耿澤星， 單洪偉， 馬 甡， 左孝文， 王 騰

(海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(中國(guó)海洋大學(xué))， 山東 青島 266003)

凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)因其生長(zhǎng)速度快、可高密度養(yǎng)殖，味道鮮美，且含有豐富的蛋白質(zhì)而在中國(guó)迅速推廣。凡納濱對(duì)蝦也是全球最主要的甲殼經(jīng)濟(jì)品種之一，占甲殼類(lèi)動(dòng)物總產(chǎn)量的53%，且其養(yǎng)殖規(guī)模及產(chǎn)量在逐年提高[1]。近年來(lái)，隨著人們對(duì)高產(chǎn)量的追求，凡納濱對(duì)蝦集約化程度不斷提高，引起養(yǎng)殖環(huán)境的日趨惡化，致使對(duì)蝦處于各種環(huán)境脅迫之中。環(huán)境脅迫往往會(huì)引起對(duì)蝦機(jī)體能量供應(yīng)和利用途徑的改變[2]。已有研究表明，鹽度的變化會(huì)改變凡納濱對(duì)蝦的滲透壓調(diào)節(jié)狀態(tài)，造成對(duì)蝦調(diào)節(jié)耗能的增加[3-4]，進(jìn)而影響對(duì)蝦體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消耗及其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求[5]。

通過(guò)營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化可以提高對(duì)蝦抗環(huán)境脅迫能力[6]。Palacios等研究發(fā)現(xiàn)，改善營(yíng)養(yǎng)條件可以提高凡納濱對(duì)蝦仔蝦在低鹽度脅迫下的成活率[7]，然而，目前關(guān)于營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化作用機(jī)制的研究較少。生物餌料是經(jīng)過(guò)篩選的優(yōu)質(zhì)餌料生物，其富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及多種活性物質(zhì)，對(duì)蝦攝食生物餌料后，能夠顯著提高對(duì)蝦免疫力和抗環(huán)境脅迫能力[8-10]。藻鉤蝦屬于節(jié)肢動(dòng)物門(mén)(Arthropoda)甲殼綱(Crustacea)端足目(Gammarid)鉤蝦亞目(Gammaridea)，多分布于溫帶和熱帶海域，并且具有廣鹽性，個(gè)體較大最大可長(zhǎng)至28 mm，身體頭部前緣圓拱，體光滑且兩側(cè)較扁平，眼呈卵圓形，額角不明顯，側(cè)葉突出，藻鉤蝦大多棲息于潮間帶或潮下帶海藻[11]。藻鉤蝦是一種優(yōu)質(zhì)的生物餌料，飼喂藻鉤蝦不僅能夠提高對(duì)蝦養(yǎng)成過(guò)程中成活率，并且能顯著提高對(duì)蝦抗環(huán)境脅迫能力[12-13]。

在對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中，由于降雨、換水或干旱等原因，養(yǎng)殖水體的鹽度會(huì)發(fā)生突變，從而影響對(duì)蝦的生長(zhǎng)及成活率。本研究以凡納濱對(duì)蝦為研究對(duì)象，以低鹽度為脅迫因子，通過(guò)分析對(duì)蝦體內(nèi)生化指標(biāo)及呼吸代謝和滲透壓調(diào)節(jié)關(guān)鍵酶活性變化，探究飼料中添加鉤蝦粉對(duì)凡納濱對(duì)蝦低鹽度脅迫適應(yīng)性調(diào)節(jié)的影響。本研究結(jié)果將為生物餌料在對(duì)蝦養(yǎng)殖中的應(yīng)用及作用機(jī)制的研究提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料的制備

配制3種等氮等能飼料，其中鉤蝦粉在飼料中比例分別為0%、8.25%和33%(記為D0、D8.25和D33)。飼料制備過(guò)程如下：飼料原料經(jīng)粉碎后過(guò)80目篩，采用逐級(jí)擴(kuò)大法混合均勻，隨后添加魚(yú)油、卵磷脂，再添加水和氯化膽堿，混勻，壓制成粒徑為1.0 mm的顆粒飼料，于55 ℃烘干，自然冷卻后放入密封袋中，置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。配制成?種飼料配方及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1，飼料中粗蛋白水平約為36.04%，總能約為16.79 MJ/kg。本實(shí)驗(yàn)中所使用的鉤蝦粉制作過(guò)程如下：將藻鉤蝦(購(gòu)買(mǎi)于山東省濰坊市昌邑縣王家莊子村，生長(zhǎng)水域鹽度35)清洗干凈后使用冷凍干燥機(jī)進(jìn)行凍干處理，粉碎后置于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 實(shí)驗(yàn)飼料配方(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition of the experimental diets(D.M. basis) /%

