王丹丹

摘要：目的 ?使用UPLC測定健脾益肺口服液中白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅲ的含量。方法 ?采用Waters H-class 超高效液相色譜儀測定白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅲ的含量，色譜柱：Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫：30℃，進樣量：2 μl，檢測波長：220 nm，流動相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脫，流速：0.2 ml/min。結果 ?白術內(nèi)酯Ⅰ線性方程為y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），線性范圍2～160 μg/ml;白術內(nèi)酯Ⅲ的線性方程為y=0.0786x（r=0.9998），線性范圍3～140 μg/ml;白術內(nèi)酯Ⅰ及白術內(nèi)酯Ⅲ的精密度、重復性、穩(wěn)定性、加樣回收率均符合要求。結論 ?初步建立了健脾益肺口服液中白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅲ含量測定的高效、迅速的檢測方法，為下一步質量標準的提高奠定基礎。

關鍵詞：UPLC;白術內(nèi)酯Ⅰ;白術內(nèi)酯Ⅲ

中圖分類號：R284.1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.053

文章編號：1006-1959（2019）21-0159-03

Abstract：Objective ?To determine the content of atractylenolide I and atractylenolide III in Jianpi Yifei Oral Liquid by UPLC. Methods ?The contents of atractylenolide I and atractylenolide III were determined by Waters H-class ultra performance liquid chromatography. Column： Waters BEH C18 （50 mm × 2.1 mm， 1.7 μm）， column temperature： 30°C， injection Amount： 2 μl， detection wavelength： 220 nm， mobile phase： acetonitrile （A）-water （B）， gradient elution， flow rate： 0.2 ml/min. Results ?The linear equation of atractylenolide I was y=0.0528x+0.0241 （r=0.9998）， the linear range was 2～160 μg/ml; the linear equation of atractyl lactone III was y=0.0786x （r=0.9998）， linear range 3 ～140 μg/ml; the precision， repeatability， stability and recovery rate of atractylenolide I and atractylenolide III meet the requirements. Conclusion ?The high-efficiency and rapid detection method for the determination of atractylenolide I and atractylenolide III in Jianpi Yifei Oral Liquid was established， which laid a foundation for the improvement of quality standards.

Key words：UPLC;Atractylenolide I;Atractylenolide III

健脾益肺口服液為我院的自制院內(nèi)制劑，主要功效為益氣，固表，止汗，健脾益肺。臨床上用于表虛不固，咳喘，自汗惡風，脾虛便溏，或體虛易感風邪者;癥見小兒哮喘、體質虛弱易感者，脾肺氣虛證表現(xiàn)為慢性阻塞性肺病。組方主要藥物包括有黃芪、黨參、白術、山藥、防風、扁豆、雞內(nèi)金等。白術在方中是主要組成藥物之一，是為臣藥，來源于菊科植物白術的干燥根莖[1]，是浙江的道地藥材，使用歷史悠久，全國均有栽培。目前在用的炮制品主要有土炒白術和麩炒白術，具有健脾益氣、燥濕利水的作用，健脾益肺口服液中選用麩炒白術，取白術經(jīng)麥麩炮制之后更能增強白術的健脾作用，同時對君藥能起到協(xié)同增效的作用，并增強黃芪、黨參補脾肺之氣的作用?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，白術中多含揮發(fā)油，其主要化學成分為白術內(nèi)酯類成分、多糖、苷類等[2]，但其性質在常溫下并不穩(wěn)定，因此選擇測定性質相對穩(wěn)定且含量較高白術內(nèi)酯類成分作為白術的指標性檢測成分[3]。本文主要使用UPLC測定健脾益肺口服液中白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅲ的含量，現(xiàn)報道如下。

1資料與方法

1.1儀器 ?Waters H-class超高效液相色譜儀;水蒸氣蒸餾裝置（自制）;高速萬能粉碎機（常州毅康藥化設備有限公司）;超純水系統(tǒng)（edi，北京豐裕華環(huán)環(huán)保科技有限公司）。

1.2藥品 ?白術內(nèi)酯Ⅰ（青島捷士康生物科技有限公司，批號：185266，純度>98%），白術內(nèi)酯Ⅲ（青島捷士康生物科技有限公司，批號：173652，純度>98%）;乙腈、甲醇（TEDIA色譜純）;健脾益肺口服液（本院自制，批號：20180712;20181103;20190320），本品為棕褐色澄明的液體，味微苦、澀。相對密度、pH值、裝量差異均符合《中華人民共和國藥典》2015年版的規(guī)定。

1.3色譜條件 ?色譜柱：Waters BEH C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm），柱溫：30℃，進樣量：2 μl;檢測波長：220 nm，流動相：（A）-水（B），梯度洗脫：0～2.5 min，40%B～20%B;2.5～4min，20%B～15%B;4～8 min，15%B～10%B;8～14 min，0%B，流速：0.2 ml/min，見圖1。

