王 瑩，劉艷俊，劉 瑩，張春暉

(河北北方學院，河北 張家口 075000)

病證結合模型主要以復合因素模擬病因，將現(xiàn)代醫(yī)學的辨病特長與中醫(yī)的辨證特色相結合，在同一動物體上同時復制相互聯(lián)系的現(xiàn)代醫(yī)學疾病及中醫(yī)證候，深刻反映中醫(yī)中藥研究特點，積極推動中醫(yī)證候生物學本質和中藥藥效的研究，關鍵在于將中醫(yī)的病因學說與現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)病機制緊密結合。病證結合動物模型是中醫(yī)實驗動物模型發(fā)展的新方向，這類微觀與宏觀相結合的中醫(yī)動物模型，是闡明證候生物學基礎較為合適的研究模式，具有一定的實用價值。從中醫(yī)辨證論治角度出發(fā)，選擇符合中醫(yī)證型的動物模型，研究藥物的作用機制，方能揭示并闡述中醫(yī)藥對各類疾病的復雜作用機制[1]。

氣虛證病證結合動物模型作為科研工具在近十年的中醫(yī)基礎研究與臨床研究中取得很大進展。但目前從中醫(yī)理論角度出發(fā)，尚未有關于氣虛證病證結合動物模型研究的系統(tǒng)報道。我們將近年來氣虛證病證結合動物模型研究的進展綜述如下。

1 心氣虛證

1.1 心氣虛證動物模型

目前心氣虛證動物模型的造模方法主要有2種，一是根據(jù)中醫(yī)辨證論治結合藏象學說模擬中醫(yī)傳統(tǒng)病因制作模型，一是根據(jù)西醫(yī)病因學模擬西醫(yī)病理通過手術的方法制作模型。《靈樞·本藏》曰：“人之血氣精神者，所以奉生而周于性命者也?！比梭w生命活動中的兩大類基本物質氣與血互根互用、不可分割，氣為血之帥，血為氣之母，氣是血液生成和運行的動力，血是氣的化生基礎和載體，有學者依據(jù)此中醫(yī)理論，在造成動物心血管慢性損傷的基礎上，結合多次少量放血以耗氣，復制心氣虛血瘀證動物模型[2]。姚立等[3]采用強迫跑步、控食等復合因素促使動物在疲勞、饑餓的干預下達到氣虛狀態(tài)，并通過灌服大劑量心得安溶液增強對心功能的抑制作用，將氣虛病位定位于心，成功建立Wistar大鼠的心氣虛證模型，使其在整體上客觀表現(xiàn)出心氣虛的病機變化特點。金戈等[4]采用2次游泳法對38只大鼠進行造模，讓大鼠負重游泳，最大限度地耗竭大鼠體能，并在每日游泳的基礎上，給大鼠灌服大劑量心得安溶液使造模定位于心，誘發(fā)心氣虛證動物實驗模型。諸多研究報告表明心氣虛證與左室收縮和舒張功能異常有同一性，有學者對大鼠、小鼠、犬、兔等動物采用冠狀動脈結扎法、腹主動脈縮窄法、主動脈瓣穿刺法等模擬西醫(yī)病因病理建立心氣虛證動物模型[5]。

1.2 心氣虛證病證結合動物模型

心力衰竭的發(fā)生多由心血管疾病導致，是冠心病、擴張型心肌病、風濕性心瓣膜病及高血壓病等各種心臟病發(fā)展到嚴重階段的一種復雜的臨床癥狀群，發(fā)病率高、死亡率高。制作心梗后心衰動物模型是現(xiàn)代醫(yī)學的熱點之一，近些年來，以氣虛血瘀證結合心衰復制出的病證結合模型頻繁出現(xiàn)在學科基礎研究和臨床應用中。林家茂等[6]采納西醫(yī)病理造模因素與中醫(yī)證候造模因素相疊加的研究方法，遵循“運血者、即是氣”的中醫(yī)理論指導，利用阿霉素與丙基硫氧嘧啶片雙重藥物攻擊的方法，在造成大鼠慢性心力衰竭的同時形成心氣虛兼血瘀水腫證的癥狀表現(xiàn)，應用溫補心脾藥物加以干預，發(fā)現(xiàn)用藥后能明顯改善動物模型的心功能和相關證候學指標，從而反證該動物模型建立的合理性。趙明鏡等[7]發(fā)現(xiàn)采用結扎大鼠冠狀動脈前降支主干致心梗后心衰病證結合動物模型，既有心主血脈功能的失常,又有心主神明功能的失常,較完整、典型地表現(xiàn)了心氣虛證特征，與大鼠水環(huán)境站臺睡眠剝奪法致生理性功能失調(diào)所致的心氣虛證動物模型相比，心梗心衰病證結合模型局部器質性病變導致的心氣虛證候表現(xiàn)更穩(wěn)定、更有規(guī)律性。

