連結(jié)靜 王昊 程兆俊 梅瑾

[摘要] 目的 評(píng)估杭州地區(qū)新生兒的耳聾基因突變情況，為遺傳咨詢提供參考。 方法 回顧性分析2018年6月～2019年6月在杭州市婦產(chǎn)科醫(yī)院進(jìn)行新生兒十五項(xiàng)耳聾基因篩查的標(biāo)本，共3163例。使用微陣列芯片雜交法對(duì)遺傳性耳聾相關(guān)的15個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，并用Sanger測(cè)序法對(duì)有突變位點(diǎn)的樣本進(jìn)行相應(yīng)確證。 結(jié)果 在3163例新生兒中，檢測(cè)到168例耳聾基因突變攜帶者（檢測(cè)到171個(gè)突變位點(diǎn)），突變基因攜帶率為5.31%（168/3163），其中單雜合突變型158例，235del C/299del AT復(fù)合突變1例，235delC純合突變1例、176del 16/538C>T雙突變1例，1494C>T突變1例，1555A >G突變7例。 結(jié)論 檢測(cè)的4個(gè)基因15個(gè)突變位點(diǎn)中，以GJB2基因235delC位點(diǎn)突變最高。本研究豐富了十五項(xiàng)耳聾基因篩查及突變位點(diǎn)攜帶率流行病學(xué)的資料，為杭州地區(qū)耳聾的遺傳咨詢及預(yù)防提供依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 新生兒;耳聾基因;突變攜帶率;基因篩查;聽(tīng)力篩查

[中圖分類號(hào)] R764.43? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2020）35-0134-03

[Abstract] Objective To evaluate the mutation of deafness genes among newborn babies in Hangzhou area so as to provide reference for genetic counseling. Methods A total of 3163 cases of 15 deafness gene screenings among newborn babies carried out in Hangzhou Women's Hospital from June 2018 to June 2019 were retrospective analyzed. Microarray chip hybridization was used to detect 15 mutation sites related to hereditary deafness， and Sanger sequencing was used to confirm the samples with mutation sites. Results A total of 168 deafness gene mutation carriers（with 171 mutation sites detected） were detected among 3163 newborn babies， with a mutation gene carrying rate of 5.31%（168/3 163）， including 158 cases of single heterozygous mutation， 1 case of 235del C/299del AT compound mutation， 1 case of 235del C homozygous mutation， 1 case of 176del 16/538C>T double mutation， 1 case of 1494 C>T mutation， and 7 cases of 1555A>G mutation. Conclusion Among the 15 mutation sites of the 4 genes detected， the 235del C site of GJB2 gene has the highest mutation. The study has enriched the epidemiological data of 15 deafness gene screenings and mutation site carrying rates， providing basis for counseling on and prevention of inheritance of deafness in Hangzhou area.

[Key words] Newborn babies; Deafness gene; Mutation carrying rate; Gene screening; Hearing screening

耳聾是由聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)發(fā)生病變，從而引起聽(tīng)力功能障礙。耳聾最主要的危害是給患者自身生活及與別人的交往帶來(lái)嚴(yán)重的不便利，嚴(yán)重者可導(dǎo)致抑郁自閉。在我國(guó)耳聾患者已超過(guò)2780萬(wàn)人，每年有6～8萬(wàn)耳聾新生兒出生，占新生兒的（1～3）/1000，其中超過(guò)60%的新生兒耳聾是遺傳因素導(dǎo)致[1]。因此，對(duì)新生兒進(jìn)行遺傳性耳聾基因篩查顯得尤為重要。有研究顯示，不同地區(qū)及不同種族的人群在耳聾基因突變位點(diǎn)的攜帶率上存在著差異[2-3]，本研究回顧性分析了杭州地區(qū)3163例新生兒的4個(gè)耳聾基因15個(gè)變異位點(diǎn)的篩查結(jié)果，豐富了杭州地區(qū)耳聾基因突變位點(diǎn)及攜帶率流行病學(xué)的資料，為該地區(qū)耳聾的遺傳咨詢及預(yù)防提供參考，減低出生缺陷。

