蒙 洋 蔣紅云

(國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利局專利審查協(xié)作天津中心 醫(yī)藥化學(xué)發(fā)明審查部，天津 300304)

1.1 甲肝流行病學(xué)

甲型肝炎(甲肝)是由甲肝病毒(hepatitis A virus，HAV)引起的一種以肝臟損害為主的腸道傳染病，主要發(fā)生在亞洲、非洲等發(fā)展中國(guó)家，我國(guó)是甲肝的高發(fā)流行區(qū)[1-2]。甲肝流行情況與當(dāng)?shù)氐男l(wèi)生狀況密切相關(guān)，有明顯的季節(jié)性，常呈周期性爆發(fā)流行，傳染源是急性期病人和亞臨床感染者[3]。大量實(shí)踐證明，接種甲肝疫苗扔是控制HAV感染的最有效的途徑。截止至2007年，包括中國(guó)和美國(guó)在內(nèi)的27個(gè)國(guó)家已將甲肝疫苗納入國(guó)家免疫規(guī)劃，隨著甲肝防御性疫苗的應(yīng)用，我國(guó)甲肝的感染率和發(fā)病率呈現(xiàn)逐年下降的良好趨勢(shì)[2，4]。

甲肝病毒是1973年由Feinstone等應(yīng)用免疫電鏡在急性肝炎患者糞便中發(fā)現(xiàn)的，1992年，美國(guó)Robertson等提出了HAV基因分型的概念，將HAV病毒分為7個(gè)基因型，人類HAV各基因型之間核苷酸異源性為15-25%[5]。盡管各型HAV之間存在不同的基因變異，但是，大量實(shí)驗(yàn)證明，來(lái)源不同的HAV具有一定的抗原穩(wěn)定性和保守性，且只有一個(gè)血清型，因此，不同毒株制備的甲肝疫苗可以在全世界范圍內(nèi)通用，這為發(fā)展疫苗預(yù)防甲肝提供了理論依據(jù)[1、5]。

1.2 甲肝疫苗使用現(xiàn)狀

甲肝疫苗主要分為甲肝減毒活疫苗和甲肝滅活疫苗。其中，減毒活疫苗主要在中國(guó)和印度等國(guó)家使用，滅活疫苗則在全球范圍內(nèi)廣泛使用。

1.2.1 減毒活疫苗

甲肝減毒活疫苗是用遺傳穩(wěn)定且對(duì)人安全的疫苗株接種于人二倍體細(xì)胞后，經(jīng)培養(yǎng)收獲病毒液并加適宜的保護(hù)劑制成。甲肝減毒活疫苗主要在中國(guó)研制和使用。目前，我國(guó)使用的甲肝減毒活疫苗的減毒株有L-A-1株和H2株[1，2，5]。HAV L-A-1株由上海市衛(wèi)生防疫站于1980年分離獲得，隨后由上海市衛(wèi)生防疫站與長(zhǎng)春生物制品研究所合作，經(jīng)傳代獲得HAV L-A-1減毒株[1]。HAV H2株由毛江森等于1982年分離獲得，經(jīng)傳代減毒制成，現(xiàn)該毒株的擁有者為浙江普康生物技術(shù)股份有限公司[1]。L-A-1和H2減毒株活疫苗的平均保護(hù)率均高于97%，具有良好的免疫效果。目前，HAV H2株甲肝減毒活疫苗除了在中國(guó)銷售外，還出口印度、泰國(guó)、菲律賓、危地馬拉和孟加拉共和國(guó)等國(guó)家[6]。

甲肝減毒活疫苗主要有兩種劑型：液體型和凍干型。液體疫苗以<-20℃冷鏈運(yùn)輸，且有效期僅為5個(gè)月，不利于大規(guī)模應(yīng)用；而凍干劑型通過(guò)使用疫苗穩(wěn)定劑可將疫苗置于2-8℃保藏18個(gè)月或者-20℃保藏28個(gè)月[1]。目前，長(zhǎng)春生物制品研究所研制的凍干劑型減毒活疫苗已經(jīng)上市17年，已經(jīng)有大于4千萬(wàn)人接種，安全性和有效性均良好[1]。