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化 營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化在室內(nèi)水泥池(206 cm×137 cm×97 cm，水體積約為2.25 m3)中進(jìn)行，每個(gè)水泥池放置(753±36)尾凡納濱對(duì)蝦(體長(zhǎng)(5.32±0.69)cm，體重(1.80±0.72)g)，持續(xù)48 d，營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化過(guò)程中，每天投喂4餐(6:00、10:00、18:00和22：00)，每餐投喂后查看殘餌情況，以便調(diào)整投喂量。

D0組、D8.25組和D33組分別投喂含鉤蝦粉為0%、8.25%和33%的實(shí)驗(yàn)飼料。營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化過(guò)程中，養(yǎng)殖水質(zhì)參數(shù)如下：DO>6 mg/L，水溫(24.7±3.5) ℃，鹽度30±0.5，pH 7.65～7.97。

1.2.2 低鹽度脅迫 營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化結(jié)束后，對(duì)蝦停食24 h開(kāi)始低鹽度脅迫實(shí)驗(yàn)，脅迫鹽度為5，脅迫持續(xù)8 d。各組實(shí)驗(yàn)用蝦規(guī)格見(jiàn)表2。低鹽度脅迫在泡沫箱中進(jìn)行(66 cm ×35 cm×27 cm，水體積為50 L)，每個(gè)泡沫箱為一個(gè)平行，放置15尾對(duì)蝦。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組設(shè)置6個(gè)平行，其中3個(gè)用于取樣，3個(gè)用于記錄死亡率。

表2 各組鹽度脅迫實(shí)驗(yàn)用蝦規(guī)格Table 2 The shrimp size used in salinity lstress in different groups

1.3 樣品的采集與分析

在低鹽度脅迫后的0、6、12、24、48、96和192 h取樣，隨機(jī)從各組中選取3尾對(duì)蝦，用針管從對(duì)蝦血竇處按血淋巴與抗凝劑(450 mmol/L NaCl，10 mmol/L KCl，10 mmol/L Na2-EDTA，10 mmol/L HEPES，pH 7.3)[14]體積比為1∶3的比例抽血，抽出的血淋巴立即離心(4 000 r/min，10 min)，取上清置于-20℃冰箱內(nèi)保存待測(cè)。取對(duì)蝦肝胰腺、腮置于-20℃冰箱內(nèi)保存待測(cè)。

實(shí)驗(yàn)測(cè)定的指標(biāo)包括甘油三酯(TG)含量、總膽固醇(T-CHO)含量、蛋白質(zhì)(Protein)含量、葡萄糖(Glu)含量、乳酸(LD)、己糖激酶(HK)活性、果糖-6-磷酸激酶(PFK)活性、乳酸脫氫酶(LDH)活性、琥珀酸脫氫酶(SDH)活性、Na+/K+-ATP酶活性，均使用試劑盒(南京建成)按照說(shuō)明書(shū)完成測(cè)定。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用spss22.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)，采用Tukey檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異顯著性分析，顯著水平為0.05，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 低鹽度脅迫階段對(duì)蝦累積死亡率

低鹽度脅迫對(duì)蝦累積死亡率如圖1所示。脅迫期間，D0組出現(xiàn)死亡的時(shí)間較D8.25組和D33早，在脅迫6 h出現(xiàn)了死亡，而D8.25組和D33組在12 h出現(xiàn)死亡。在脅迫192 h，D0組對(duì)蝦累積死亡率最高，達(dá)到60%，D8.25組和D33組對(duì)蝦累積死亡率均為23.33%。脅迫結(jié)束時(shí)，D8.25組和D33組對(duì)蝦的累積死亡率較D0組低61.11%。

圖1 低鹽度脅迫階段各組對(duì)蝦累計(jì)死亡率Fig.1 Cumulative mortality rate of shrimps in different groups at low-salinity stress period

2.2 對(duì)蝦血淋巴中生化物質(zhì)水平的變化

各組對(duì)蝦血淋巴中生化物質(zhì)水平變化如圖2所示。各組對(duì)蝦血淋巴中蛋白含量隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，在脅迫96～192 h，D0組下降更加明顯，顯著低于D8.25組和D33組(P<0.05)(見(jiàn)圖2(A))。D8.25組和D33組對(duì)蝦蛋白含量差異不顯著(P>0.05)。