1 資料與方法

1.1一般資料

納入2018年6月～2019年6月在杭州市婦產(chǎn)科醫(yī)院進(jìn)行新生兒耳聾基因檢測(cè)標(biāo)本，共3163例，研究對(duì)象監(jiān)護(hù)人簽署《耳聾基因芯片檢測(cè)申請(qǐng)單與知情同意書》。按照《新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范（2010版）》管理規(guī)范和采血常規(guī)的要求，采取新生兒的足跟血進(jìn)行濾紙干血斑的制備。

1.2 方法

1.2.1 試劑? 十五項(xiàng)遺傳性耳聾相關(guān)基因檢測(cè)試劑盒（成都博奧晶芯生物科技有限公司，國(guó)械注準(zhǔn)20173401343）。

1.2.2 檢測(cè)方法? 按照成都博奧晶芯生物科技有限公司的十五項(xiàng)遺傳性耳聾相關(guān)基因檢測(cè)試劑盒說(shuō)明要求，使用核酸提取試劑盒提取新生兒干血斑中的DNA，和質(zhì)控品（空白樣本、陰性對(duì)照品及遺傳陽(yáng)性對(duì)照品）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增完成后，使用微陣列芯片雜交法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行4個(gè)基因15個(gè)位點(diǎn)的檢測(cè)[GJB2（35del G、235delC、176del16、299del AT）、GJB3（538C>T）、SLC26A4（2168A>G、IVS7-2A>G、1174A>T、1226G>A、1229C>T、1975G>C、2027T>A、IVS15+5G>A）和線粒體DNA12 SrRNA （1494C>T、1555A>G）]。對(duì)基因芯片篩查中出現(xiàn)突變位點(diǎn)的樣本使用Sanger測(cè)序法進(jìn)行確證[4]。

2 結(jié)果

在3163例新生兒樣本中，檢出耳聾基因突變位點(diǎn)攜帶者168例（176del 16/538C>T突變1例，按GJB2突變和GJB3突變各計(jì)1次），4個(gè)檢測(cè)的耳聾基因突變攜帶率見(jiàn)表1。

在3163例檢測(cè)樣本中共檢出171個(gè)突變位點(diǎn)，突變型等位基因頻率5.41%（171/3163），其中單雜合突變型158例，235del C/299del AT復(fù)合突變1例，235delC純合突變1例、176del 16/538C>T雙突變1例，1494C>T突變1例，1555A >G突變7例，見(jiàn)表2。

3 討論

聽(tīng)力障礙會(huì)直接影響新生兒的語(yǔ)言發(fā)育，從而導(dǎo)致由聾致啞，給新生兒的生長(zhǎng)發(fā)育及社會(huì)生活帶來(lái)非常嚴(yán)重的影響，而常規(guī)聽(tīng)力學(xué)篩查無(wú)法發(fā)現(xiàn)遲發(fā)型、藥物敏感性和漸進(jìn)性耳聾患者，耳聾基因的篩查在一定程度上彌補(bǔ)了這個(gè)缺陷[4]。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的耳聾基因相關(guān)位點(diǎn)已有300多個(gè)，其突變位點(diǎn)的攜帶在不同的國(guó)家地區(qū)存在差異[5]。在我國(guó)，常見(jiàn)的耳聾相關(guān)基因及突變位點(diǎn)主要有GJB2（235delC、176del16、299del AT）、GJB3（538C>T）、SLC26A4（2168A>G、IVS7-2A>G、1174A>T）和線粒體DNA12SrRNA（1494C>T、1555A>G）?，F(xiàn)階段對(duì)這4個(gè)基因研究較為透徹[6-8]，其相關(guān)的突變位點(diǎn)所引起的臨床診斷已有明確的認(rèn)知[9]。同時(shí)，耳聾基因的診斷技術(shù)也在不斷的發(fā)展[10]，如PCR擴(kuò)增片段的Sanger測(cè)序、靶向捕獲結(jié)合高通量測(cè)序以及基于熱點(diǎn)突變檢測(cè)的診斷技術(shù)，如寡聚核糖核酸芯片雜交檢測(cè)法、飛行時(shí)間質(zhì)譜法、Taqman探針?lè)ǖ燃夹g(shù)的發(fā)展及應(yīng)用，縮短檢測(cè)時(shí)間，提高結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)降低檢測(cè)費(fèi)用，進(jìn)一步加快耳聾基因篩查的推廣[11-12]。

