劉笑彤，胡曉天，周詡棟，李 震，閆雪潔△

(1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250355； 2. 煙臺(tái)市中醫(yī)醫(yī)院，山東 煙臺(tái) 264000)

補(bǔ)中益氣湯出自李東垣《脾胃論》，功能益氣健脾、升陽(yáng)舉陷，益氣健脾效果顯著，對(duì)于四肢無(wú)力、困倦少食、飲食乏味等消化道癥狀，有較好的治療效果。本方治證系因飲食勞倦、損傷脾胃以致脾胃氣虛所致。方中以黃芪為君藥，臣以人參，佐白術(shù)以益氣健脾，助脾運(yùn)化，以資氣血生化之源?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，給大鼠注射化療藥物順鉑后所產(chǎn)生的異食癖行為，可以用來(lái)模擬建立化療性消化道不良反應(yīng)的大鼠模型[1]。

化療是當(dāng)今治療腫瘤疾病不可或缺的一種方法，是一把雙刃劍，具有毒性的化療藥物在抑制惡性腫瘤細(xì)胞增殖、擴(kuò)散的同時(shí)，也在不同程度上損害了正常的組織細(xì)胞，尤其是生長(zhǎng)活躍的胃腸道黏膜上皮細(xì)胞，從而出現(xiàn)嚴(yán)重的消化道不良反應(yīng)，如惡心嘔吐等[2]。如何避免或緩解化療過(guò)程中引起的消化道不良反應(yīng)，成為當(dāng)下亟待解決的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察補(bǔ)中益氣湯對(duì)于化療性消化道不良反應(yīng)的防治效果，并探討其防治作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

根據(jù)《方劑學(xué)》新世紀(jì)版中規(guī)定的補(bǔ)中益氣湯用藥劑量 (黃芪15 g，炙甘草15 g，人參15 g，當(dāng)歸10 g，橘皮6 g，升麻6 g，柴胡12 g，白術(shù)10 g)，以臨床常用劑量并通過(guò)“人和動(dòng)物之間按體表面積折算的等效劑量比值表”計(jì)算出大鼠等效劑量, 并分別設(shè)低、中、高劑量, 即1.6 g/kg、3.2 g/kg、6.4 g/kg。湯劑煎至200 ml，中藥由山東中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑室提供。順鉑(江蘇豪森藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字H20040813 20 mg/支)、鹽酸昂丹司瓊(濟(jì)南永寧制藥股份有限公司生產(chǎn) 國(guó)藥準(zhǔn)字H20064864 8mg4mL/支)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

大鼠生長(zhǎng)抑素(SST)酶聯(lián)免疫試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)L140312253)、大鼠血管活性腸肽(VIP)檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)L131008089),購(gòu)于武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司。大鼠胃動(dòng)素(MTL)酶聯(lián)免疫試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)U11133087)、大鼠胃泌素(Castrin)酶聯(lián)免疫試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)T30133086),購(gòu)于武漢華美生物工程有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

12周齡雄性Wistar大鼠56只,體質(zhì)量250±20 g, 由山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(動(dòng)物合格證編號(hào)SCXK 20160002)，飼養(yǎng)于山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房恒溫 (23±1 ℃)恒濕(50±5%)飼養(yǎng)室，自由進(jìn)食和飲水。

1.4 實(shí)驗(yàn)器材

臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(湘儀離心機(jī)儀器有限公司)；KL-II型生物組織自動(dòng)脫水機(jī)、切片機(jī)、攤片烤片機(jī)，自動(dòng)包埋機(jī)(湖北康龍電子科技有限責(zé)任公司)；DHP-420型電熱恒溫培養(yǎng)箱(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)；Spectra M5型多功能酶標(biāo)儀(美國(guó) Molecular Devices)。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 造模方法 將56只大鼠隨機(jī)分為7組，每組8只，分別為空白對(duì)照組、補(bǔ)中益氣湯正常對(duì)照組、順鉑模型組、昂丹司瓊陽(yáng)性對(duì)照組、補(bǔ)中益氣湯低劑量組、補(bǔ)中益氣湯中劑量組、補(bǔ)中益氣湯高劑量組。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,放入與飼料形狀相似的高嶺土顆粒, 使大鼠適應(yīng)其存在5 d。造模當(dāng)天8∶00, 空白對(duì)照組和補(bǔ)中益氣湯正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水, 其余各組均腹腔注射順鉑6 mg/kg進(jìn)行造模,注射容積均為10 ml/kg。注射順鉑后1 d,模型組大鼠攝食高嶺土量明顯增加，說(shuō)明成功復(fù)制了大鼠急性異食癖模型。

