樊瓊玲，王家威，俞金秀，馬正文，張石蕾，蔣 紅，由淑萍，

(1．新疆醫(yī)科大學(xué)護(hù)理學(xué)院，新疆 烏魯木齊830011；2．新疆醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，新疆烏魯木齊 830011)

截至2018年，我國(guó)高血壓患病人數(shù)高達(dá)2.45億[1]。左室肥厚作為高血壓靶器官損害之一，使心肌細(xì)胞從成熟的“收縮狀態(tài)”向“胚胎型合成狀態(tài)”轉(zhuǎn)化，是冠心病、心力衰竭、腦卒中等心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[2]。因此，減緩和逆轉(zhuǎn)左室肥厚迫在眉睫。課題組前期對(duì)哈薩克族高血壓患者外周血樣本研究發(fā)現(xiàn)[3]，差異甲基化基因參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控、離子代謝和細(xì)胞分化等多個(gè)生物學(xué)過(guò)程，其中內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶(endothel in converting enzyme，ECE)基因甲基化參與了代謝相關(guān)通路。內(nèi)皮素1(endothelin 1，ET-1)作為最強(qiáng)的活性多肽可直接參與心肌肥厚的形成及病理過(guò)程。ECE-1是ET-1生成的主要限速酶，是調(diào)控ET-1水平的重要因素。研究發(fā)現(xiàn)[4-5]，ECE-1位于染色體1p36.1，在啟動(dòng)子區(qū)域有1個(gè)CpG島，ECE-1c基因甲基化會(huì)降低其轉(zhuǎn)錄活性，而導(dǎo)致ET-1生成減少；同樣，ECE-1基因去甲基化會(huì)增加其轉(zhuǎn)錄活性，使體內(nèi)ET-1生成增多，血壓升高而促進(jìn)心肌肥厚。因此，ECE-1基因去甲基化可能是高血壓心肌肥厚的一個(gè)新靶點(diǎn)，磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B，PI3K/PKB)信號(hào)通路是重要的生存信號(hào)通路。研究表明[6]，PI3K/PKB信號(hào)通路及通路中的眾多受體和激酶與心血管疾病有著密切的聯(lián)系，并在其病理過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)(abdominal aortic constriction，AAC)建立大鼠壓力超負(fù)荷左室肥厚模型，探討ECE-1基因去甲基化在高血壓左室肥厚大鼠中的作用，及對(duì)PI3K/PKB信號(hào)通路的影響，為高血壓左室肥厚尋找新的靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)健康雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量180～220 g，購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SYXK(新)2016-0003，合格證號(hào)SCXK(新)2016-0002。飼養(yǎng)環(huán)境溫度22～24℃，相對(duì)濕度45%～55%，每天按12 h/12 h明/暗交替。本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)由新疆醫(yī)科大學(xué)第一臨床附屬醫(yī)院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(20180223-183)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

ANP、ECE-1引物及探針及ECE-1甲基化引物，由上海生工生物工程公司合成；β-actin引物，購(gòu)于北京博奧森生物科技有限公司；DNA提取試劑盒、DNA重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化試劑盒，購(gòu)于北京天根生化科技有限公司；2×Tap PCR Master Mix，購(gòu)于美國(guó)Biomiga公司。兔抗PI3K、PKB、p-PI3K、p-PKB和β-actin抗體、ET-1 ELISA試劑盒，購(gòu)于北京博奧森生物科技有限公司；SDS-PAGE凝膠制備試劑盒、BCA蛋白定量試劑盒、4×蛋白質(zhì)上樣緩沖液，購(gòu)于北京索萊寶生物有限公司；反轉(zhuǎn)錄試劑盒，購(gòu)于美國(guó)Thermo Scientific公司；熒光定量試劑盒，購(gòu)于大連TaKaRa公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

-80℃醫(yī)用低溫保存箱，產(chǎn)自青島海爾特種電器有限公司；HD11 XE超聲診斷儀，產(chǎn)自德國(guó)飛利浦有限公司；液氮罐，產(chǎn)自四川樂(lè)山市東亞機(jī)電工貿(mào)有限公司；移液器、QuantStudio實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀、全波長(zhǎng)自動(dòng)酶聯(lián)免疫反應(yīng)檢驗(yàn)測(cè)試儀，產(chǎn)自美國(guó)Thermo Scientific公司；Western blot使用的電源、電泳裝置及轉(zhuǎn)膜裝置，產(chǎn)自美國(guó)Bio-Rad公司；FluorChem E化學(xué)發(fā)光高靈敏凝膠成像儀，產(chǎn)自美國(guó)Protein Simple公司；基因擴(kuò)增儀，產(chǎn)自美國(guó)Bio-Rad公司。

