(fā)生率與死亡率正在下降，但宮頸癌作為全球第四常見的女性惡性腫瘤，近90%發(fā)生在缺乏有組織的篩查和人乳頭瘤病毒（HPV）疫苗接種計(jì)劃的中低收入國(guó)家，且呈年輕化趨勢(shì)，對(duì)很多國(guó)家而言仍然是有較大負(fù)擔(dān)的疾病[1]。隨著婦女勞動(dòng)參與率提高和預(yù)期壽命延長(zhǎng)，提升廣大女性的健康水平和生活質(zhì)量對(duì)于個(gè)人、家庭和整個(gè)社會(huì)而言都至關(guān)重要。因此，宮頸癌的早預(yù)防、早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療非常重要。

宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)極其復(fù)雜的多節(jié)段、多基因調(diào)控異常的過程。約80%的原發(fā)性宮頸癌源于先前存在的鱗狀細(xì)胞發(fā)育不良，發(fā)病機(jī)制中最重要的是HPV感染[2]。然而，并非所有感染高危型HPV（HR-HPV）的女性都會(huì)發(fā)展成宮頸癌，在腫瘤發(fā)生過程中還發(fā)生了許多遺傳和表觀遺傳的變化[3]。在惡性腫瘤研究領(lǐng)域，越來越多的證據(jù)表明，微小RNA（microRNA，miRNA）在許多人類惡性腫瘤中都異常表達(dá)，其在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起著重要作用。一些高表達(dá)的miRNA可以通過抑制腫瘤抑制因子發(fā)揮致癌基因作用，而低表達(dá)的miRNA可以通過負(fù)向調(diào)節(jié)癌基因而發(fā)揮抑癌基因的功能[4]。miRNA在人類癌細(xì)胞中的異常表達(dá)導(dǎo)致其調(diào)控的信使RNA（mRNA）網(wǎng)絡(luò)被破壞。因此，miRNA調(diào)控通路的識(shí)別對(duì)人類惡性腫瘤研究具有重要意義。許多基因的篩查研究發(fā)現(xiàn)，宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）及宮頸癌患者血清miR-375水平顯著低于健康人群。miR-375的異常表達(dá)已被證實(shí)與宮頸癌發(fā)生有關(guān)，miR-375甲基化改變可能是其異常表達(dá)的表觀遺傳機(jī)制[5]。然而，miR-375在宮頸細(xì)胞癌變中的作用機(jī)制仍未完全闡明。目前，相關(guān)研究表明miR-375可通過調(diào)控靶基因參與的信號(hào)通路來影響宮頸癌細(xì)胞的侵襲和擴(kuò)散?，F(xiàn)對(duì)miR-375在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展中的調(diào)控機(jī)制以及在臨床應(yīng)用中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 miR-375的生物學(xué)功能

RNA可分為兩類——蛋白編碼RNA和非編碼RNA。miRNA是由19～23個(gè)核苷酸組成的保守的單鏈非編碼小分子RNA[6]。通過與mRNA的30個(gè)未翻譯區(qū)（untranslated region，UTR）的互補(bǔ)序列結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后通過使mRNA裂解或抑制翻譯來調(diào)控基因表達(dá)[7]。miRNA不僅可以抑制基因表達(dá)，也可以誘導(dǎo)基因表達(dá)[6]。

miR-375基因作為一種高度保守的miRNA，存在于人類的2號(hào)染色體，位于cryba2（b-A2晶體蛋白）和Ccdc108（包含螺旋結(jié)構(gòu)域的蛋白108）基因之間的基因間區(qū)。miR-375序列首次是從小鼠胰島素瘤胰腺B細(xì)胞（MIN6細(xì)胞）中克隆，并被鑒定為最豐富、進(jìn)化保守、具有胰島特異性的miRNA[4]。根據(jù)在許多不同腫瘤實(shí)體中進(jìn)行的miRNA表達(dá)譜分析實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-375有著致癌基因和抑癌基因的雙重功能[8]。He等[9]發(fā)現(xiàn)miR-375過表達(dá)在肝癌細(xì)胞中抑制細(xì)胞增殖、遷移、侵襲。Ding等[10]研究證實(shí)miR-375過表達(dá)在體外對(duì)胃癌細(xì)胞增殖有顯著抑制作用。而Costa-Pinheiro等[11]研究發(fā)現(xiàn)在前列腺癌細(xì)胞系中，miR-375低表達(dá)抑制細(xì)胞侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。這些結(jié)果證實(shí)，miR-375發(fā)揮致癌或抑癌作用，這取決于不同腫瘤的細(xì)胞環(huán)境。