各組對(duì)蝦血淋巴中葡萄糖含量整體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，下降速度與鉤蝦粉的添加量呈負(fù)相關(guān)(見(jiàn)圖2(B))。在脅迫0～12 h，D33組對(duì)蝦血淋巴中葡萄糖含量顯著低于D0組和D8.25組(P<0.05)。在脅迫24～192 h，D33組對(duì)蝦血淋巴中葡萄糖含量顯著高于D0組(P<0.05)。各組對(duì)蝦血淋巴中乳酸含量在脅迫6 h內(nèi)急劇下降，然后趨于平穩(wěn)狀態(tài)，各組之間無(wú)明顯差異(見(jiàn)圖2(C))。

各組對(duì)蝦血淋巴中甘油三酯含量隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，且D0組下降更明顯(見(jiàn)圖2(D))。在脅迫0～12 h、48 h，D33組對(duì)蝦血淋巴中的甘油三酯含量顯著低于D0組(P<0.05)；在脅迫24 h、96～192 h，D33組與D0組對(duì)蝦血淋巴中的甘油三酯含量差異不顯著(P>0.05)；在脅迫6～24 h，D8.25組對(duì)蝦血淋巴中的甘油三酯含量顯著低于D0組(P<0.05)；在脅迫48～96 h，D8.25組對(duì)蝦血淋巴中的甘油三酯含量顯著高于D0組(P<0.05)。對(duì)蝦血淋巴中總膽固醇含量與對(duì)蝦血淋巴中甘油三酯含量變化趨勢(shì)類(lèi)似(圖2(E))。

(同一時(shí)間點(diǎn)，不同字母表示處理組間存在顯著性差異(P<0.05)。At each time-point, means with different letters are significantly different (P<0.05).)

2.3 對(duì)蝦肝胰腺中生化物質(zhì)水平的變化

各組對(duì)蝦肝胰腺中生化物質(zhì)水平變化如圖3所示。各組對(duì)蝦肝胰腺中蛋白含量呈現(xiàn)緩慢下降趨勢(shì)，且肝胰腺中蛋白質(zhì)含量為D33組>D8.25組>D0組(見(jiàn)圖3(A))。在脅迫6、12、48和96 h后，D33組對(duì)蝦肝胰腺中蛋白質(zhì)含量顯著高于D0組和D8.25組(P<0.05)。在脅迫6和48 h后，D8.25組對(duì)蝦肝胰腺中蛋白質(zhì)含量顯著高于D0組(P<0.05)。

各組對(duì)蝦肝胰腺中乳酸含量在脅迫6 h內(nèi)時(shí)急劇上升(見(jiàn)圖3(B))。在脅迫24 h后， D0組和D8.25組對(duì)蝦肝胰腺乳酸含量急劇下降且處于較低水平，而D33組對(duì)蝦肝胰腺乳酸含量依然處于較高水平，且顯著高于D0組和D8.25組(P<0.05)，而D8.25組對(duì)蝦肝胰腺中乳酸含量的變化趨勢(shì)與D0組類(lèi)似且無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

在脅迫0～12 h，D33組對(duì)蝦肝胰腺中甘油三酯含量顯著低于D0組(P<0.05)(見(jiàn)圖3(C))。然而，在脅迫24、48和192 h，D33組對(duì)蝦肝胰腺中甘油三酯含量與D0組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。脅迫24～192 h，D8.25組對(duì)蝦肝胰腺中甘油三酯含量顯著高于D0組(P<0.05)。整體上，D33組對(duì)蝦肝胰腺中總膽固醇含量顯著低于D0組和D8.25組(P<0.05)(見(jiàn)圖3(D))。

2.4 對(duì)蝦肝胰腺中呼吸代謝關(guān)鍵酶的變化

各組對(duì)蝦肝胰腺中呼吸代謝關(guān)鍵酶的變化如圖4所示。各組對(duì)蝦肝胰腺中己糖激酶活性呈現(xiàn)出緩慢升高，然后再緩慢下降的趨勢(shì)(見(jiàn)圖4(A))。在脅迫0 和24 h，D33組對(duì)蝦肝胰腺中己糖激酶活性顯著高于D0組(P<0.05)。在脅迫12和48 h，D8.25組對(duì)蝦肝胰腺中己糖激酶活性顯著高于D0組(P<0.05)。

