張忠子

（東北大學(xué)秦皇島分校，河北 秦皇島 066004）

紅菇 （Russula vinosaLindbled） 屬擔(dān)子菌門 （Basidiomycota）傘菌綱（Agaricomycetes）紅菇目（Russulaemetica） 紅菇科 （Russulaceae）。紅菇子實體質(zhì)地鮮嫩，色澤艷麗，并且內(nèi)含較多營養(yǎng)物質(zhì)。根據(jù)相關(guān)報道可知，紅菇多糖的生物活性非常豐富，具備一定的免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抑菌以及抗氧化的作用[1]。紅菇被稱為“南方紅參”，其作用包括健胃強(qiáng)腎、脾肝補(bǔ)血等。若是兒童出現(xiàn)泄瀉癥狀，常會運(yùn)用紅菇蕾燉湯的方式達(dá)到止瀉效果；婦女生產(chǎn)完會食用紅菇，以達(dá)到滋補(bǔ)之效。在烹飪時，若是添加一些紅菇，不但能夠發(fā)揮色彩搭配的效果，還能夠增加湯水的甜度，使得湯水的味道更佳。因為紅菇不但是天然味精，還是良好的天然色素，所以人們在飲食上往往會添加一些紅菇。紅菇的生長環(huán)境非常特殊，一年只生長一次，生長環(huán)境屬于典型的高溫、高濕環(huán)境。此外，紅菇生長的地域同樣非常特殊，僅僅在茂密椴木樹下的沃土區(qū)域生長，并且紅菇每天都會在相同的區(qū)域下生長，因此采菇者每年都能在相同的區(qū)域內(nèi)采集紅菇。

現(xiàn)今，中國已經(jīng)有很多專家針對紅菇生態(tài)、資源調(diào)研、紅菇運(yùn)用以及分離純化等進(jìn)行相關(guān)研究[2]，并且在藥用植物抗疲勞的方向上也已經(jīng)有較多的研究成果，如金香子等提出龍膽草提取物可以導(dǎo)致小鼠在進(jìn)行45 min 的游泳運(yùn)動之后，機(jī)體的肝糖原水平顯著提升，而乳酸水平則會顯著降低，可見龍膽草提取物能夠發(fā)揮一定的抗疲勞效果。但是，現(xiàn)今并未有相關(guān)研究證實紅菇的抗運(yùn)動性疲勞效果。鑒于此，以小鼠為研究對象，分析紅菇子實體提取液的抗疲勞效果，主要監(jiān)測指標(biāo)包括小鼠的乳酸脫氫酶水平、負(fù)重游泳力竭時長、肝糖原水平等，針對紅菇子實體提取液的抗運(yùn)動性疲勞作用進(jìn)行系統(tǒng)性的分析，以期為野生紅菇的運(yùn)用及推廣提供借鑒及參考。

1 試驗方法

1.1 基本情況

雄性昆明小鼠，來源于昆明醫(yī)科大學(xué)動物研究中心。年齡4 周齡， 體重19.5 g～20.0 g。紅菇子實體干品為容縣野生紅菇干品。

1.2 主要試劑與儀器

試驗用試劑等級均為分析純，濃硫酸、75%乙醇、蒽酮、三氯甲烷、檸檬酸三鈉、冰醋酸、SOD 試劑。試驗設(shè)備：小鼠游泳缸，自制，規(guī)格50 cm×50 cm×40 cm；全自動細(xì)胞分析儀、FWl00 型高速萬能粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司；加樣器、YPl02N 型電子天平，上海精密科學(xué)有限公司；L420臺式低速自動平衡離心機(jī)，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；HH-S2 型雙孔數(shù)顯電熱恒溫水浴鍋，江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠；抗凝管，由玉林市第二人民醫(yī)院提供；電磁爐、玻璃組織勻漿器、石英秒表、721型可見分光光度計，上海精密科學(xué)儀器廠；全自動生化分析儀，玉林第二人民醫(yī)院。

1.3 紅菇子實體提取液的制備(水浴浸提法)

