李 剛

(遼東學(xué)院 化工與機械學(xué)院，遼寧 丹東 118003)

苯甲醛-2,4-二磺酸鈉,又名4-苯甲醛-1,3-二磺酸二鈉鹽，CAS登記號：33513-44-9，用于合成熒光增白劑[1]、測定細胞脫氫酶活性試劑[2]以及細胞增殖和細胞毒性試驗試劑盒中水溶性四氮唑鹽[3]的合成原料。文獻報道的對于該化合物測定方法[4]是先利用亞硫酸氫鈉飽和溶液與醛基發(fā)生加成反應(yīng)，再將反應(yīng)產(chǎn)物與碳酸氫鈉共熱又釋放出結(jié)合的亞硫酸氫鈉，最后用碘量法進行滴定分析；或是利用鹽酸羥胺與醛基反應(yīng)生成醛肟并釋放出鹽酸，再用堿標準溶液進行滴定分析。上述測定方法都屬于化學(xué)滴定分析方法，存在操作繁瑣、分析時間長、靈敏度低、復(fù)性差等不足。筆者利用高效液相色譜法，采用C18色譜柱，以甲醇/pH為3的磷酸二氫鉀溶液=20/80(V/V)為流動相，紫外檢測波長254nm，外標法測定苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的含量，結(jié)果表明，苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的進樣質(zhì)量濃度在10～320μg/mL范圍內(nèi)，峰面積與樣品濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.9994，相對標準偏差為0.23% ，回收率為96.13%～100.23%。本方法具有測定速度快、靈敏度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。測得樣品中苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的含量為83.1%。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：Waters 1525二元泵，Waters 2489紫外可見光檢測器，Waters Breeze2色譜工作站，美國沃特世公司；7725i手動進樣閥，美國Rheodyne公司；紫外可見光分光光度計：UV2201型，日本島津公司；數(shù)控超聲波清洗器：KQ2200DA型，昆山市超聲儀器有限公司。

苯甲醛-2,4-二磺酸鈉標準品(質(zhì)量分數(shù)為≥98.0%，Lot: E1525075 ，上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；苯甲醛-2,4-二磺酸鈉樣品(工業(yè)品)；甲醇(HPLC級)；磷酸二氫鉀(分析純)。

0.050 mol/L磷酸二氫鉀溶液(pH=3)：準確稱取磷酸二氫鉀固體13.6 g，用少量水溶解后，定容至2 L，再滴加磷酸調(diào)節(jié)pH值為3。

二次重蒸餾水：自制。

1.2 色譜條件[5-6]

色譜柱：美國沃特世公司SunFireTMC18柱(4.6×250 mm，5 μm)，柱溫30 ℃，流動相： 甲醇/pH為3的0.050 mol/L磷酸二氫鉀溶液=20 /80(V/V)，流動相使用之前用0.45 μm濾膜過濾，流速為1.0 mL/min，紫外檢測波長254 nm。進樣體積5 μL。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準品溶液的配制

苯甲醛-2,4-二磺酸鈉標準品溶液：精密稱取0.1 g(精確到0.000 1 g)苯甲醛-2,4-二磺酸鈉標準品于100 mL容量瓶中，以流動相定容,得到1 mg/mL標準品儲備液。取上述儲備液5 mL于50 mL容量瓶中，以流動相定容后，得到0.1 mg/mL的標準品溶液。

1.3.2 樣品溶液的配制

苯甲醛-2，4-二磺酸鈉樣品溶液：精密稱取0.1 g(精確到0.000 1 g)苯甲醛-2,4-二磺酸鈉工業(yè)品樣品于100 mL容量瓶中，以流動相定容,得到1 mg/mL樣品儲備液。取上述儲備液5 mL于50 mL容量瓶中，以流動相定容后，得到0.1 mg/mL的樣品溶液。

1.3.3 測定

待色譜儀器穩(wěn)定后，分別取標準品和樣品溶液5 μL進樣，重復(fù)操作，保證其相對標準偏差小于0.5%，記錄色譜峰的峰面積數(shù)據(jù)，根據(jù)外標法定量計算出苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的含量。

1.3.4 分析結(jié)果的表述

苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的含量用質(zhì)量分數(shù)表示，質(zhì)量分數(shù)按式(1)計算：

(1)

樣品中苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的質(zhì)量分數(shù)ω1，以%表示。

式中：

A1——樣品溶液中，苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的峰面積值，單位為微伏·秒/μv·s；

A2——標準品溶液中，苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的峰面積值，單位為微伏·秒/μv·s；

m1——苯甲醛-2,4-二磺酸鈉標準品的質(zhì)量，單位為克/g；

m2——苯甲醛-2,4-二磺酸鈉樣品的質(zhì)量，單位為克/g；

ω——標準品中苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的質(zhì)量分數(shù)，以%表示。