1.4混合對照品溶液制備 ?精密稱定對照品適量，制成1 m分別含白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅲ 0.113 mg、0.162 mg的混合溶液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，搖勻放入冰箱中冷藏備用。

1.5供試品溶液制備 ?取不同3個批次健脾益肺口服液生產(chǎn)中采用超臨界萃取中得到揮發(fā)油25 mg，分別加入25 ml容量瓶中，各加甲醇定容為1 mg/ml的溶液，避光保存，按批號編號放入冰箱中冷藏備用。

2結果

2.1線性關系考察 ?按4項下有關方法制備，并按色譜條件分析，并記錄有關色譜峰面積，進行線性回歸。白術內(nèi)酯Ⅰ線性方程為y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），線性范圍2～160 μg/ml;白術內(nèi)酯Ⅲ的線性方程為y=0.0786x（r=0.9998），線性范圍3～140 μg/ml，表明兩者在線性范圍內(nèi)線性關系良好。

2.2精密度考察 ?選取同一批次供試品（批號：20181103），按5項下有關方法制備溶液，并按色譜分析條件連續(xù)進樣6次，同時記錄下色譜圖，并以2號色譜峰作為參照峰，計算各主要色譜峰相對峰面積和相對保留時間的RSD值均<2.3%，則表明該試驗方法精密度較好，符合相關實驗要求。

2.3重復性考察 ?選取同一批次供試品（批號：20181103），按5項下有關方法同時制備了6份供試品溶液備用，并按色譜分析的條件按順序進樣檢測，同時記錄下色譜圖，并以2號色譜峰為參照峰，計算各主要色譜峰相對峰面積和相對保留時間的RSD值均<2.1%，則表明該方法重現(xiàn)性較好，符合相關實驗要求。

2.4穩(wěn)定性考察 ?選取同一批次供試品（批號：20181103），按5項下方法制備出供試品溶液，并按色譜分析條件分別于0、2、4、8、12、18、24 h進樣檢測，同時記錄下色譜圖，以2號色譜峰為參照峰，計算各主要色譜峰相對峰面積和相對保留時間的RSD均<2.1%，則表明該批次供試品溶液中各種成分在24 h內(nèi)穩(wěn)定，符合相關實驗要求。

2.5加樣回收率考察 ?選取同一批次供試品（批號：20181103），置于25 ml錐形瓶中，加入白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅲ的對照品各適量，按5項下方法制備樣品，并注入色譜儀，按項下色譜分析條件按順序檢測，計算加樣回收率，計算結果顯示平均加樣回收率均在101.23%～101.54%，RSD<4%，表明此方法可行，能用于健脾益肺口服液中白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅲ的含量測定，見表1。

2.6含量測定結果 ?取3個批次的健脾益肺口服液，按方法和色譜測定含量，結果見表2。

3討論

自古以來，中藥在我國種植歷史悠久，資源豐富，物種多樣，并且使用了上千年，在實踐中發(fā)現(xiàn)其毒副作用小，還可以增強和調(diào)節(jié)人體的免疫功能。特別是中國傳統(tǒng)的中醫(yī)藥理論的指導下的中藥，一直作為篩選開發(fā)新藥的重要來源，扮演著特別重要的角色。白術作為中藥處方中常用藥物，具有減慢小腸細胞的蠕動、抗衰老、抗病毒、抗炎鎮(zhèn)痛、利尿、調(diào)節(jié)免疫功能、明顯抑制腫瘤細胞增殖、對老化小鼠的認識能力有明顯提高等多種藥理作用[4-7]，臨床上應用廣泛。

本文通過對健脾益肺口服液中白術內(nèi)酯Ⅰ、白術內(nèi)酯Ⅲ含量測定方法的建立，可以作為方中白術藥材的質控指標，同時采用UPLC的方法，采用乙腈-水梯度洗脫的方法，檢測波長220 nm，白術內(nèi)酯Ⅰ線性方程為y=0.0528x+0.0241（r=0.9998），線性范圍2～160 μg/ml;白術內(nèi)酯Ⅲ的線性方程為y=0.0786x（r=0.9998），線性范圍3～140 μg/ml，在線性范圍內(nèi)線性關系良好，同時精密度、重復性、穩(wěn)定性、加樣回收率均符合要求，說明該色譜條件穩(wěn)定可靠、檢測時間迅速而且效率高，為揮發(fā)油類的檢測提供了新的思路和方法，為下一步醫(yī)院制劑的工藝提高提供一定的參考，同時也保證了臨床用藥安全有效。

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收稿日期：2019-7-27;修回日期：2019-8-5

編輯/錢洪飛