1.4 動(dòng)物分組與心肌肥厚模型的制備

大鼠左心室肥厚模型制備參照文獻(xiàn)[7]。健康SPF級(jí)SD大鼠30只，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、模型組、假手術(shù)組，每組10只。大鼠禁食12 h后，按0.002 mL/g給予2.5%戊巴比妥鈉腹腔麻醉，備皮，無(wú)菌環(huán)境下腹正中剖開腹腔2～2.5 cm，將腹內(nèi)臟器推向右側(cè)，于右腎動(dòng)脈上方0.5 cm處剝離并充分暴露腹主動(dòng)脈，將8號(hào)針頭平行腹主動(dòng)脈用2號(hào)線一并結(jié)扎后，抽出針頭，造成腹主動(dòng)脈狹窄，隨后腹腔滴注20萬(wàn)U青霉素預(yù)防感染，關(guān)閉腹腔。假手術(shù)組大鼠剖腹后，分離腹主動(dòng)脈，不予結(jié)扎；對(duì)照組不進(jìn)行手術(shù)。

1.5 指標(biāo)檢測(cè)

1.5.1 大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)測(cè)量大鼠行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)6周后，進(jìn)行超聲心動(dòng)檢查，后經(jīng)腹主動(dòng)脈采血處死。處死后立即打開胸腔，取出心臟，去除主動(dòng)脈和左右心耳，4℃生理鹽水沖洗心腔3次，用干凈濾紙吸干水分后稱取體質(zhì)量(body weight，BW)和心臟質(zhì)量(heart weight，HW)，按下式計(jì)算心臟質(zhì)量指數(shù)(heart weight index，HWI)：

HWI=HW/BW

1.5.2 大鼠超聲心動(dòng)檢查腹腔注射2.5%戊巴比妥鈉麻醉大鼠后，左側(cè)上腹部及胸部備皮后仰臥并固定大鼠四肢。以頻率60 Hz小動(dòng)物超聲探頭于胸骨左側(cè)檢測(cè)，顯示左室短軸切面。選擇清晰的圖像進(jìn)行分析。檢測(cè)指標(biāo)包括左室舒張末內(nèi)徑(left ventricular end-diastolic diameter，LVED)、左室舒張末后壁厚度(left ventricular posterior wall thickness，LVPWT)、射血分?jǐn)?shù)(ejection fractions，EF)、左室短軸收縮率(fractional shortening，F(xiàn)S)。以上指標(biāo)均取3個(gè)測(cè)量值后取平均值。

1.5.3 心肌病理學(xué)檢查剪取心尖部位部分心肌，以4%多聚甲醛固定后石蠟包埋組織，切片厚度4μm，置于60℃烤箱2 h烘干，蘇木精-伊紅染色，中性樹膠封片后光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。用Image J圖像分析軟件測(cè)量單個(gè)細(xì)胞表面積，每組隨機(jī)取4張切片，每張切片隨機(jī)取3個(gè)視野，每個(gè)視野檢測(cè)10～15個(gè)細(xì)胞，取其平均值為單個(gè)細(xì)胞表面積(the area of myocardial cells，AMC)。

1.5.4 甲基化特異性PCR檢測(cè)ECE-1基因的甲基化狀態(tài) 采用DNA提取試劑盒提取大鼠左室心肌組織中全基因組DNA，按說(shuō)明書進(jìn)行。分光光度計(jì)檢測(cè)DNA濃度，要求吸光度值=D(260)/D(280)在1.8～1.9之間，DNA量不少于200 ng，體積不高于20μL，以符合甲基化修飾要求。使用DNA重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化試劑盒對(duì)各樣本基因組DNA進(jìn)行亞硫酸鹽修飾及純化，按說(shuō)明書操作。甲基化特異性PCR(methylation-specific PCR，MSP)反應(yīng)體系為25μL，其中含亞硫酸鹽修飾后DNA模板 3 μL，10×Buffer 2.5 μL，22.5 mmol/L 的dNTPs 2.5μL，10 μmol/L的基因引物各1μL，HotStar Taq DNA聚合酶0.1μL，用雙蒸水調(diào)整體系，使得終體積為25μL。循環(huán)反應(yīng)共45個(gè)循環(huán)；72℃延伸5 min；ECE-1基因甲基化引物經(jīng)Methprimer網(wǎng)站在線設(shè)計(jì)，由上海生工合成，引物序列見表1。反應(yīng)結(jié)束后，取5μL PCR產(chǎn)物經(jīng)2.0%的瓊脂糖凝膠電泳，Bio-Rad凝膠成像系統(tǒng)攝像并分析甲基化條帶及非甲基化條帶的光密度值。以經(jīng)SssI甲基轉(zhuǎn)移酶處理的DNA為甲基化的陽(yáng)性對(duì)照，以正常對(duì)照組DNA為未甲基化的陽(yáng)性對(duì)照。按下式計(jì)算待測(cè)基因的去甲基化率：