1.5.2 給藥方法 從造模當(dāng)天開(kāi)始,各組分別灌胃生理鹽水、補(bǔ)中益氣湯1.6 g/kg、生理鹽水、順鉑模型組、昂丹司瓊1.3 mg/kg、補(bǔ)中益氣湯1.6 g/kg、補(bǔ)中益氣湯3.2 g/kg、補(bǔ)中益氣湯6.4 g/kg, 注射容積均為10 ml/kg。每天開(kāi)始在固定時(shí)間點(diǎn)(早8∶00)，觀察并記錄大鼠高嶺土消耗量，直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.5.3 實(shí)驗(yàn)取材 采用腹腔注射40 mg/kg戊巴比妥鈉方法麻醉大鼠,下腔靜脈取血靜置30 min后，4 ℃ 3000 r/min,離心15 min取血清,按照酶聯(lián)免疫檢測(cè)說(shuō)明書檢測(cè)各種胃腸激素水平。腹部解剖，結(jié)扎胃賁門和幽門，摘除整個(gè)胃并剪取回腸約2 cm。

1.5.4 組織染色 將剪取的回腸放入10%中性甲醛溶液室溫固定48 h，按照常規(guī)HE染色步驟制作光鏡標(biāo)本，觀察組織病理學(xué)變化[3]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 補(bǔ)中益氣湯對(duì)化療性大鼠攝食高嶺土量的影響

表1顯示，注射順鉑后1 d,模型組大鼠攝食高嶺土量明顯增加，說(shuō)明成功復(fù)制了大鼠急性異食癖模型；空白對(duì)照組和補(bǔ)中益氣湯正常對(duì)照組大鼠攝食高嶺土量無(wú)差異，說(shuō)明補(bǔ)中益氣湯對(duì)正常大鼠攝食高嶺土量無(wú)影響；昂丹司瓊陽(yáng)性對(duì)照組、補(bǔ)中益氣湯低劑量組、補(bǔ)中益氣湯中劑量組、補(bǔ)中益氣湯高劑量組大鼠在造模后3 d攝食高嶺土量顯著低于順鉑模型組(P<0.01),且各組之間大鼠攝食高嶺土量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明補(bǔ)中益氣湯和昂丹司瓊對(duì)于防治大鼠化療性消化道不良反應(yīng)均具有良好作用，且作用強(qiáng)度相同，即補(bǔ)中益氣湯低、中、高劑量在防治大鼠化療性消化道不良反應(yīng)方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 補(bǔ)中益氣湯對(duì)化療性大鼠胃腸組織病理形態(tài)學(xué)的影響

大體肉眼觀察空白對(duì)照組和補(bǔ)中益氣湯空白對(duì)照組，胃腸表面黏膜光滑呈現(xiàn)正常狀態(tài)；順鉑模型組大鼠胃體膨脹，胃腸壁變薄，黏膜可見(jiàn)充血、水腫；昂丹司瓊組、補(bǔ)中益氣湯低劑量組、中劑量和高劑量組可見(jiàn)少量胃腸黏膜充血、水腫，肉眼觀察變化較小，接近正常組織。