近年研究發(fā)現(xiàn)miR-375不僅在宮頸癌、肝細(xì)胞癌組織和細(xì)胞系中顯著下調(diào)，而且在前列腺癌[12]、上頜竇、下咽和食管鱗狀細(xì)胞癌中經(jīng)常下調(diào)，并作為一種腫瘤抑制因子作用于癌細(xì)胞中的幾個(gè)致癌基因[4]。因此，研究miR-375在惡性腫瘤中的異常表達(dá)及致癌機(jī)制，對(duì)于惡性腫瘤的診斷和治療非常重要。

2 miR-375在宮頸癌發(fā)生中參與機(jī)制的研究

miR-375在宮頸癌中表達(dá)下調(diào)，其作為抑癌基因，通過影響細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期進(jìn)展、衰老、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移發(fā)揮腫瘤抑制作用。Bierkens等[13]通過分析高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變（HSIL）的局灶性畸變，證實(shí)了hsa-miR-375在宮頸病變組織中表達(dá)下調(diào)，并確定hsa-miR-375是宮頸癌發(fā)生中的抑癌基因。Jung等[14]的研究證實(shí)miR-375作為抑癌miRNA在HPV陽性相關(guān)腫瘤中的作用。miR-375在SiHa和HeLa細(xì)胞中，通過拯救關(guān)鍵的腫瘤抑制因子，抑制致癌成分，降低端粒酶活性，導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞增殖抑制。Wu等[15]的研究觀察到，與陰性組相比，miR-375過表達(dá)抑制HPV18陽性宮頸癌細(xì)胞的增殖并增加血清乳酸脫氫酶活性，顯著增加細(xì)胞凋亡率，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。這些研究證實(shí)了miR-375在宮頸癌中的腫瘤抑制作用，其低表達(dá)促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)腫瘤進(jìn)程，而高表達(dá)可有保護(hù)作用。

為了進(jìn)一步了解miR-375在宮頸癌中是如何發(fā)揮腫瘤抑制作用的，有研究探索了miR-375的下游靶基因。Yu等[16]的研究發(fā)現(xiàn)miR-375在宮頸癌組織中下調(diào)，經(jīng)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-375可以與胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體（IGF-1R）的3個(gè)UTR結(jié)合，IGF-1R是一種跨膜受體，通過磷脂酰肌醇3激醇（PI3K）-蛋白激酶 B（AKT）和 RAS/RAF/MEK/ERK信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，抑制細(xì)胞凋亡。該研究結(jié)果表明miR-375高表達(dá)可以抑制IGF-1R蛋白的表達(dá)，而低表達(dá)miR-375則相反，證實(shí)IGF-1R是miR-375的下游靶點(diǎn)。miR-375可通過靶向IGF-1R影響HPV16陽性宮頸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和凋亡，從而參與惡性腫瘤進(jìn)程。Wang等[17]的研究發(fā)現(xiàn)miR-375在宮頸鱗癌中下調(diào)，miR-375過表達(dá)可以降低SP1轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，而miR-375低表達(dá)可以導(dǎo)致靶基因SP1表達(dá)的升高，從而促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的惡性行為。馬稷紅[18]的研究發(fā)現(xiàn)，miR-375在宮頸癌中表達(dá)下調(diào)，并通過靶向卷曲蛋白 4（FZD4）參與 Wnt/β-連環(huán)蛋白（β-catenin）通路促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移與侵襲，參與癌變的進(jìn)展過程。

在其他腫瘤中的研究發(fā)現(xiàn)，miR-375在人類結(jié)直腸癌組織中顯著下調(diào)，并通過抑制結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）-表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）信號(hào)通路來調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖和遷移[8]。miR-375在食管鱗癌（ESCC）中低表達(dá)，可通過直接靶向SP1促進(jìn)ESCC細(xì)胞增殖和集落形成[19]。miR-375在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織和細(xì)胞系中經(jīng)常下調(diào)，并通過調(diào)控Wnt5a來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲[20]。miR-375在人類非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中低表達(dá)，其可通過靶向人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）誘導(dǎo)增加癌細(xì)胞的凋亡率來抑制癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，從而發(fā)揮腫瘤抑制作用[21]。