去甲基化率=D(302)非甲基化/[D(302)甲基化+D(302)非甲基化]×100%

表1 MSP檢測(cè)引物序列

1.5.5 血漿ET-1水平檢測(cè)抽取大鼠腹主動(dòng)脈血，置于抗凝管內(nèi)，常溫放置2 h后，3 000 r/min離心，用移液器吸取上層清液，-80℃保存待測(cè)。據(jù)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)大鼠血漿ET-1水平。

1.5.6 熒光定量PCR檢測(cè)心肌肥厚因子心房利鈉肽和ECE-1mRNA表達(dá)取50 mg心肌樣品，以Trizol法提取左室心肌組織總RNA，純化后紫外分光光度計(jì)檢測(cè)純度，吸光度值D(260)/D(280)＞1.8。定量后將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，取產(chǎn)物2μL在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。總反應(yīng)體系為20μL，擴(kuò)增條件：95℃、30 s；95℃、3 s，60℃、30 s，40個(gè)循環(huán)；95℃、15 s，60℃、60 s。結(jié)束后設(shè)基線值、閾值，取循環(huán)閾值(CT)，目的基因相對(duì)表達(dá)量以采用法分析。目的基因心房利鈉肽(atrial natriuretic peptide，ANP)、ECE-1和內(nèi)參β-actin引物序列見表2。

表2 熒光定量PCR檢測(cè)引物序列

1.5.7 Westernblot檢測(cè)心肌p-PI3K、PI3K、p-PKB、PKB蛋白表達(dá)在50 mg大鼠左室心肌樣品中加入3次液氮冷凍后，加入RIPA裂解液研磨提取總蛋白，BCA法測(cè)定蛋白濃度，取蛋白樣品40μg，100℃下熱變性5 min，上樣于聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行還原性SDS-PAGE電泳，濕轉(zhuǎn)(PVDF膜)，200 mA恒流電轉(zhuǎn)90 min。封閉液(5%脫脂奶粉)封閉 PVDF膜過(guò)夜，用1×TBST緩沖液充分振蕩清洗3次，每次10 min，TBST稀釋抗體，一抗?jié)舛葹椋簆-PI3K，PI3K，p-PKB，PKB均按1∶1 000稀釋；ECE-1，1∶200稀釋；β-actin，1∶5 000稀釋。ECL顯色，F(xiàn)luorChem E化學(xué)發(fā)光高靈敏凝膠成像儀上檢測(cè)條帶灰度值，按下式計(jì)算蛋白相對(duì)表達(dá)水平：

蛋白相對(duì)表達(dá)水平/%=目的條帶灰度/β-actin條帶灰度×100%

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0版軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，定量資料以xˉ±s表示，多組間均數(shù)比較采用ONE-WAY ANOVA，多組間兩兩比較采用LSD法，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠的HWI的比較

各組大鼠HWI結(jié)果見表3。三組大鼠的BW沒(méi)有明顯差異；與空白組比，假手術(shù)組的HW、HWI沒(méi)有明顯差異。與假手術(shù)組相比，模型組HW、HWI顯著增加，其中HWI增加31.5%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。表明模型組大鼠出現(xiàn)心肌肥厚。

表3 各組大鼠HWI的比較

2.2 各組大鼠超聲心動(dòng)圖檢測(cè)指標(biāo)的變化

各組大鼠超聲心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)果見表4。與對(duì)照組比較，假手術(shù)組大鼠的LVPWT、LVED、EF和FS無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與假手術(shù)組比較，模型組LVPWT明顯上升，LVED、EF和FS明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。提示模型組大鼠壓力負(fù)荷型心肌肥厚模型成功建立，出現(xiàn)心功能下降表現(xiàn)。