各組對(duì)蝦肝胰腺中磷酸果糖激酶活性隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)呈現(xiàn)上升趨勢(shì)(見(jiàn)圖4(B))。在脅迫前期，D8.25組和D33組上升更加明顯，在12 h達(dá)到峰值后維持在穩(wěn)定水平，而D0組在48 h達(dá)到峰值，隨后呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。在脅迫96～192 h，D8.25組和D33組對(duì)蝦肝胰腺中磷酸果糖激酶活性顯著高于D0組(P<0.05)。

D8.25組和D33組對(duì)蝦肝胰腺中乳酸脫氫酶活性在6 h出現(xiàn)急劇上升，然后維持在較高水平，而D0組對(duì)蝦肝胰腺中乳酸脫氫酶活性一直處于較低水平(見(jiàn)圖4(C))。整體上，D8.25組和D33組對(duì)蝦肝胰腺中乳酸脫氫酶活性顯著高于D0組(P<0.05)，且D33組高于D8.25組。

各組對(duì)蝦肝胰腺中琥珀酸脫氫酶活性均呈現(xiàn)緩慢上升趨勢(shì)，但D0組、D8.25組和D33組之間差異不顯著(P>0.05)(見(jiàn)圖4(D))。

(同一時(shí)間點(diǎn)，不同字母表示處理組間存在顯著性差異(P<0.05)。At each time-point, means with different letters are significantly different (P<0.05).)

(同一時(shí)間點(diǎn)，不同字母表示處理組間存在顯著性差異(P<0.05)。At each time-point, means with different letters are significantly different (P<0.05).)

2.5 對(duì)蝦鰓中Na+/K+-ATP酶活性變化

各組對(duì)蝦鰓中Na+/K+-ATP酶活性變化如圖5所示。各組對(duì)蝦鰓中Na+/K+-ATP酶活性在脅迫6 h內(nèi)急速上升，然后維持在一個(gè)較高的水平。然而，D0組、D8.25組和D33組對(duì)蝦之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

(同一時(shí)間點(diǎn)，不同字母表示處理組間存在顯著性差異(P<0.05)。At each time-point, means with different letters are significantly different (P<0.05).)

3 討論

3.1 飼喂鉤蝦粉對(duì)對(duì)蝦抗低鹽度脅迫能力的影響

鉤蝦是一種優(yōu)質(zhì)的生物餌料，擁有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)，已有研究證實(shí)飼喂鉤蝦可以提高對(duì)蝦抗環(huán)境脅迫能力[12-13]。本研究結(jié)果表明，飼喂鉤蝦粉可以顯著提高對(duì)蝦抗低鹽度脅迫能力，這可能與其對(duì)養(yǎng)殖對(duì)蝦的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充有關(guān)，已有研究表明，營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化可以提高對(duì)蝦抗鹽度脅迫能力[7]。鉤蝦含有豐富的蝦青素以及其他類(lèi)胡蘿卜素[15]，Yamada等[16]研究發(fā)現(xiàn)飼料中添加一定含量的蝦青素可以顯著提高對(duì)蝦存活率，蝦青素可以通過(guò)清除脅迫中產(chǎn)生的活性氧來(lái)減輕環(huán)境脅迫對(duì)對(duì)蝦產(chǎn)生的危害。Chien等[17-18]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)對(duì)蝦受到溫度脅迫、鹽度脅迫、缺氧脅迫或氨氮脅迫時(shí)，添加蝦青素都可以顯著提高對(duì)蝦的存活率，因此，飼喂鉤蝦粉提高對(duì)蝦抗低鹽度脅迫能力可能是與鉤蝦粉中富含蝦青素有關(guān)。