在80℃的環(huán)境下進(jìn)行鮮菇的烘干粉碎操作，并且以料液比l∶20 的比例，在90℃恒溫水浴的條件下進(jìn)行4 h 的水浴處理，之后進(jìn)行15 min 的離心處理，轉(zhuǎn)速設(shè)置為4 000 r·min-1，取上清液，借助水浴蒸干的方式得到相應(yīng)濃度的紅菇子實體提取液，即200 mg·mL-1、100 mg·mL-1。

1.4 負(fù)重游泳力竭時間

針對小白鼠進(jìn)行3 周的不間斷灌胃操作，最后1 次灌胃0.5 h 后，在3 組中分別選6 只小鼠，根據(jù)小白鼠體重的5%進(jìn)行重量負(fù)荷的設(shè)定，并且在水深30 cm，水溫25℃～27℃，50 cm×50 cm×40 cm 的水槽中讓小白鼠進(jìn)行游泳，1 個水槽內(nèi)同時僅可容納4只小鼠。針對小白鼠的游泳情況進(jìn)行分析，并且詳細(xì)記錄下來，小白鼠游泳力竭時間系小白鼠由入水到力竭沉入水底，并且10 s 內(nèi)沒有浮出水面這個階段的時長。

1.5 測定運(yùn)動后小白鼠血清中乳酸脫氫酶

針對小白鼠進(jìn)行3 周的不間斷灌胃操作，最后1次灌胃0.5 h 后，在3 組中分別選6 只小鼠，在30℃的水槽中進(jìn)行90 min 的游泳操作。游泳結(jié)束之后采取拔眼球取血的方式，獲得全血之后將其存儲在收集管內(nèi)，并且進(jìn)行血清的分離處理，進(jìn)行相關(guān)參數(shù)的測定。考慮到試驗數(shù)據(jù)的可靠性，并且為了降低系統(tǒng)性誤差，借助全自動生化分析設(shè)備進(jìn)行血清內(nèi)LDH 水平的檢測，并將檢測結(jié)果詳細(xì)記錄下來，展開t-檢驗。

1.6 肝糖原含量的測定

最后1 次灌胃0.5 h 之后，在3 組中分別選6 只小鼠，在30℃的水槽中進(jìn)行90 min 的游泳操作。游泳結(jié)束后采取拔眼球取血的方式，之后在較短的時間內(nèi)取出小白鼠的肝臟，并且利用生理鹽水進(jìn)行處理，借助潔凈的濾紙吸干。精密稱定1.0 g 肝臟，往其中滴加5%三氯醋酸8 mL，借助玻璃組織勻漿器將其磨碎，并在轉(zhuǎn)速3 000 r·min-1的條件下進(jìn)行15 min 的離心處理，之后利用上清液進(jìn)行肝糖原水平的檢測，所運(yùn)用的測定原理是蒽酮法。

1.7 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 提取液對試驗小鼠負(fù)重游泳力竭時間影響

紅菇提取液對小鼠負(fù)重游泳至力竭死亡時間的影響見表1。

表1 紅菇提取液對小鼠負(fù)重游泳至力竭死亡時間的影響Tab.1 The effect of Russula vinosa extract on the death time of mice from weight-bearing swimming to exhaustion

如表1 所示，不間斷地進(jìn)行3 周不同劑量的紅菇子實體提取液灌胃處理之后，2 個試驗組的小鼠負(fù)重游泳時長都得到明顯延長，并且相較于對照組而言，低劑量組的負(fù)重游泳時長顯著延長，即存在統(tǒng)計學(xué)意義，但是高劑量組和對照組小鼠的負(fù)重游泳時長差異并不存在統(tǒng)計學(xué)差異[3]。

2.2 提取液對試驗小鼠乳酸脫氫酶和肝糖原的影響

紅菇提取液對小鼠乳酸脫氨酶和肝糖的影響見表2。

表2 提取液對試驗小鼠乳酸脫氨酶和肝糖的影響Tab.2 Effect of extract on lactate deaminase and liver sugar in experimental mice