綜上，miR-375在腫瘤發(fā)生中主要是通過調(diào)控靶基因的表達(dá)從而影響癌細(xì)胞的存活或凋亡。目前研究表明在宮頸癌發(fā)生過程中，miR-375表達(dá)下調(diào)且可通過靶向調(diào)控下游IGF-1R、SP1、FZD4基因參與惡性腫瘤進(jìn)程，發(fā)揮腫瘤抑制作用。

3 miR-375在宮頸癌診斷方面的研究

99%的宮頸癌病例是由持續(xù)感染HR-HPV所致。然而，從HR-HPV感染發(fā)展為侵襲性宮頸癌需要很長(zhǎng)時(shí)間。目前采用HPV和細(xì)胞學(xué)聯(lián)合檢測(cè)方案進(jìn)行篩查，以早期發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，并聯(lián)合陰道鏡進(jìn)行更詳細(xì)的檢查。而陰道鏡診斷的準(zhǔn)確性主要取決于陰道鏡醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)和行宮頸活檢的次數(shù)，常規(guī)陰道鏡檢測(cè)CIN2+的敏感度較差。近年來，多項(xiàng)研究在血清或血漿、尿液、唾液中檢測(cè)到miRNA，均為無創(chuàng)腫瘤診斷樣本，取得了良好的結(jié)果。宮頸脫落細(xì)胞作為篩查的殘留樣本，也可作為miRNA檢測(cè)的無創(chuàng)樣本用于宮頸病變?cè)\斷。

彭慧等[22]的研究發(fā)現(xiàn)在診斷宮頸癌時(shí)，血清miR-375的敏感度和特異度均優(yōu)于傳統(tǒng)腫瘤標(biāo)志物CA125，該結(jié)果提示血清miR-375有望成為宮頸癌診斷的新的標(biāo)志分子。孫麗妍等[23]的研究結(jié)果表明，宮頸癌患者血清miR-375表達(dá)水平偏低，而血清中的巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）和鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCC-Ag）的表達(dá)水平偏高。對(duì)于宮頸癌的診斷，miR-375、M-CSF、SCC-Ag聯(lián)合檢查效能優(yōu)于單項(xiàng)檢查。鄧岳紅等[24]的研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌組的血清miR-375表達(dá)水平偏低，而血清惡性腫瘤特異性生長(zhǎng)因子（TSGF）、SCC-Ag水平偏高。在宮頸癌診斷中，單獨(dú)檢測(cè)血清miR-375的敏感度、特異度、準(zhǔn)確率均高于單獨(dú)檢測(cè)血清TSGF、SCC-Ag，且三者聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸癌的準(zhǔn)確率高于單項(xiàng)檢測(cè)。上述研究表明，在宮頸癌患者中血清miR-375表達(dá)水平的檢測(cè)具有診斷價(jià)值。

目前宮頸癌中miRNA的診斷方法包括分析血清中特異miRNA水平的變化和檢測(cè)異常高甲基化的miRNA[25]。已經(jīng)有研究證實(shí)，胃癌、食管癌和前列腺癌等患者體內(nèi)血清miR-375的表達(dá)水平明顯低于健康人群[4]。血清中豐富穩(wěn)定的miR-375循環(huán)，為腫瘤的早期無創(chuàng)性診斷開辟了一條新的途徑。血清miR-375可作為宮頸腫瘤無創(chuàng)性診斷的潛在指標(biāo)。

4 miR-375在宮頸癌治療方面的研究

目前早期宮頸癌的臨床常用治療方式主要有手術(shù)治療、放療。對(duì)于中晚期宮頸癌患者而言，放化療是最常用的方式，在長(zhǎng)期的治療過程中，患者除了要忍受放化療帶來的諸多不良反應(yīng)外，還有可能出現(xiàn)一定的耐受性，從而影響治療效果。眾所周知，化療、靶向治療耐藥是腫瘤致死的重要原因之一，嚴(yán)重影響宮頸癌的治療效果。研究表明，miRNA與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性有關(guān)[26]，miRNA可以調(diào)控宮頸癌放化療的敏感性[27]。