表4 各組大鼠超聲心動(dòng)圖檢測(cè)結(jié)果

2.3 各組大鼠心肌組織病理學(xué)的變化

各組大鼠心肌組織病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果見圖1。蘇木素-伊紅染色顯示，對(duì)照組與假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊，單位視野內(nèi)細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞間距正常，未見明顯炎性浸潤(rùn)。與假手術(shù)組比較，模型組的心肌細(xì)胞排列紊亂，組織中可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)間質(zhì)增大，單位視野內(nèi)細(xì)胞核的數(shù)量減少，細(xì)胞間距變小，AMC明顯增大(P＜0.01)。提示腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后6周大鼠心肌肥厚形成。

圖1 各組大鼠心肌組織病理學(xué)變化

2.4 各組大鼠心肌組織中ECE-1基因去甲基化水平的改變

各組大鼠心肌組織ECE-1基因去甲基化水平檢測(cè)結(jié)果見圖2。結(jié)果顯示，與對(duì)照組、假手術(shù)組相比，模型組去甲基化水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示心肌肥厚的發(fā)生與ECE-1基因去甲基化水平升高有關(guān)。

2.5 各組大鼠血漿ET-1水平改變

各組大鼠血漿ET-1水平檢測(cè)結(jié)果見表5。與對(duì)照組比，假手術(shù)組血漿ET-1水平?jīng)]有明顯差異；與假手術(shù)相比，模型組血漿ET-1濃度顯著升高(P＜0.01)。

表5 各組血漿ET-1水平

圖2 各組大鼠心肌組織ECE-1基因甲基化水平

2.6 各組大鼠心肌組織中心肌肥厚因子ANP和ECE-1 mRNA表達(dá)的改變

各組大鼠心肌組織中心肌肥厚因子ANP和ECE-1 mRNA表達(dá)檢測(cè)結(jié)果見圖3。與對(duì)照組比較，假手術(shù)組大鼠心肌組織的ANP和ECE-1 mRNA表達(dá)水平無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與假手術(shù)組比較，模型組大鼠心肌組織的心肌肥厚因子ANP和ECE-1的mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)。

圖3 各組大鼠ANP、ECE-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)水平

2.7 各組大鼠心肌組織中的PI3K/PKB通路相關(guān)基因的蛋白表達(dá)的變化

各組大鼠心肌組織中PI3K/PKB通路相關(guān)蛋白表達(dá)檢測(cè)結(jié)果見圖4。與對(duì)照組比較，假手術(shù)組大鼠心肌組織的PI3K、PKB、p-PI3K、p-PKB蛋白表達(dá)水平無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的心肌組織中PI3K、PKB蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化，磷酸化蛋白p-PI3K、p-PKB表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.01)。

圖4 各組大鼠p-PI3K、p-PKB蛋白表達(dá)水平

3 討論

心肌肥厚的形成與高血壓的關(guān)系密切，是最為常見的高血壓靶器官損害和最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一[8]。近年來(lái)的研究表明，心肌肥厚的逆轉(zhuǎn)可降低心血管疾病發(fā)病率、死亡率及總死亡率，其作用優(yōu)于單純的高血壓患者血壓水平的降低及降壓治療方案的調(diào)整[9-10]。因此，對(duì)高血壓的治療不應(yīng)局限于血壓的控制，更應(yīng)該關(guān)注逆轉(zhuǎn)左室肥厚并防止心肌的纖維化，使心肌恢復(fù)正常結(jié)構(gòu)和功能。

DNA甲基化是指在DNA序列里特定的堿基在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的催化作用下，S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體，通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合獲得一個(gè)甲基的觀遺傳學(xué)DNA甲基化修飾過(guò)程[11]。ET-1是迄今所知最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)，可強(qiáng)烈收縮入球動(dòng)脈和出球動(dòng)脈，導(dǎo)致尿液和排鈉減少，血壓升高。而ECE-1作為內(nèi)皮素生成過(guò)程中最后一步反應(yīng)的關(guān)鍵酶，限制著ET-1的合成。同時(shí)，ET-1和ECE-1在心血管疾病中共存，ECE-1可調(diào)節(jié)ET-1的生成對(duì)疾病發(fā)生發(fā)展十分重要[12]。在體外血管內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中[4-5]，ECE-1c基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化會(huì)降低其轉(zhuǎn)錄活性，導(dǎo)致ECE-1c表達(dá)下降，從而進(jìn)一步導(dǎo)致體內(nèi)ET-1生成減少，血壓降低，提示ECE-1甲基化可能參與了高血壓的病理過(guò)程。在本研究中，我們運(yùn)用MSP法檢測(cè)了ECE-1基因甲基化狀態(tài)在正常大鼠心肌組織和AAC術(shù)后的壓力超負(fù)荷的肥厚心肌組織中的差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組大鼠心肌組織的ECE-1基因去甲基化水平相較于假手術(shù)組和對(duì)照組明顯升高。因此，ECE-1基因去甲基化也可能參與了心肌肥厚的發(fā)生。

