文/林少華 羅紅霞

（北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院食品與生物工程系）

乳業(yè)產(chǎn)業(yè)鏈包括上游的奶牛養(yǎng)殖業(yè)和下游的乳制品加工業(yè)。微生物始終影響著乳業(yè)產(chǎn)業(yè)鏈的各個(gè)環(huán)節(jié)，傳統(tǒng)的微生物分離和鑒定更多的依據(jù)可培養(yǎng)和可視化的方式，但隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，下一代測(cè)序技術(shù)，又稱(chēng)為高通量測(cè)序技術(shù)（Next Generation Sequencing，NGS）的出現(xiàn)和成熟，實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品中所有微生物的DNA或RNA直接測(cè)序，進(jìn)而了解微生物群落的組成、分布及動(dòng)態(tài)變化[1]。NGS基于細(xì)菌16S rRNA基因及真菌rRNA基因間隔區(qū)（Internal Transcribed Spacer，ITS）可以快速獲取被檢測(cè)樣本的基因序列或堿基對(duì)信息，不但省去了傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法的繁瑣過(guò)程，且為大量不可培養(yǎng)微生物的研究提供了方法，因其靈敏度高、檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)逐步成為食品微生物研究的常規(guī)途徑之一[2～4]。代表技術(shù)有Illuminag公司的Solexa測(cè)序技術(shù)，Roche公司的454焦磷酸技術(shù)，ABI公司的SOLID技術(shù)和Pacific Bioscience公司的SMRT技術(shù)。隨著NGS在乳業(yè)的廣泛應(yīng)用，大大提高了乳業(yè)行業(yè)對(duì)微生物的研究進(jìn)展，其在奶牛養(yǎng)殖和乳制品加工環(huán)節(jié)微生物的多樣性和群落演替分析方面發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，如青貯飼料的研究、奶牛乳房炎的防治、干酪等乳制品的制作等。因此，本文主要探討了下一代測(cè)序技術(shù)在乳業(yè)的應(yīng)用，以期為乳業(yè)的發(fā)展提供相關(guān)研究線索。

1 在奶牛養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的應(yīng)用

1．1 青貯飼料微生物分析

青貯飼料是奶牛十分重要的口糧，微生物在青貯飼料制作過(guò)程中的組成及變化對(duì)青貯飼料品質(zhì)的高低具有非常重要的影響。然而，采用費(fèi)時(shí)、費(fèi)力且有一定片面性的傳統(tǒng)培養(yǎng)法研究青貯飼料中微生物群落的變化具有局限性，無(wú)法完全了解微生物的組成、豐度及變化[5]。陶蓮等[6]結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)手段和下一代測(cè)序技術(shù)，發(fā)現(xiàn)玉米秸稈經(jīng)過(guò)青貯發(fā)酵后，變形菌門(mén)、γ-變形菌綱、腸桿菌目、腸桿菌科和魏斯氏菌屬菌群數(shù)量顯著降低，青貯發(fā)酵能夠顯著增加厚壁菌門(mén)、芽孢桿菌綱、乳桿菌目、乳桿菌科、片球菌屬和乳桿菌屬菌群數(shù)量。這些結(jié)果對(duì)于分析青貯發(fā)酵前、后玉米秸稈品質(zhì)及菌落構(gòu)成和豐度的變化，進(jìn)而為發(fā)酵過(guò)程的調(diào)控提供了理論依據(jù)。胡宗福等[7]利用宏基因組學(xué)技術(shù)，研究和分析了全株玉米青貯發(fā)酵過(guò)程中和發(fā)酵后暴露空氣后菌群構(gòu)成及其演替規(guī)律，結(jié)果表明，全株玉米經(jīng)過(guò)40 天的青貯發(fā)酵，通過(guò)IlluminaMiseq測(cè)序平臺(tái)共獲得122 371 條高質(zhì)量有效序列，聚類(lèi)為239 個(gè)操作分類(lèi)單元，經(jīng)分類(lèi)學(xué)鑒定分屬16 個(gè)門(mén)，163 個(gè)屬。在門(mén)水平上，厚壁菌門(mén)始終占優(yōu)勢(shì)。發(fā)酵前期、后期和開(kāi)袋期優(yōu)勢(shì)菌屬均為乳桿菌屬，但在開(kāi)袋期芽孢乳桿菌屬的比例上升明顯。因此，全株玉米青貯自然發(fā)酵升高了產(chǎn)乳酸乳桿菌屬的豐度，有利于提高全株玉米青貯的發(fā)酵品質(zhì)，但開(kāi)袋暴露空氣3 天對(duì)全株玉米青貯的微生物多樣性產(chǎn)生了影響。這些結(jié)果為全面了解全株玉米自然青貯發(fā)酵過(guò)程中微生物組成及變化、發(fā)掘全株玉米附生有益微生物種類(lèi)、提高青貯飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和品質(zhì)提供理論基礎(chǔ)和新方法。Li等[8]采用下一代測(cè)序技術(shù)研究了大量添加微藻的銀草青貯品質(zhì)，并分析了青貯期細(xì)菌群落的變化，發(fā)現(xiàn)在青貯發(fā)酵過(guò)程中檢測(cè)到30 多個(gè)菌屬群落結(jié)構(gòu)的變化情況。對(duì)于無(wú)微藻的樣品，1～3 天主要菌屬為腸球菌屬，之后乳酸桿菌屬成為優(yōu)勢(shì)屬；而添加了微藻的樣品中，最常見(jiàn)的是乳酸菌屬。