3.2 飼喂鉤蝦粉對(duì)對(duì)蝦體內(nèi)生化物質(zhì)水平的影響

本研究結(jié)果顯示，飼喂鉤蝦粉可以顯著提高對(duì)蝦血淋巴和肝胰腺中蛋白質(zhì)含量。對(duì)蝦血淋巴和肝胰腺中的蛋白質(zhì)作為重要的能量?jī)?chǔ)備物質(zhì)，在低鹽度脅迫時(shí)，會(huì)分解成氨基酸，一方面提供能量，另一方面提供游離氨基酸來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓[19-20]。因此，飼喂鉤蝦組對(duì)蝦高水平的蛋白質(zhì)含量可以提供更多的游離氨基酸以及能量以應(yīng)對(duì)鹽度脅迫，這有利于對(duì)蝦鹽度耐受性的提高。此外，本研究中發(fā)現(xiàn)各組對(duì)蝦在低鹽度脅迫下血淋巴和肝胰腺中蛋白質(zhì)含量均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，進(jìn)一步證實(shí)了在低鹽度脅迫下對(duì)蝦體內(nèi)蛋白質(zhì)的變化。鉤蝦富含蛋白質(zhì)，武云飛等研究了青海鉤蝦的營(yíng)養(yǎng)作用，證明青海鉤蝦是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白源[21]，因此，飼喂鉤蝦粉提高對(duì)蝦體內(nèi)蛋白質(zhì)含量與其蛋白質(zhì)的補(bǔ)充作用有關(guān)。

糖類(lèi)是生物體內(nèi)的重要能源物質(zhì)，Welcomme等[22]發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲殼動(dòng)物進(jìn)入低鹽度環(huán)境時(shí)，其細(xì)胞線(xiàn)粒體數(shù)量會(huì)急劇上升，氧化代謝上升，耗能加大，同時(shí)血淋巴葡萄糖水平下降。本研究中，各組對(duì)蝦血糖含量除了在12 h時(shí)上升外均呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，說(shuō)明對(duì)蝦為了應(yīng)對(duì)環(huán)境變化，可能通過(guò)增強(qiáng)糖代謝途徑來(lái)增強(qiáng)機(jī)體供能，而脅迫6～12 h對(duì)蝦血糖含量增加可能是因?yàn)楫?dāng)血糖含量下降至一定程度時(shí)啟動(dòng)糖再生作用，致使血糖含量上升。然而，伴隨著對(duì)蝦滲透壓調(diào)節(jié)耗能的增加，對(duì)蝦血糖含量總體呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。此外，各組對(duì)蝦血糖濃度雖然均顯著降低，然而投喂鉤蝦粉的對(duì)蝦血糖濃度波動(dòng)較小。對(duì)蝦在饑餓、營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩等條件下，機(jī)體精準(zhǔn)地調(diào)控自身的平衡狀態(tài)，維持了復(fù)雜的生命活動(dòng)正常進(jìn)行[23]。因此，投喂鉤蝦粉能夠維持血淋巴內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)，從而更好地維持低鹽度脅迫下機(jī)體的供能狀態(tài)。

乳酸是甲殼動(dòng)物無(wú)氧代謝的最終產(chǎn)物，乳酸含量可以反映機(jī)體無(wú)氧代謝的強(qiáng)弱[24-25]。本研究中，在低鹽度脅迫1～6 h時(shí)，各組對(duì)蝦肝胰腺中乳酸濃度的增加說(shuō)明對(duì)蝦的無(wú)氧代謝水平增強(qiáng)。脅迫12 h后，D0組和D8.25組肝胰腺中乳酸含量呈下降趨勢(shì)，而D33組對(duì)蝦肝胰腺乳酸含量依然處于較高水平。由此推測(cè)，相比于其它各組，D33組對(duì)蝦無(wú)氧代謝持續(xù)供能的能力更強(qiáng)。各組對(duì)蝦血淋巴中乳酸含量在6 h時(shí)急劇下降，然后趨于平穩(wěn)，這可能是血淋巴中的乳酸被轉(zhuǎn)移到肝胰腺中進(jìn)行代謝的原因。

甘油三酯與總膽固醇的含量變化可以反映出機(jī)體脂類(lèi)代謝水平，并且甘油三酯的含量能夠反映機(jī)體利用儲(chǔ)存脂肪的能力[26-27]，本實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，飼喂鉤蝦粉降低了對(duì)蝦血淋巴中甘油三酯和總膽固醇含量，表明飼喂鉤蝦粉影響了對(duì)蝦的脂肪代謝水平。已有研究表明，水產(chǎn)動(dòng)物攝入食物的脂質(zhì)含量會(huì)影響機(jī)體脂質(zhì)的含量，機(jī)體脂質(zhì)含量與日糧脂質(zhì)水平呈正相關(guān)[28-29]。并且，蝦青素會(huì)減少生物體內(nèi)脂肪沉積[30]。因此，飼喂鉤蝦粉影響對(duì)蝦的脂肪代謝水平，可能是鉤蝦粉配合飼料中脂質(zhì)含量較低以及鉤蝦粉中富含蝦青素所引起的。

