鐘璧璟，雷芹

安康市中醫(yī)醫(yī)院病理科，陜西 安康 725000

結(jié)直腸癌是一種常見的惡性腫瘤，近年來的發(fā)病率一直呈上升的趨勢(shì)[1]。在我國(guó)，結(jié)直腸癌發(fā)病率顯著上升，死亡率也很高，其中城市發(fā)病率高于農(nóng)村，導(dǎo)致該病的因素很多，如有家族史、患有腸炎或者腸道腺瘤等[2]。MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物是該病相關(guān)的錯(cuò)配修復(fù)蛋白，其如果發(fā)生突變會(huì)使得發(fā)生結(jié)直腸癌的概率大大增加[3]。如果結(jié)直腸癌篩查中及早發(fā)現(xiàn)，可以起到預(yù)防作用，有報(bào)道稱，檢測(cè)以上四項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物能夠?yàn)橹委熀皖A(yù)后提供指導(dǎo)[4]。淋巴轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌主要的轉(zhuǎn)移方式，是否轉(zhuǎn)移決定手術(shù)操作和術(shù)后生存情況[5]。本文旨在研究結(jié)直腸癌患者M(jìn)LH1、MSH2、MSH6、PMS2四項(xiàng)錯(cuò)配修復(fù)蛋白表達(dá)水平、病理特點(diǎn)及其與淋巴轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年1月至2019年3月在安康市中醫(yī)醫(yī)院接受治療的結(jié)直腸癌患者105例作為研究對(duì)象。其中男性65例，女性40例；年齡30~85歲，平均(62.35±6.54)歲；病變位于左半結(jié)腸35例，有半結(jié)腸30例，直腸40例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及其家屬均簽署知情同意書。

1.2 觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法 所有患者均通經(jīng)過兩名病理醫(yī)師診斷，收集所有患者的病理標(biāo)本，采用4%福爾馬林固定，之后進(jìn)行石蠟包埋和HE染色。石蠟切片為3~4μm，烤切片后脫蠟、水化后用PBS進(jìn)行沖洗，利用過氧化物酶阻斷劑封閉內(nèi)源性過氧化酶的活性，加入一抗。在室溫孵育后加生物素標(biāo)記的二抗，再加鏈霉素抗生物素的過氧化酶溶液，進(jìn)行孵育后向其中滴加DAB顯色，采用蘇木素再?gòu)?fù)染，最后常規(guī)脫水，透明和封片。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2抗體均購(gòu)自于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的陽(yáng)性染色均定位于細(xì)胞核中，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。采用免疫組化法檢測(cè)MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料兩兩比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表達(dá)和缺失情況 105例結(jié)直腸癌患者中四項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物表達(dá)缺失者21例，總?cè)笔蕿?0.00%，其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表達(dá)缺失者分別為5例(4.76%)、3例(2.86%)、3例(2.86%)和10例(9.52%)，見圖1。

2.2 結(jié)直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白表達(dá)與病理的關(guān)系 結(jié)直腸癌患者中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的表達(dá)缺失與年齡、性別和腫瘤大小無關(guān)(P>0.05)；與腫瘤部位相關(guān)，右半結(jié)腸蛋白表達(dá)缺失明顯高于左半結(jié)腸和直腸，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。MSH2的表達(dá)缺失與發(fā)病位置和侵襲程度無關(guān)(P>0.05)；MSH6的表達(dá)缺失與侵襲程度和淋巴轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)；PMS2的表達(dá)缺失與侵襲程度無關(guān)(P>0.05)，見表1。

圖1 結(jié)直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物表達(dá)情況(×10)

表2 結(jié)直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白表達(dá)與病理特點(diǎn)的關(guān)系