1．2 奶牛瘤胃微生物分析

反芻動(dòng)物瘤胃中生活著豐富的微生物群體，它們的數(shù)量和組成對(duì)瘤胃的消化吸收、營(yíng)養(yǎng)代謝、生長(zhǎng)性能和免疫功能等方面具有重要影響[9]。因瘤胃處于厭氧狀態(tài)，導(dǎo)致其中的微生物人為培養(yǎng)十分困難，限制了對(duì)瘤胃微生物的探索研究。隨著下一代測(cè)序技術(shù)的出現(xiàn)與發(fā)展，使用該技術(shù)研究反芻動(dòng)物瘤胃微生物的報(bào)道越來(lái)越多。李子健等[10]研究了不同生理階段荷斯坦奶牛瘤胃細(xì)菌的多樣性，發(fā)現(xiàn)奶牛從圍產(chǎn)前期進(jìn)入泌乳期后，瘤胃細(xì)菌多樣性顯著降低；而泌乳期各階段瘤胃細(xì)菌組成差異較小。圍產(chǎn)前期奶牛瘤胃內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)為擬桿菌門(mén)和厚壁菌門(mén)，優(yōu)勢(shì)菌科為普雷沃氏菌科；泌乳期奶牛瘤胃內(nèi)的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)則為擬桿菌門(mén)、變形菌門(mén)和厚壁菌門(mén)，優(yōu)勢(shì)菌科為琥珀酸弧菌科和普雷沃氏菌科。日糧中的改變對(duì)反芻動(dòng)物瘤胃微生物組成具有顯著的影響，Pitta等[11]采用下一代測(cè)序技術(shù)研究日糧蛋白質(zhì)含量的增加對(duì)瘤胃微生物的影響發(fā)現(xiàn)，高日糧蛋白和低日糧蛋白的瘤胃微生物Chao1指數(shù)和Ace指數(shù)差異顯著，并會(huì)促使普雷沃菌屬的豐度升高至最高比例。