2 脾氣虛證

2.1 脾氣虛證動物模型

中醫(yī)學認為脾為后天之本，氣血生化之源，脾虛則氣血乏源，張彩云等[8]采用勞倦傷脾加飲食失節(jié)多因素復合法建立脾氣虛證大鼠模型，造模過程中，模型大鼠出現(xiàn)毛發(fā)直立稀松、無光澤，尾巴細瘦、淡白，體質量持續(xù)減少、體型瘦削，糞便松軟、不成形等體征變化，白細胞數(shù)、淋巴細胞數(shù)可作為判定脾氣虛證動物模型成功建立與否的參考指標。施旭光等[9]分別采用酒醋硝黃飼料法、酒硝黃灌胃法、大黃灌胃法和利血平法復制4種脾氣虛證動物模型，綜合比較各組大鼠生物學體征的變化及體質量、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、血清肌酸激酶水平等指標，認為通過酒醋硝黃飼料法復制出的動物模型最接近中醫(yī)脾氣虛證候特征，是目前最理想、最有效的脾氣虛證動物造模方法之一。

2.2 脾氣虛證病證結合動物模型

馮果等[10]采用飲食失節(jié)、勞倦過度、苦寒瀉下的方法復制脾氣虛證大鼠模型，并在此基礎上給大鼠乙醇、去氧膽酸鈉、吲哚美辛等，并將氨水作為日常飲用水，成功建立大鼠脾氣虛胃炎動物模型。楊宇峰等[11]對大鼠單日喂食甘藍，雙日高糖高脂膳食持續(xù)喂養(yǎng)，游泳至耐力極限。第4周后根據(jù)體質量單劑量腹腔注射鏈脲佐菌素，通過勞倦加飲食不節(jié)(高糖高脂膳食)、復合腹腔注射鏈脲佐菌素造模方法成功復制出脾氣虛證2型糖尿病病證結合動物模型，模型組出現(xiàn)了游泳耐力逐日下降、食少懶動、大便溏薄、精神萎靡不振、體毛光亮度減退等現(xiàn)象。吳擁軍等[12]基于中醫(yī)基礎理論利用大黃瀉下法加卵清蛋白致敏建立脾氣虛變應性鼻炎動物模型，應用溫陽益氣方進行藥物干預，研究發(fā)現(xiàn)益氣溫陽方能有效抑制炎癥細胞在變應性鼻炎大鼠鼻黏膜的匯集，穩(wěn)定細胞膜，減輕組織水腫，從而發(fā)揮治療作用。

3 腎氣虛證

3.1 腎氣虛證動物模型

《素問·逆調(diào)論》曰：“腎者水藏，主津液?！薄端貑枴に疅嵫ㄕ摗吩唬骸澳I者，胃之關也，關門不利，故聚水而從其類也，上下溢于皮膚，故為胕腫?！笨梢娔I主水，腎氣具有主司和調(diào)節(jié)全身水液代謝的功能。相關學者利用卡那霉素藥物注射方法制作腎氣虛證大鼠模型，實驗證明腎氣虛模型大鼠腎臟AQP2 mRNA低表達,或可在分子水平上揭示腎氣虛表現(xiàn)為尿量增多的原因，為中醫(yī)學“腎主水”理論提供實驗依據(jù)[13]?？謧I，勞則氣耗，石幼琪等[14]基于中醫(yī)“恐傷腎”、“房勞傷腎”理論和運動性疲勞的特點，采用遞增負荷游泳加懸吊應激的方案，給予動物較長期強應激，迫使其高強度運動,使其長期處于恐懼、緊張、過勞狀態(tài)，成功建立運動性疲勞腎氣虛動物模型[14]。