隨著優(yōu)生優(yōu)育理念的不斷深入，耳聾基因篩查已經(jīng)成為新生兒常規(guī)的篩查項(xiàng)目，而新生兒的基因篩查可在一定程度上體現(xiàn)該地區(qū)的耳聾基因突變攜帶率情況[13]，但在杭州地區(qū)尚缺乏大樣本的耳聾基因篩查的流行病學(xué)數(shù)據(jù)。在本研究中，共對(duì)3163例新生兒進(jìn)行4個(gè)耳聾基因15個(gè)位點(diǎn)的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)所測(cè)出的基因位點(diǎn)的突變攜帶率為5.41%（171/3163），其中以GJB2基因突變攜帶率最高，SLC26A4次之，兩者分別占基因突變位點(diǎn)總數(shù)的57.89%（99/171）和30.41%（52/171）。同時(shí)，本研究中的3163例新生兒中，男1643例，突變基因攜帶率5.48%（90/1643），女1520例，突變基因攜帶率為5.33%（81/1520），男女在攜帶率上沒(méi)有差異。本研究中杭州地區(qū)的耳聾基因突變位點(diǎn)的攜帶率與北京、湖南地區(qū)接近[7，14]，與貴州、新疆等少數(shù)民族較多的地區(qū)存在較大的差異[13，15]。研究中3163例新生兒的聽(tīng)力篩查結(jié)果未通過(guò)的有165例，未通過(guò)聽(tīng)力初篩率為5.22%[16]，后期隨訪確診3例為先天性耳聾新生兒（1例基因篩查結(jié)果為235delC純合突變;1例235delC/299del AT復(fù)合雜合突變;1例耳聾基因篩查正常，原因不明），即本研究中先天性耳聾發(fā)病率為0.95‰（3/3163），略低于指南中（1～3）‰的發(fā)生率。

綜上所述，本研究分析杭州地區(qū)的3163例新生兒的4個(gè)耳聾基因的15個(gè)位點(diǎn)的篩查結(jié)果，在一定程度上填補(bǔ)了杭州地區(qū)耳聾基因突變位點(diǎn)的分子流行病學(xué)資料的空缺，對(duì)孕期夫婦的孕前檢查有一定的指導(dǎo)意義。用耳聾基因的十五項(xiàng)篩查進(jìn)行遺傳學(xué)檢測(cè)可以明確耳聾人群中40%的遺傳學(xué)病因，再結(jié)合家系分析和查體可以診斷95%以上的遺傳性耳聾[17]，故建議備孕夫婦將耳聾基因篩查列入孕前檢查的常規(guī)檢查項(xiàng)目，通過(guò)遺傳咨詢減少耳聾新生兒的出生率。有研究顯示，在雙方均攜帶突變耳聾基因的情況下，通過(guò)對(duì)其生育進(jìn)行全程的指導(dǎo)和干預(yù)，可以預(yù)防性的減少近1/3～2/5的先天性耳聾患者出生[13，18]。耳聾基因篩查對(duì)降低遺傳性耳聾新生兒的出生率具有重要的意義，對(duì)耳聾基因突變位點(diǎn)的攜帶者可進(jìn)行孕前遺傳指導(dǎo)和孕期所需進(jìn)行的耳聾相關(guān)的篩查而獲得優(yōu)生兒。對(duì)于攜帶耳聾突變基因的新生兒，可根據(jù)不同的位點(diǎn)突變類型，進(jìn)行相應(yīng)的處理及預(yù)防，避免聽(tīng)力的減退和聾啞殘疾的發(fā)生，還可以指導(dǎo)部分耳聾患者進(jìn)行針對(duì)性的治療。如頭胎新生兒為遺傳性耳聾或耳聾突變基因的攜帶者時(shí)，二胎孕婦可采用羊水穿刺測(cè)序進(jìn)行耳聾基因的篩查[19];如備孕夫婦為相同突變耳聾基因的攜帶者或一方為攜帶者另一方為純合子時(shí)，可采用人工干預(yù)，如輔助生殖中的PGD技術(shù)，獲得生育聽(tīng)力正常的子代[20-23]?？傊瑢?duì)于耳聾重點(diǎn)在于預(yù)防和早期發(fā)現(xiàn)和治療，新生兒及備孕夫婦的耳聾基因篩查可有效地減低先天性耳聾殘疾兒的出生，以達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的。

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（收稿日期：2019-11-26）