如表2 所示，不間斷地進(jìn)行3 周不同劑量的紅菇子實體提取液灌胃處理之后，發(fā)現(xiàn)紅菇提取液高劑量組、低劑量組都可以使得機(jī)體肝糖原水平得到提升，并且相較于對照組而言，高劑量組小鼠的肝糖原水平得到顯著提升，即差異存在統(tǒng)計學(xué)意義，而低劑量組和對照組小鼠之間的肝糖原水平差異并不具備統(tǒng)計學(xué)價值[4-5]。此外，紅菇提取液高、低劑量組相較于對照組小鼠的乳酸脫氫酶水平，均有顯著降低，差異存在統(tǒng)計學(xué)價值（P＜0.05）。

3 結(jié)論

疲勞是一種非常復(fù)雜的生理機(jī)制，通常系指機(jī)體的各項生理功能已經(jīng)不能持續(xù)維持在特定范圍內(nèi)，或是不能維持特定的運(yùn)動水平，進(jìn)而導(dǎo)致生理或是心理狀態(tài)出現(xiàn)明顯的下降，這就會使得工作效率或是工作能力出現(xiàn)明顯的衰退。而疲勞出現(xiàn)的關(guān)鍵性原因是能源物質(zhì)的大量消耗與代謝物質(zhì)的不斷堆積。

強(qiáng)化運(yùn)動耐力，能夠有效強(qiáng)化抗疲勞能力。游泳時長能夠體現(xiàn)動物實際運(yùn)動的疲勞情況。而本研究能夠針對紅菇水提液是否可以延長負(fù)重小鼠的游泳時長進(jìn)行直觀性的觀察及分析，根據(jù)最終研究數(shù)據(jù)顯示兩個受測試劑量組相較于對照組小白鼠來說，低劑量組（100 mg·mL-1）可以使得負(fù)重游泳時長得到顯著延長，差異存在統(tǒng)計學(xué)價值，可是高劑量組（200 mg·L-1）與對照組小白鼠間并不存在顯著差異（P＞0.05）。

糖原的儲存量會對小白鼠的運(yùn)動能力產(chǎn)生嚴(yán)重影響。根據(jù)研究數(shù)據(jù)可知，2 個受測試劑量組相較于對照組而言，其肝糖原水平較高，并且高劑量組小白鼠的肝糖原水平明顯較高，差異存在統(tǒng)計學(xué)價值。這就表示紅菇水提液可以借助增多能量物質(zhì)的方式，提供能量，發(fā)揮抗疲勞效果[6-7]。在劇烈運(yùn)動的情況下，僅借助有氧氧化的方式，能量依舊會處于供不應(yīng)求的狀態(tài)。所以在無氧的條件下，肌肉借助糖原酵解的方式不但能夠獲得能量，還會形成大量乳酸，肌肉中出現(xiàn)更多的乳酸，疲勞的情況就會更加嚴(yán)重，而乳酸脫氫酶在乳酸代謝過程中發(fā)揮重要作用，而借助乳酸脫氫酶進(jìn)行抗疲勞功能性食品的評估[8-9]。肌肉內(nèi)的乳酸會在較短的時間內(nèi)滲透至血液循環(huán)系統(tǒng)，進(jìn)而導(dǎo)致血乳酸水平提高，進(jìn)而使得肌乳酸和血乳酸水平處于相對平衡的狀態(tài)。此過程所需時間大概是5 min～15 min。2 個受測試劑量組的乳酸脫氫酶水平相對于對照組來說都明顯較低，并且差異存在統(tǒng)計學(xué)價值，這就代表紅菇水提液可以抑制肌乳酸的形成，進(jìn)而發(fā)揮抗疲勞的效果。

分析灌胃小白鼠的血乳酸脫氫酶水平、持續(xù)浮水時長、肝糖原水平等參數(shù)，能夠?qū)t菇水提取液對小白鼠抗疲勞效果的研究提供可靠的參考依據(jù)。