1．3 奶牛疾病微生物分析

奶牛很多疾病與病原微生物有關(guān)，如乳房炎，這是影響奶牛健康的主要疾病之一，會(huì)導(dǎo)致患病奶牛產(chǎn)奶量降低、原料奶品質(zhì)下降，影響奶牛場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌、病毒、真菌、支原體等約150 多種病原體可引起奶牛乳房炎[12]，常見(jiàn)的有金黃色葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌等[13]。但仍有25%引起臨床乳房炎的微生物未能通過(guò)可培養(yǎng)的方式檢測(cè)得到[14]，因此，需要使用分子生物學(xué)的方法進(jìn)行微生物群落結(jié)構(gòu)分析。曾學(xué)琴等[15]采用下一代測(cè)序技術(shù)研究了奶牛乳房炎關(guān)聯(lián)微生物群落的結(jié)構(gòu)及多樣性，發(fā)現(xiàn)乳房炎奶牛的乳頭表面微生物組成與乳房炎奶牛產(chǎn)的牛奶中的微生物組成差異顯著，其中乳頭表面豐度最高的是厚壁菌門(mén)，牛奶中則是變形菌門(mén)；乳頭表面含有擬桿菌門(mén)和梭桿菌門(mén)，而牛奶中幾乎沒(méi)有；梭桿菌屬僅在乳頭表面上檢測(cè)到，而牛奶中假單胞菌屬豐度最高。奶?；既榉垦缀笕轭^表面及產(chǎn)的牛奶中的微生物群落與正常奶牛產(chǎn)的牛奶存在差異，在患乳房炎的奶牛乳頭表面能檢測(cè)到梭桿菌門(mén)，而正常奶牛則未檢出；患乳房炎的奶牛乳頭表面金黃色釀膿葡萄球菌屬豐度高于正常奶牛，腸球菌屬僅在患乳房炎的奶牛所產(chǎn)牛奶中檢測(cè)到，正常奶牛卻未檢出。Catozzi等[16]的研究也表明，患乳房炎的奶水牛所產(chǎn)水牛奶樣品中主要有厚壁菌門(mén)、變形菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、梭桿菌門(mén)和放線菌門(mén)。

1．4 牛床墊料微生物分析

隨著公眾環(huán)保意識(shí)的增強(qiáng)，政府執(zhí)法力度的加大，奶牛場(chǎng)的糞污處理越來(lái)越受到重視。除了使用糞污制做沼氣或澆灌之外，制作奶牛臥床墊料也是一種有效的回收利用途徑。墊料制備過(guò)程中的微生物群落組成變化受到環(huán)境條件的影響，反過(guò)來(lái)也會(huì)影響墊料本身的質(zhì)量和奶牛的健康。Sun等[17]采用下一代測(cè)序技術(shù)探索了細(xì)菌和真菌群落在墊料制備不同階段的動(dòng)態(tài)變化，并對(duì)理化參數(shù)、微生物群落組成和豐度之間的關(guān)系進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，墊料中的細(xì)菌主要門(mén)類(lèi)有變形菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、放線菌門(mén)和厚壁菌門(mén)，真菌主要門(mén)類(lèi)為子囊菌門(mén)；線性判別分析表明，包括Scedosporiumprolificans在內(nèi)的多種病原菌在墊料制成后第9天的豐度在不斷增加，基于此，提出建議每7天更換一次墊料。

2 在乳制品加工方面的應(yīng)用

2．1 原料乳微生物分析

原料乳是進(jìn)行乳制品加工的基礎(chǔ)，其質(zhì)量好壞直接影響乳制品的品質(zhì)。因此，對(duì)原料乳進(jìn)行微生物尤其是致病菌的檢測(cè)，保障原料乳質(zhì)量安全，降低奶牛養(yǎng)殖的風(fēng)險(xiǎn)，從源頭上杜絕致病菌的危害非常重要。原料乳的品質(zhì)受儲(chǔ)藏條件、溫度和時(shí)間等因素影響。姚宇秀等[18]利用IlluminaMiSeq下一代測(cè)序技術(shù)測(cè)定原料乳及其環(huán)境中微生物多樣性和致病菌的豐度情況發(fā)現(xiàn)，輸乳管路外側(cè)和盛裝原料乳的空貯罐中均檢測(cè)出金黃色葡萄球菌等致病菌，會(huì)對(duì)原料乳產(chǎn)生污染，因此，要從源頭上健全養(yǎng)殖環(huán)境與管理機(jī)制。張敏等[19]研究表明，原料乳的菌群以變形菌門(mén)為主。在冷藏過(guò)程中，Doyle等[20]研究發(fā)現(xiàn)，2～6 ℃的貯藏溫度下，0～96 h對(duì)原料乳中微生物的變化影響小，而泌乳階段對(duì)原料乳中微生物豐度的變化影響更大。