1.3.5 色譜圖

按1.2中的色譜條件，分別對苯甲醛-2,4-二磺酸鈉標準品溶液和樣品溶液進樣分析，測得標準品和樣品溶液的色譜保留時間tR為5.769 min和5.770 min，對應(yīng)的色譜圖見圖1和圖2。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動相以及流動相離子強度的選擇

本試驗比較了甲醇/水、甲醇/磷酸水溶液、甲醇/磷酸二氫鉀溶液的三種流動相體系，由于苯甲醛-2,4-二磺酸鈉屬于離子型化合物，當采用甲醇/水、甲醇/磷酸水溶液體系時，在C18色譜柱上不易保留，出峰時間過快。以甲醇/pH為3的磷酸二氫鉀溶液(V/V為20/80)作為流動相，并在固定其它實驗條件不變情況下,分別試驗比較了甲醇和0.025、0.050、0.075 mol/L三種不同摩爾濃度的磷酸二氫鉀溶液所組成流動相時的色譜分離效果。結(jié)果表明，當磷酸鹽的摩爾濃度為0.05 mol/L時,色譜分離效果最佳。因此實驗選擇甲醇/pH為3的0.050 mol/L磷酸二氫鉀溶液=20 /80(V/V)作為流動相進行色譜分析。

2.2 色譜柱柱溫的選擇

當柱溫從20 ℃上升到40 ℃時，分離效果變化不大，從色譜柱的柱壓力、分離效果和實際操作等因素方面考慮，實驗選擇柱溫為30 ℃。

2.3 紫外檢測波長的選擇

以流動相作為參比，利用紫外可見光分光光度計在200～350 nm范圍內(nèi)，對苯甲醛-2,4-二磺酸鈉標準品溶液進行掃描，結(jié)果表明苯甲醛-2,4-二磺酸鈉在215和254 nm處有較強的紫外吸收，為最大程度減少流動相的背景吸收干擾和保證樣品檢測靈敏度，實驗選擇紫外檢測波長為254 nm。

2.4 檢出限

苯甲醛-2,4-二磺酸鈉標準品溶液經(jīng)多次稀釋后，進樣進行色譜分析。選擇合適的基線噪音范圍，根據(jù)信噪比S/N=3時，計算出儀器的最低檢出限為0.1 μg/mL；信噪比S/N=10時，計算出儀器的定量限為 0.3 μg/mL。

2.5 線性方程與線性范圍

將苯甲醛-2,4-二磺酸鈉標準品儲備液配制成濃度為10、20、40、80、160、320 μg/mL系列標準品溶液，按1.2中的色譜條件進行測定，對苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的峰面積和濃度進行線性回歸處理，得線性方程為y=9 190.1x+27 752,線性相關(guān)系數(shù)r=0.999 4。峰面積(y)與濃度(x)對應(yīng)關(guān)系如圖3所示。由圖3可知，進樣濃度在 10～320 μg/mL范圍內(nèi)，苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的峰面積與樣品濃度呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗

依照1.2中的色譜條件，用80 μg/mL的苯甲醛-2，4-二磺酸鈉標準品溶液連續(xù)重復(fù)5次進樣分析，所得結(jié)果見表1。由表1可知，苯甲醛-2，4-二磺酸鈉含量的測試結(jié)果相對偏差(RSD)為0.23%。說明方法的精密度較高。

表1 苯甲醛-2，4-二磺酸鈉的精密度試驗(n=5)

2.7 回收試驗

精密量取0.1 mg/mL苯甲醛-2，4-二磺酸鈉樣品溶液25 mL 3份，分別置于3只25 mL容量瓶中，各加入0.05、0.10、0.15 mg/mL苯甲醛-2，4-二磺酸鈉標準品溶液1.0 mL，在同樣條件下，每個樣品重復(fù)測定5次，進行定量分析。所得結(jié)果見表2。由表2可知，加標回收率為96.13%～100.23%，說明方法的準確度較高。

表2 苯甲醛-2，4-二磺酸鈉回收率測定

2.8 樣品測定

在1.2中的色譜條件下,對工業(yè)品苯甲醛-2，4-二磺酸鈉樣品中苯甲醛-2，4-二磺酸鈉的含量進行了5次測定，結(jié)果見表3，測定的精密度符合定量分析要求。

表3 工業(yè)品苯甲醛-2，4-二磺酸鈉的含量測定

3 結(jié)論

利用高效液相色譜法對苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的含量進行了測定。結(jié)果表明，甲醛-2,4-二磺酸鈉的進樣濃度在10～320 μg/mL范圍內(nèi)，峰面積與樣品濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.999 4，相對標準偏差為0.23%，回收率為96.13%～100.23%。本方法具有測定速度快、準確性、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。測得樣品中苯甲醛-2,4-二磺酸鈉的含量為83.1%。