3.2 腎氣虛證病證結合動物模型

中醫(yī)理論認為腎為先天之本，五臟陰陽之本，各臟精、氣、陰、陽不足的病變最終都會累及腎之精、氣、陰、陽。目前研究中腎氣虛病證結合動物模型較少。我們參照驚恐應激大鼠模型、應激致“腎虛”動物模型和運動性疲勞低血睪酮模型，采用驚恐應激、懸吊應激和游泳疲勞的方案，結合哮喘造模方法，建立腎氣虛哮喘病證結合模型，通過觀察動物主要的直觀癥狀和特征表現(xiàn)，并以中藥復方干預，檢測相關微觀指標，初步證實構建的腎氣虛證哮喘病證結合動物模型具有可行性及可操作性[15]。宋紅等[16]在前期研究基礎上采用卵蛋白聯(lián)合游泳力竭法、恐傷腎雙因素復合法成功復制支氣管哮喘腎氣虛證模型，運用氫譜核磁共振檢測手段，篩選并鑒定出各組大鼠血清中的差異代謝物，認為補肺腎治本，兼以化痰行氣活血、補瀉兼施、緩調(diào)陰陽的藥物治療支氣管哮喘腎氣虛證的可能機制為促進機體脂類代謝，進而改善機體能量代謝缺乏狀態(tài)，對臨床辨證治療用藥選方具有指導意義。

4 肺氣虛證

4.1 肺氣虛證動物模型

目前制作肺氣虛證動物模型的方法[17-18]主要包括：脂多糖加煙熏法、香煙熏法、鋸末煙熏法、二氧化硫煙熏加木瓜蛋白酶刺激法、博來霉素氣管內(nèi)注入法、呼吸道生物被膜銅綠假單胞菌滴鼻加冷水游泳法、煙熏加冰水法。煙熏材料有香煙、鋸末、刨花、煙葉、硫磺粉、艾條等。

4.2 肺氣虛證病證結合動物模型

王朝蘭等[19]采用煙熏及氣管滴入脂多糖(LPS)雙因素復合制作慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺氣虛證模型大鼠，通過觀察證候表現(xiàn)、檢測支氣管和肺組織形態(tài)病理學變化來判斷模型成功與否，最終發(fā)現(xiàn)該模型從形態(tài)到功能基本符合人類慢性阻塞性肺疾病肺氣虛證特點[19]。通過LPS氣管滴注復制COPD大鼠模型，模擬COPD臨床氣道炎細胞浸潤導致出現(xiàn)的黏液高分泌病理表現(xiàn)，并結合煙熏通過被動吸煙法制備COPD大鼠模型，復制COPD氣道重建、瘢痕形成、肺氣腫等結構改變和中醫(yī)肺氣虛證特征。李振卿等[20]將大鼠置于特制的1 m×1 m×1 m的煙室中，用刨花、鋸末、煙葉各50 g，點燃熏煙，每日2次，每次30 min，持續(xù)30 d，采用改良煙熏法復制慢性支氣管炎肺氣虛證SD大鼠模型，再以益肺方藥加以干預，發(fā)現(xiàn)益肺方藥可通過降低機體TNF-α、IL-1β水平對慢支肺氣虛證產(chǎn)生治療作用。

中醫(yī)病證動物模型的建立是中醫(yī)藥科學實驗研究得以順利開展的前提，病證結合動物模型的成功建立對揭示中醫(yī)“證”的本質、研究中藥復方的治療作用機制有巨大的推動作用，為中醫(yī)基礎理論的深入探索和與醫(yī)學知識的推陳出新提供必要條件。在今后的研究中，應以氣虛病因及中醫(yī)辨證為基礎，以文獻研究為手段,選取既往關于氣虛證動物模型建立的文獻進行分析、歸納、總結,篩選相對完善的造模方式、材料及特異性評價指標；并以藥物干預動物實驗的方法作為驗證方式，對所篩選的造模方法及檢測指標進行對比、分析、驗證，保證實驗的可重復性及可操作性，從而建立或復制出更為標準、完善、可行的氣虛證病證結合動物模型。