2．2 巴氏殺菌乳微生物分析

巴氏殺菌乳是一種低溫殺菌產(chǎn)品，因處理方法溫和，不能殺滅原料乳中所有的微生物[21]。其貨架期的判斷若單純依靠可培養(yǎng)技術(shù)來(lái)判斷，會(huì)因技術(shù)問(wèn)題而被忽略，導(dǎo)致巴氏殺菌乳的貯藏條件和貨架期等參數(shù)不準(zhǔn)確，因?yàn)檫@種檢測(cè)技術(shù)僅能獲得實(shí)際檢測(cè)樣本中不到1．00%的微生物[22]。Quigley等[23]通過(guò)使用下一代測(cè)序技術(shù)，首次在巴氏殺菌乳樣本中鑒定出了類(lèi)桿菌、糞便桿菌、普雷沃菌和鏈球菌。該結(jié)果分析表明，巴氏殺菌乳中的細(xì)菌種群比以前所認(rèn)識(shí)的更加多樣，且這些種群中的非熱致病菌很可能以一種受損的、不可培養(yǎng)的形式存在，可能對(duì)巴氏殺菌乳的質(zhì)量和保質(zhì)期均有潛在影響。丁瑞雪等[24]采用下一代測(cè)序技術(shù)分析了巴氏殺菌乳在0 ℃、4℃、10 ℃條件下分別貯藏0 天、3 天、6 天、9 天、12 天和15天內(nèi)微生物的群落組成及動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明，不同貯藏溫度條件下巴氏殺菌乳中微生物的組成及多樣性在門(mén)和屬水平上差異顯著。在0 ℃下貯藏15 天內(nèi)的巴氏殺菌乳微生物多樣性保持最完整，而在4 ℃、10 ℃貯藏期間巴氏殺菌乳的菌群構(gòu)成及優(yōu)勢(shì)菌群都發(fā)生了變化，主要菌群變?yōu)榧賳伟鷮俸蜌鈫捂呔鷮俚?。? ℃下貯藏9 天、10 ℃下貯藏6 天都出現(xiàn)了類(lèi)芽孢菌屬、沙雷氏菌屬，初步推測(cè)這兩種菌屬是導(dǎo)致巴氏殺菌乳品質(zhì)變化的關(guān)鍵因素。

2．3 UHT乳微生物分析

為了延長(zhǎng)牛奶的保質(zhì)期，常采用超高溫瞬時(shí)滅菌（Ultra High Temperature treated，UHT）的熱處理技術(shù)對(duì)牛奶中的微生物和芽孢進(jìn)行完全的破壞，使其無(wú)法在常溫中生長(zhǎng)繁殖。理論上，UHT乳應(yīng)該是處于無(wú)菌狀態(tài)，然而市場(chǎng)上出現(xiàn)的壞包、脹包等現(xiàn)象表明UHT乳也可能存在微生物。因傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)分離方法和早期的分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)UHT乳中微生物的研究不能客觀反映其狀態(tài)，黃衛(wèi)強(qiáng)等[25]以宏基因組DNA 16SrRNA基因V1-V3可變區(qū)的下一代測(cè)序技術(shù)，研究了國(guó)內(nèi)兩個(gè)不同品牌UHT乳樣品中微生物多樣性，結(jié)果表明，兩份UHT乳中的微生物主要有厚壁菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、變形菌門(mén)和放線菌門(mén)四個(gè)菌門(mén)，該研究側(cè)面反映出下一代測(cè)序技術(shù)在UHT乳中微生物多樣性檢測(cè)方面的優(yōu)勢(shì)。