研究表明[13]，ET-1可通過(guò)內(nèi)皮素受體B1調(diào)節(jié)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)的活性及一氧化氮(nitric oxide，NO)的釋放。NO作為一種重要的舒張血管物質(zhì)，可以從多個(gè)水平拮抗ET-1的縮血管作用，維持心血管的正常功能[14]。PI3K/PKB是NO的重要的上游信號(hào)通路，直接影響著NO的生成與釋放。PI3K/PKB信號(hào)通路及通路中的眾多受體和激酶與高血壓、心力衰竭等心血管疾病有著密切的聯(lián)系[15-16]。PKB是此通路的信號(hào)核心，其活化可通過(guò)磷酸化激活或抑制下游效應(yīng)分子，從而調(diào)節(jié)分子功能[17]。PKB在早期心衰病人中的短暫活化，對(duì)心肌細(xì)胞是有利的，其可通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)血管生成，促進(jìn)心肌能量代謝和抑制炎癥反應(yīng)等反應(yīng)完成，但是PKB的持續(xù)性激活，將會(huì)導(dǎo)致心臟功能嚴(yán)重下降[18]。在本研究中我們發(fā)現(xiàn)，在腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)后6周的大鼠發(fā)生了壓力超負(fù)荷心肌肥厚，Western blot顯示，相較于假手術(shù)組，模型組大鼠心肌組織中PPI3K、P-PKB蛋白表達(dá)顯著降低。因此，ECE-1基因去甲基化可能與PI3K/PKB信號(hào)通路中PI3K、PKB蛋白磷酸化水平被抑制有關(guān)，從而導(dǎo)致了高血壓心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展。

腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)可通過(guò)增加外周循環(huán)阻力使心臟后負(fù)荷增加，與原發(fā)性高血壓的形成過(guò)程類似，是研究壓力超負(fù)荷心肌肥厚及心衰的病理生理、分子生物學(xué)機(jī)制和心血管系統(tǒng)藥理學(xué)的理想動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)以超聲心動(dòng)檢查、病理組織學(xué)檢測(cè)以及心肌肥厚因子ANP mRNA表達(dá)水平評(píng)價(jià)心肌肥厚模型。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，造模6周后，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的BW和HW顯著下降，HWI顯著上升(P＜0.01)。超聲心動(dòng)圖作為篩查及診斷心肌病的首選影像學(xué)方法，可以為心功能的評(píng)價(jià)提供全面客觀的依據(jù)[19]。實(shí)驗(yàn)顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的LVPWT呈明顯上升，LVED、EF和FS呈明顯下降，心功能明顯變差(P＜0.01)。從心肌病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的心肌細(xì)胞排列紊亂，組織中可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)間質(zhì)增大，單位視野細(xì)胞核的數(shù)量減少，AMC明顯增加(P＜0.01)；以上都明確提示了模型組大鼠發(fā)生了心肌肥厚。此外，ANP是心肌肥厚的標(biāo)志性基因，在實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)模型組組ANP mRNA相對(duì)表達(dá)水平明顯升高(P＜0.01)。以上4個(gè)方面，從超聲、病理到分子水平證實(shí)了AAC后大鼠壓力超負(fù)荷心肌肥厚模型的成功建立，從而進(jìn)一步佐證ECE-1基因在心肌肥厚中的作用。

綜上所述，在本實(shí)驗(yàn)中，我們對(duì)高血壓左室肥厚與ECE-1基因甲基化水平、PI3K/PKB信號(hào)通路的關(guān)系進(jìn)行了初步探討，發(fā)現(xiàn)ECE-1去甲基化參與了壓力超負(fù)荷心肌肥厚的形成過(guò)程，且與心肌肥厚正相關(guān)，該過(guò)程可能與PI3K/PKB信號(hào)通路的抑制有關(guān)。