1.2.2 滅活疫苗

目前，廣泛使用的甲肝滅活疫苗包括默沙東(Merk Sharp & Dohme，MSD)公司的Vaqta、史克必成(SmithKline Beecham，SKB)，已經(jīng)被葛蘭素史克(GSK)公司收購(gòu)的賀福立適(Havrix)和賽諾菲巴斯德有限公司(Sanofi Pasteour)生產(chǎn)的巴維信(AVAMIX)[1、2]。史克必成公司的Havrix于1991年研制成功，并在歐洲上市，并于1995年進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)[1]，其是以美國(guó)衛(wèi)生和人類服務(wù)部分離得到的HM-175強(qiáng)毒株為抗原制備獲取的，且以福爾馬林滅活，以氫氧化鋁作為佐劑。由于氫氧化鋁佐劑容易引起疲勞、疼痛和注射部位腫塊等不良反應(yīng)，瑞士博爾納生物技術(shù)有限公司(Berna Biotech AG)采用先進(jìn)的類病毒IRIVs專利技術(shù)制備產(chǎn)生了新一代甲肝滅活疫苗。它以RG-SB甲肝病毒株經(jīng)甲醛滅活后，結(jié)合到IRIVs上，可增強(qiáng)甲肝病毒抗原免疫應(yīng)答反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)還降低了鋁佐劑疫苗的局部不良反應(yīng)。且其不含防腐劑和抗生素，可完全生物降解[7]。

國(guó)內(nèi)使用較廣泛的國(guó)產(chǎn)甲肝滅活疫苗主要為北京科興生物制品有限公司以TZ84制備獲得的擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的孩爾來(lái)福和中國(guó)醫(yī)學(xué)科院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所(昆明所)以鋁8株制備獲得的維塞瑞安。

1.2.3 減毒活疫苗與滅活疫苗的對(duì)比

大量研究證明，甲肝減毒活疫苗和甲肝滅活疫苗在接種后都能取得較好的免疫保護(hù)效果。減毒活疫苗可在宿主體內(nèi)短時(shí)間復(fù)制，因此，具有較長(zhǎng)的免疫時(shí)間；滅活疫苗一般由強(qiáng)毒株制備獲得，可較好的引起免疫反應(yīng)，且由于病毒被滅活，也有著較好的安全性。目前，減毒活疫苗和滅活疫苗一般都為兩次接種，部分減毒活疫苗則可以只進(jìn)行一次接種就能取得較好的免疫效果[8]。

1.3 新型甲肝疫苗的研究

隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，科研人員又開(kāi)始了新型甲肝疫苗的研制，如聯(lián)合疫苗和基因工程疫苗等。

1.3.1 聯(lián)合疫苗

聯(lián)合疫苗是指含有兩個(gè)或者多個(gè)活的或者滅活的生物體或者提純的抗原，由生產(chǎn)者聯(lián)合配制而成，用于預(yù)防多種疾病的疫苗。聯(lián)合疫苗能簡(jiǎn)化免疫接種程序，減少接種次數(shù)，降低接種費(fèi)用。目前甲、乙型肝炎聯(lián)合疫苗已成功上市，使用較多的甲、乙型肝炎聯(lián)合疫苗為葛蘭素史克公司的Twinrix、Twinrix Pediatric和Ambirix，聯(lián)合疫苗誘生的抗體持久性長(zhǎng)于單一疫苗[1，8，9]。正在研發(fā)可與甲肝疫苗聯(lián)合的疫苗有甲肝-腮腺炎聯(lián)合疫苗、甲肝-水痘聯(lián)合疫苗及甲肝-麻疹-水痘聯(lián)合疫苗等。

1.3.2 基因工程疫苗

基因工程疫苗是使用DNA重組生物技術(shù)，把天然或人工合成的遺傳物質(zhì)定向插入宿主中，使之充分表達(dá)，經(jīng)純化后而制得的疫苗。其中基于病毒樣顆粒的基因工程疫苗是最理想的制備疫苗的方式。因?yàn)椴《緲宇w粒的結(jié)構(gòu)與野生型病毒相同或相似，含有與野生型病毒相同或相似的抗原決定簇。但由于HAV抗原高度依賴空間結(jié)構(gòu)，合成的病毒樣顆?？乖嬖诹Ⅲw構(gòu)象的依賴性，限定其抗原性弱于傳統(tǒng)疫苗。所以傳統(tǒng)甲肝減毒活疫苗和甲肝滅活疫苗仍是目前預(yù)防甲肝的首選疫苗。