2．4 酸奶微生物分析

“開(kāi)菲爾”酸奶是許多國(guó)家和地區(qū)的傳統(tǒng)發(fā)酵食品，是一種復(fù)合型發(fā)酵酸乳。接種的開(kāi)菲爾粒是一種天然混菌發(fā)酵體系，為乳白色、膠質(zhì)狀顆粒。對(duì)于開(kāi)菲爾菌相的研究可以追溯到19世紀(jì)末，只有了解其菌相組成才能探討其發(fā)酵過(guò)程、代謝機(jī)制等問(wèn)題，從而確保發(fā)酵乳的安全性，實(shí)現(xiàn)商業(yè)化。高潔等[26]采用宏基因組學(xué)技術(shù)提取開(kāi)菲爾粒中的總DNA，通過(guò)下一代測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)分析方法得出，乳酸菌和醋酸菌是開(kāi)菲爾粒中的優(yōu)勢(shì)菌相，占細(xì)菌總數(shù)的90．00%；而其余5 個(gè)菌屬，包括鏈球菌屬、希瓦氏菌屬、明串珠菌屬、假單胞菌屬和不動(dòng)桿菌屬，占細(xì)菌總數(shù)的10．00%左右。Nalbantoglu等[27]采用下一代測(cè)序技術(shù)對(duì)兩種土耳其開(kāi)菲爾粒中的微生物多樣性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)它們的微生物菌落具有高度一致性，乳酸菌屬是豐度最高菌屬，分別為99．42%和99．79%，該屬主要由開(kāi)菲爾基質(zhì)乳桿菌、布氏乳桿菌和瑞士乳桿菌三種乳酸菌構(gòu)成，總豐度分別占該乳酸菌屬的97．63%和98．74%。智楠楠等[28]采用下一代測(cè)序技術(shù)對(duì)9種市售酸奶中的微生物多樣性進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樣品的豐度以厚壁菌門(mén)為主占99．60%，其中，鏈球菌屬占87．10%、乳桿菌屬占10．30%、乳球菌屬占0．30%。

2．5 干酪微生物分析

干酪的制作與微生物有密切的關(guān)系，研究其細(xì)菌、真菌和霉菌的變化對(duì)深入研究干酪質(zhì)地和風(fēng)味的形成具有重要的意義[29]。Wolfe等[30]對(duì)10 個(gè)國(guó)家的137 種奶酪表皮微生物群落進(jìn)行了宏基因組測(cè)序，發(fā)現(xiàn)了24 種主要的細(xì)菌和真菌。Aldrete-Tapia等[31]采用下一代測(cè)序技術(shù)對(duì)意大利Plaisentif半硬質(zhì)干酪的生產(chǎn)進(jìn)行了跟蹤研究發(fā)現(xiàn)，在干酪的生乳期和凝乳期細(xì)菌多樣性較高，變形菌門(mén)和厚壁菌門(mén)的豐度最高；在干酪成熟前期和成熟后期微生物多樣性降低，主要有厚壁菌門(mén)中的乳酸菌屬和鏈球菌屬，多為乳酸菌。傳統(tǒng)奶酪發(fā)酵是由微生物群落共同作用的結(jié)果，然而，目前對(duì)這些微生物群落的結(jié)構(gòu)、安全性及相互作用等特征的研究仍需要進(jìn)一步加強(qiáng)。Almeida等[32]采用下一代測(cè)序技術(shù)建立了奶酪菌群數(shù)據(jù)庫(kù)，對(duì)其67 個(gè)屬中137 個(gè)物種的142 株菌株進(jìn)行了基因組測(cè)序，包括克呂沃氏菌屬，藤黃球菌屬和海生乳桿菌屬等，這對(duì)干酪微生物的群落研究及干酪產(chǎn)品的風(fēng)味特性研究起到了重要作用。呼斯楞[33]采用宏基因組學(xué)研究方法分析了哈薩克斯坦阿拉木圖市和江布爾州兩個(gè)地區(qū)采集的6 份自然發(fā)酵制成的傳統(tǒng)干酪，發(fā)現(xiàn)該傳統(tǒng)干酪中的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)為厚壁菌門(mén)，豐度為92．46%，優(yōu)勢(shì)菌屬為乳酸桿菌屬，豐度為42．12%，優(yōu)勢(shì)菌種分別為乳酸乳桿菌（豐度為28．93%）和瑞士乳桿菌（豐度為26．43%）。