表1 補(bǔ)中益氣湯對(duì)化療性異食癖大鼠高嶺土攝入量的影響

注：與空白對(duì)照組比較：▲▲P<0.01；與順鉑模型組比較：**P<0.01

光鏡下觀察空白對(duì)照組和補(bǔ)中益氣湯空白對(duì)照組胃腸壁各層次結(jié)構(gòu)清楚，黏膜上皮及腺體正常，未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。順鉑模型組病理變化較大，胃腸壁各層次損傷嚴(yán)重，胃腸黏膜萎縮變薄、皺襞變淺或消失，可見(jiàn)大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。昂丹司瓊組、補(bǔ)中益氣湯低劑量、中劑量和高劑量組形態(tài)基本接近正常組織，病理?yè)p傷較輕。

通過(guò)觀察、比較各組胃腸黏膜病理切片可知，小說(shuō)明補(bǔ)中益氣湯和昂丹司瓊對(duì)于防治大鼠化療性消化道不良反應(yīng)均具有良好作用，且作用強(qiáng)度相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

A.空白對(duì)照組;B.補(bǔ)中益氣湯正常對(duì)照組;C.順鉑模型組;D.昂丹司瓊組；E.補(bǔ)中益氣湯低劑量組;F.補(bǔ)中益氣湯中劑量組;G.補(bǔ)中益氣湯高劑量組圖1 各組大鼠胃組織HE切片病理形態(tài)觀察比較(×100)

A.空白對(duì)照組;B.補(bǔ)中益氣湯正常對(duì)照組;C.順鉑模型組;D.昂丹司瓊組；E.補(bǔ)中益氣湯低劑量組;F.補(bǔ)中益氣湯中劑量組;G.補(bǔ)中益氣湯高劑量組圖2 各組大鼠回腸組織HE切片病理形態(tài)觀察比較(×100)

2.3 補(bǔ)中益氣湯對(duì)化療性大鼠血清胃腸激素的影響

表2顯示，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后取大鼠血清樣本做檢測(cè)，順鉑模型組大鼠血清中胃泌素、胃動(dòng)素水平較空白組降低(P<0.05)，生長(zhǎng)抑素、血管活性腸肽水平較空白組升高(P<0.05)，昂丹司瓊陽(yáng)性對(duì)照組、補(bǔ)中益氣湯低劑量組、補(bǔ)中益氣湯中劑量組、補(bǔ)中益氣湯高劑量組大鼠血清中胃泌素、胃動(dòng)素水平明顯高于順鉑模型組(P<0.05)，生長(zhǎng)抑素、血管活性腸肽水平明顯低于順鉑模型組(P<0.05)。昂丹司瓊組與補(bǔ)中益氣湯不同劑量組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

中藥補(bǔ)中益氣湯具有補(bǔ)中益氣、升陽(yáng)舉陷之功效。原方主治脾虛氣陷證，患者飲食勞倦、損傷脾胃之氣，以致脾胃納運(yùn)乏力，癥見(jiàn)飲食減少、少氣懶言、大便稀溏等。癌癥患者久病體虛、中氣不足，化療藥屬攻伐之劑，久服易導(dǎo)致脾胃受損[3]。胃主受納水谷，胃氣虛損可見(jiàn)反復(fù)嘔吐、惡心、噯氣。脾主運(yùn)化、脾氣不足患者水谷不化，甚者食入則嘔。方中黃芪味甘微溫，入脾肺經(jīng)，補(bǔ)中益氣，升陽(yáng)固表，故為君藥。配伍人參、炙甘草、白術(shù)補(bǔ)氣健脾為臣藥。當(dāng)歸養(yǎng)血和營(yíng)，協(xié)人參、黃芪補(bǔ)氣養(yǎng)血；陳皮理氣和胃，使諸藥補(bǔ)而不滯共為佐藥。少量升麻、柴胡升陽(yáng)舉陷，協(xié)助君藥以升提下陷之中氣共為佐使，炙甘草調(diào)和諸藥為使藥。補(bǔ)中益氣湯方中的人參和黃芪具有補(bǔ)中益氣、生津養(yǎng)血的功效。 現(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí), 其具有抗氧化、抗毒、增強(qiáng)免疫等多重作用[4]。