3 討論

結(jié)直腸癌由多種生活因素、遺傳和疾病共同所致[6]。生活因素主要包括肥胖、高脂肪、高蛋白和低纖維的飲食習(xí)慣等，肉類食物的增加與結(jié)直腸癌的發(fā)生有明顯相關(guān)性[7]。臨床研究顯示，基因突變會(huì)導(dǎo)致家族性腺瘤性息肉病和遺傳性非息肉性結(jié)腸癌，其中遺傳性非息肉性結(jié)腸癌是由錯(cuò)配修復(fù)蛋白(MLH1、MSH2、MSH6、PMS2)突變?cè)斐桑倭鲈酱?，癌變的可能性也越大[8-9]。多位學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，通過早期篩查錯(cuò)配修復(fù)蛋白，評(píng)估患者的病情狀況，能降低癌變的發(fā)生[10]。結(jié)直腸癌的主要治療方式是放化療和手術(shù)治療，而淋巴轉(zhuǎn)移影響治療的效果，也影響患者的恢復(fù)[11]。因此，探討影響淋巴轉(zhuǎn)移的因素可以用來指導(dǎo)臨床治療，從而提高生存率。

本研究中，105例結(jié)直腸癌患者中四項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物表達(dá)缺失者21例，總?cè)笔蕿?0.00%，其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表達(dá)缺失者分別為5例(4.76%)、3例(2.86%)、3例(2.86%)和10例(9.52%)，這些與彭芳等[12]研究結(jié)果一致。錯(cuò)配修復(fù)蛋白是機(jī)體內(nèi)的安全保證，其能夠維持遺傳物質(zhì)的完整性和穩(wěn)定性，在DNA修復(fù)過程中會(huì)涉及很多分子和酶[13]。MLH1與MSH2是其中最主要的參與者，這兩種蛋白一般會(huì)與其同源性的錯(cuò)配修復(fù)蛋白組成二聚體來發(fā)揮作用，MLH1和PMS2，MSH2和MSH6分別形成兩種功能性的二聚體復(fù)合物[14-15]。MLH1和MSH2兩種蛋白是二聚體中的主導(dǎo)蛋白，而PMS2和MSH6是兩種配對(duì)蛋白，MLH1和MSH2發(fā)生突變會(huì)降解二聚體蛋白，導(dǎo)致主導(dǎo)蛋白和配對(duì)蛋白的表達(dá)缺失[16]。如果MLH1蛋白表達(dá)缺失，PMS2蛋白就會(huì)發(fā)生表達(dá)缺失，如果MSH2蛋白表達(dá)缺失，MSH6就會(huì)同時(shí)發(fā)生表達(dá)缺失[17]。采用免疫組化的法檢測(cè)以上四種蛋白，能夠?yàn)闄z測(cè)基因和診斷疾病提供指導(dǎo)[18]。

本研究結(jié)果顯示，MLH1表達(dá)缺失與發(fā)病位置、侵襲程度和淋巴轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，左右半結(jié)腸明顯高于直腸，侵襲漿膜外的明顯高于黏膜和肌層，MSH2表達(dá)缺失與淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，MSH6的表達(dá)缺失與發(fā)病位置相關(guān)，左右半結(jié)腸明顯高于直腸，PMS2表達(dá)缺失與與發(fā)病位置和淋巴轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，左右半結(jié)腸明顯高于直腸，表明蛋白表達(dá)缺失在左右半結(jié)腸和直腸處的發(fā)生存在差異，其與侵襲程度和淋巴轉(zhuǎn)移有一定關(guān)系。蛋白表達(dá)缺失者淋巴轉(zhuǎn)移少，以上表明蛋白表達(dá)缺失的結(jié)直腸癌手術(shù)后的預(yù)后要優(yōu)于蛋白表達(dá)的結(jié)直腸癌手術(shù)[19]。

綜上所述，檢測(cè)MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四種腫瘤標(biāo)志物蛋白表達(dá)情況能夠判斷缺失類型，蛋白表達(dá)情況和病理特點(diǎn)與淋巴轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，錯(cuò)配修復(fù)蛋白檢測(cè)判斷疾病病情、治療和預(yù)后有很重要的價(jià)值。