2．6 嬰幼兒配方奶粉微生物分析

嬰幼兒配方奶粉是嬰幼兒除母乳外最重要的食品，其安全的重要性不容置疑，因此，對(duì)這類(lèi)產(chǎn)品開(kāi)展質(zhì)量安全等關(guān)鍵性指標(biāo)的研究十分必要[34]。王鳴秋等[35]采用下一代測(cè)序技術(shù)對(duì)14 個(gè)嬰幼兒食品樣本中細(xì)菌16S rRNA的V4-V5可變區(qū)進(jìn)行了測(cè)序，分析結(jié)果表明，羊奶粉樣品中占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)菌群隸屬于厚壁菌門(mén)（豐度為65．58%）和變形菌門(mén)（豐度為16．01%），在屬水平上以鏈球菌屬（豐度為24．86%）和乳球菌屬（豐度為21．44%）為主，為探究嬰幼兒奶粉生產(chǎn)的質(zhì)量控制和監(jiān)管提供了理論依據(jù)。

3 其他與乳相關(guān)產(chǎn)品的應(yīng)用

以動(dòng)物乳、乳清或乳清粉等為主要原料，經(jīng)發(fā)酵等工藝釀制而成的奶酒，受到發(fā)酵菌株的篩選等方面因素的制約[36，37]，影響著奶酒的工業(yè)化生產(chǎn)。林少華等[38]采用下一代測(cè)序技術(shù)，對(duì)奶酒的真菌生物多樣性進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果表明，酵母菌屬（Saccharomyces）和曲霉屬（Aspergillus）是奶酒主要真菌群落，其中，酵母菌屬的豐度約為62．00%，曲霉屬的豐度為33．00%。烏日汗等[39]應(yīng)用IlluminaMiSeq第2代測(cè)序技術(shù)測(cè)定了內(nèi)蒙古科爾沁地區(qū)食療用酸馬奶發(fā)酵引子的細(xì)菌多樣性。發(fā)現(xiàn)該樣品主要包括乳桿菌屬（豐度為84．08%）、醋桿菌屬（豐度為9．83%）、乳球菌屬（豐度為2．41%）和鏈球菌屬（豐度為2．18%）。

4 展望

隨著下一代測(cè)序技術(shù)及生物信息學(xué)技術(shù)的發(fā)展，宏基因組學(xué)將會(huì)越來(lái)越多的被用于研究乳業(yè)中微生物群落結(jié)構(gòu)及其演替規(guī)律，以及挖掘傳統(tǒng)培養(yǎng)方法無(wú)法獲得的微生物信息等基礎(chǔ)研究。雖然下一代測(cè)序的出現(xiàn)為乳業(yè)研究微生物提供了一個(gè)嶄新的平臺(tái)和廣闊的前景，然而面臨的挑戰(zhàn)仍然存在，局限性仍不容忽視。如該技術(shù)依賴(lài)的總DNA提取受復(fù)雜多樣的環(huán)境影響；現(xiàn)有的測(cè)序技術(shù)序列片段短，拼接具有一定難度；宏基因組測(cè)序數(shù)據(jù)量較大，后續(xù)數(shù)據(jù)的分析因算法程序的差異而有較大的變化；測(cè)序費(fèi)用昂貴導(dǎo)致測(cè)序重復(fù)樣本較少，降低了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的再現(xiàn)性等。未來(lái)，隨著更具優(yōu)勢(shì)的三代測(cè)序技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生，將為微生物群落結(jié)構(gòu)的研究提供了更加準(zhǔn)確可靠的方法。此外，日益豐富和完善的微生物基因組數(shù)據(jù)庫(kù)將有利于提高宏基因組數(shù)據(jù)拼接和注釋的效率。宏基因組學(xué)、宏轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)和代謝組學(xué)的綜合運(yùn)用將有助于更深刻地了解微生物的群落結(jié)構(gòu)演替、相互作用以及對(duì)青貯飼料的制作、奶牛疾病的防控、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)調(diào)控和乳制品的優(yōu)化和開(kāi)發(fā)等的應(yīng)用。C