3.3 飼喂鉤蝦粉對(duì)對(duì)蝦肝胰腺中呼吸代謝酶的影響

己糖激酶和磷酸果糖激酶是糖酵解途徑中的兩種關(guān)鍵酶，其活性的變化對(duì)維持機(jī)體血糖水平以及糖酵解速率具有重要作用[31-33]。在脅迫0～12 h時(shí)，各組對(duì)蝦肝胰腺中己糖激酶活性以及磷酸果糖激酶活性的上升說(shuō)明在脅迫前期對(duì)蝦肝胰腺中糖酵解水平增強(qiáng)，而在脅迫24 h之后，己糖激酶活性以及磷酸果糖激酶活性緩慢下降可能是因?yàn)閷?duì)蝦適應(yīng)了環(huán)境變化，這與郭彪等發(fā)現(xiàn)溫度突變對(duì)對(duì)蝦糖酵解途徑關(guān)鍵酶的影響相似[34]。在無(wú)氧或者低氧環(huán)境下，糖酵解是對(duì)蝦獲取能量的主要方式之一[35-36]，低鹽度下凡納濱對(duì)蝦的耗氧率上升[37]，機(jī)體會(huì)出現(xiàn)供氧不足的情況[38]。因此，飼喂鉤蝦粉增強(qiáng)了凡納濱對(duì)蝦低鹽度脅迫下的糖酵解水平，這有利于對(duì)蝦更好地適應(yīng)低鹽脅迫。

乳酸脫氫酶是葡萄糖無(wú)氧代謝過(guò)程中的關(guān)鍵酶[39]，可以催化丙酮酸和乳酸之間的相互轉(zhuǎn)化[40]，其活性的大小可以在一定程度上反映機(jī)體無(wú)氧代謝水平的高低[41]。本研究中，飼喂鉤蝦粉的對(duì)蝦肝胰腺中乳酸脫氫酶活性在脅迫6 h急劇上升，在脅迫6 h之后緩慢下降，但顯著高于D0組。因此，以上研究結(jié)果表明飼喂鉤蝦粉可以增強(qiáng)對(duì)蝦低鹽度脅迫下無(wú)氧代謝水平，尤其在脅迫前期，從而為對(duì)蝦提供更多能量以應(yīng)對(duì)脅迫，這與糖酵解相關(guān)酶的研究結(jié)果一致。

琥珀酸脫氫酶是氧化磷酸化與電子傳遞之間的紐帶之一，其活性可以反映機(jī)體的有氧代謝水平[42]。本研究中，對(duì)蝦肝胰腺中琥珀酸脫氫酶活性呈現(xiàn)緩慢上升趨勢(shì)，在192 h時(shí)達(dá)到最高，但是各組之間差異不顯著。以上研究結(jié)果表明，隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)蝦肝胰腺中有氧代謝水平雖然不斷提高，但是有氧代謝水平的高低沒(méi)有顯著影響低鹽脅迫下對(duì)蝦的成活率。

3.4 對(duì)蝦鰓中離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶的變化

Na+/K+-ATP酶參與對(duì)蝦滲透壓的調(diào)節(jié)，在控制細(xì)胞體積、維持化學(xué)梯度方面起到重要作用[43]。許多研究已經(jīng)證明在低鹽度脅迫環(huán)境下，凡納濱對(duì)蝦鰓中Na+/K+-ATP酶活性會(huì)顯著升高[44]。本研究中，各組對(duì)蝦鰓中Na+/K+-ATP酶活性均在6 h內(nèi)急速上升，然后維持在一個(gè)較高的水平，但各組之間差異不顯著。對(duì)蝦從高滲環(huán)境中轉(zhuǎn)移到低滲環(huán)境中時(shí)，Na+/K+-ATP酶活性的急速上升可以有效的調(diào)節(jié)對(duì)蝦機(jī)體滲透壓，但本研究結(jié)果提示，Na+/K+-ATP酶的滲透調(diào)節(jié)作用不是影響低鹽脅迫下對(duì)蝦成活率的關(guān)鍵調(diào)控途徑。

4 結(jié)論

飼喂鉤蝦粉能夠顯著提高對(duì)蝦抗低鹽度脅迫能力，并且影響了對(duì)蝦機(jī)體代謝，具體表現(xiàn)為降低了脂肪代謝水平，而增強(qiáng)了無(wú)氧代謝水平。因此，飼喂鉤蝦粉對(duì)對(duì)蝦代謝的影響可能是其提高對(duì)蝦抗低鹽度脅迫能力的原因之一。