沈源明[28]的研究表明，宮頸癌化療藥物泰素可誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT），并上調(diào)miR-375的表達(dá)，而上調(diào)表達(dá)的miR-375可通過直接靶向抑制E-鈣黏蛋白的表達(dá)而促使EMT的發(fā)生，使宮頸癌細(xì)胞對(duì)泰素化療的敏感性下降，繼而引起泰素繼發(fā)耐藥。該研究揭示了宮頸癌化療耐藥的新機(jī)制，并發(fā)現(xiàn)miR-375是潛在的有效藥物靶點(diǎn)，為應(yīng)用于宮頸癌化療的進(jìn)一步研究提供了科學(xué)證據(jù)。蔣莉莎等[29]的研究表明miR-375通過靶向PAX6參與宮頸癌細(xì)胞的順鉑耐藥，miR-375有望成為逆轉(zhuǎn)宮頸癌順鉑耐藥的靶點(diǎn)。

5 miR-375在宮頸癌預(yù)后方面的研究

宮頸癌患者即使在治療后，其臨床結(jié)局仍然存在著難以預(yù)測(cè)的顯著差異。尋找與宮頸癌預(yù)后相關(guān)的標(biāo)志物非常重要。目前有研究認(rèn)為miRNA的表達(dá)水平可以預(yù)測(cè)各種人類惡性腫瘤的生存狀態(tài)[30]。

孫麗妍等[23]的研究結(jié)果提示，宮頸癌患者經(jīng)過治療后預(yù)后情況較差，miR-375在經(jīng)過治療的宮頸癌患者中的表達(dá)水平，對(duì)其1年生存預(yù)后有指導(dǎo)意義，其表達(dá)水平越低，1年生存率越好。王芬芬等[31]的研究表明，在宮頸鱗癌中miR-375表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、宮旁浸潤(rùn)、臨床分期及陰道壁受累均顯著相關(guān)，其水平降低促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生，因此miR-375可作為預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后的一個(gè)生物學(xué)標(biāo)志物。彭慧等[22]研究發(fā)現(xiàn)Ⅲ~Ⅳ期宮頸癌患者血清miR-375表達(dá)水平顯著低于Ⅰ~Ⅱ期患者；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的表達(dá)水平明顯低于無轉(zhuǎn)移者；細(xì)胞分化程度越高，惡性程度越高，血清miR-375表達(dá)水平越低。該研究結(jié)果還提示，宮頸癌術(shù)后血清miR-375表達(dá)水平較術(shù)前上升，說明檢測(cè)血清miR-375水平有助于對(duì)宮頸癌的預(yù)后進(jìn)行分析。因此，miR-375可作為診斷宮頸癌預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物。

6 結(jié)語

綜上所述，宮頸癌的高發(fā)病率、高死亡率一直威脅著廣大女性的健康，隨著miRNA在腫瘤中的大量研究，發(fā)現(xiàn)miR-375與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)。miR-375在宮頸癌中低表達(dá)，檢測(cè)miR-375的表達(dá)水平也能夠?yàn)閷m頸癌的早期診斷提供新的思路。miR-375也可作為治療晚期宮頸癌化療耐藥的潛在靶點(diǎn)，若通過人為方式去調(diào)控miR-375在人體內(nèi)的表達(dá)水平，從而提高宮頸癌細(xì)胞對(duì)放化療的敏感性，這為宮頸癌化療耐藥問題的解決以及晚期宮頸癌的治療提供了一種新的可能。目前雖然沒有準(zhǔn)確的模型來預(yù)測(cè)宮頸癌患者的預(yù)后，很難將個(gè)體化治療應(yīng)用于宮頸癌患者。但是綜合當(dāng)前相關(guān)研究可以發(fā)現(xiàn)，miR-375也可為宮頸癌的預(yù)后評(píng)價(jià)提供參考價(jià)值。希望通過醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的發(fā)展進(jìn)步，能夠早日將miRNA運(yùn)用于腫瘤的臨床治療中。