表2 補(bǔ)中益氣湯對(duì)化療性大鼠血清胃腸激素影響比較

注：與空白對(duì)照組比較：▲P<0.05；與順鉑模型組比較：*P<0.05

有實(shí)驗(yàn)表明，中藥補(bǔ)中益氣湯在保護(hù)消化功能、調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力方面具有良好療效[5]，提示在臨床使用抗腫瘤化療藥物時(shí)配合應(yīng)用本方，可增強(qiáng)免疫，預(yù)防老化，提高療效，降低化療藥物毒副反應(yīng)[6-8]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用補(bǔ)中益氣湯治療異食癖模型大鼠，通過(guò)比較不同劑量補(bǔ)中益氣湯發(fā)揮的治療作用，以探討補(bǔ)中益氣湯對(duì)化療性大鼠消化道不良反應(yīng)的防治作用及其作用機(jī)制。通過(guò)各組化療性大鼠攝食高嶺土量對(duì)比、胃腸黏膜肉眼大體觀察、胃腸黏膜組織病理學(xué)觀察以及各組化療性大鼠血清胃腸激素的比較，可知補(bǔ)中益氣湯對(duì)化療性大鼠消化道不良反應(yīng)表現(xiàn)出較好的防治效果，其效果與陽(yáng)性對(duì)照昂丹司瓊組類似。

胃腸激素在調(diào)節(jié)胃腸道的分泌、運(yùn)動(dòng)、營(yíng)養(yǎng)及防御活動(dòng)等方面具有至關(guān)重要的作用[9-10]，胃腸激素分泌功能紊亂與化療性胃腸道不良反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。胃泌素是重要的胃腸激素之一，能促進(jìn)胃酸和胃蛋白酶的分泌，改善胃黏膜的血供與營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)胃黏膜和壁細(xì)胞的增殖，促進(jìn)胃部蠕動(dòng)。胃動(dòng)素能夠啟動(dòng)胃腸移行性肌電復(fù)合波(MMC)Ⅲ相，并能夠促進(jìn)食欲，增加攝食量[11]。生長(zhǎng)抑素作為重要的抑制性調(diào)節(jié)激素，能夠抑制胃泌素、胃動(dòng)素、縮膽囊素、促胰液素等激素的釋放，還能使胰腺、胃、小腸和膽囊的分泌大大減少，使酶活性降低，保護(hù)胰腺細(xì)胞。血管活性腸肽既是一種胃腸激素，又是一種存在于中樞神經(jīng)和腸神經(jīng)系統(tǒng)中的抑制性非腎上腺素非膽堿能(NANC)神經(jīng)遞質(zhì)，能夠抑制胃酸和胃蛋白酶分泌進(jìn)而抑制胃腸運(yùn)動(dòng)。毒性化療藥物引起胃腸道損傷，導(dǎo)致胃泌素、胃動(dòng)素分泌減少，生長(zhǎng)抑素、血管活性腸肽分泌增多，抑制胃腸道分泌及運(yùn)動(dòng)功能，出現(xiàn)惡心、嘔吐、腹脹、食欲減退等胃腸道不良反應(yīng)[12]。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，補(bǔ)中益氣湯在抑制大鼠化療性消化道不良反應(yīng)的同時(shí)，可以改善化療引起的胃腸激素分泌紊亂，由此說(shuō)明補(bǔ)中益氣湯對(duì)于防治化療性胃腸道不良反應(yīng)的作用機(jī)制與改善胃腸激素紊亂有關(guān)，可以緩解化療所引起的惡心、嘔吐、腹脹、食欲減退等不良癥狀。補(bǔ)中益氣湯作為中醫(yī)學(xué)經(jīng)典用方，在防治胃腸道疾病中發(fā)揮著重要作用，將辨病與辨證相結(jié)合，能夠有效改善胃腸蠕動(dòng)，減輕化療后副作用。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果為化療性胃腸道不良反應(yīng)的遣方施治提供了強(qiáng)有力的依據(jù)。