鐘文靜 戰(zhàn)鵬 朱曉峰

摘要：目的 ?探討CD133及SLC7A11在非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織及鄰近正常肺組織中的表達(dá)及臨床意義。方法 ?選取2015年1月～2019年7月我院經(jīng)病理科確診的NSCLC組織標(biāo)本42例，并選取病理證實(shí)無癌細(xì)胞浸潤的鄰近正常肺組織標(biāo)本（距癌組織>5 cm）30例，比較NSCLC組織和鄰近正常肺組織中CD133和SLC7A11陽性率表達(dá)、CD133及SLC7A11陽性表達(dá)與臨床病理的關(guān)系及其在NSCLC組織中共表達(dá)關(guān)系。結(jié)果 ?NSCLC組織中CD133、SLC7A11陽性率為57.14%、64.29%，高于鄰近正常肺組織的10.00%、6.67%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期癌組織中CD133、SLC7A11陽性表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;不同性別、年齡、組織學(xué)類型癌組織中的CD133、SLC7A11陽性表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。24例CD133陽性表達(dá)中，有21例SLC7A11陽性表達(dá);18例CD133陰性表達(dá)中，有12例SLC7A11陰性表達(dá)，CD133、SLC7A11在NSCLC中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.532，P<0.05）。結(jié)論 ?CD133、SLC7A11在NSCLC中的高表達(dá)與癌組織的惡性行為及患者較差預(yù)后密切相關(guān)，對(duì)NSCLC早期診斷和靶向治療具有重要意義。

關(guān)鍵詞：非小細(xì)胞肺癌;CD133;SLC7A11;正常肺組織

中圖分類號(hào)：R734.2 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.028

文章編號(hào)：1006-1959（2019）21-0092-03

Abstract：Objective ?To investigate the expression and clinical significance of CD133 and SLC7A11 in non-small cell lung cancer （NSCLC） tissues and adjacent normal lung tissues. Methods ?A total of 42 cases of NSCLC tissue specimens confirmed by pathology in our hospital from January 2015 to July 2019 were selected， and 30 cases of adjacent normal lung tissue specimens （>5 cm from cancer tissue） confirmed by pathology were selected. The positive expression rates of CD133 and SLC7A11 in NSCLC tissues and adjacent normal lung tissues， the relationship between CD133 and SLC7A11 positive expression and clinicopathology and their co-expression in NSCLC tissues were compared. Results ?The positive rate of CD133 and SLC7A11 in NSCLC tissues was 57.14% and 64.29%， which was higher than 10.00% and 6.67% in adjacent normal lung tissues，the difference was statistically significant （P<0.05）. The difference of CD133 and SLC7A11 expression in different degrees of differentiation， lymph node metastasis and different TNM staging were statistically significant （P<0.05）. The positive expressions of CD133 and SLC7A11 in different genders， ages and histological types were different. There were no statistical significance （P>0.05）. Of the 24 CD133-positive expressions， 21 were positive for SLC7A11. Among the 18 CD133-negative expressions， 12 were negative for SLC7A11. Spearman correlation analysis showed that CD133 and SLC7A11 were positively correlated in NSCLC （r=0.532， P<0.05）. Conclusion ?The high expression of CD133 and SLC7A11 in NSCLC is closely related to the malignant behavior of cancer tissues and the poor prognosis of patients. It is of great significance for early diagnosis and targeted therapy of NSCLC.

Key words：Non-small cell lung cancer;CD133;SLC7A11;Normal lung tissue

肺癌（lung cancer）是最常見的惡性腫瘤，其中非小細(xì)胞肺癌（non-small-cell lung cancer， ? ?NSCLC）占75%～80%，也是導(dǎo)致癌癥相關(guān)死亡的主要原因，患者5年生存率約為13%～15%[1]。肺癌居我國惡性腫瘤發(fā)病首位，發(fā)病率約78.1萬/年，且位居我國惡性腫瘤死亡首位，也分別是男女性惡性腫瘤死亡的首位疾病[2]。晚期肺癌的診斷是肺癌高死亡率的決定因素。因此，早期發(fā)現(xiàn)肺癌對(duì)于降低肺癌高死亡率具有重要意義[1]。但目前肺癌診斷多已處于晚期，早期階段常常是偶然發(fā)現(xiàn)，且耐藥及復(fù)發(fā)一直是臨床治療過程中面臨的難題。CD133是一種由865個(gè)氨基酸殘基組成的、分子量約97 kDa的5次跨膜糖蛋白，也稱人Prominin-1，為腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記最常用之蛋白一;SLC7A11（xCT）是一種與單跨膜蛋白SLC3A2共同組成不依賴鈉的胱氨酸和谷氨酸的電中性轉(zhuǎn)運(yùn)體系統(tǒng)Xc的，N-和C-末端均位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的12通道跨膜蛋白;兩者均廣泛存在于多種惡性腫瘤中[3-5]。本研究主要探討CD133與SLC7A11在NSCLC及鄰近正常肺組織中的表達(dá)及相關(guān)性，并分析兩因子與患者臨床病理特征的聯(lián)系，進(jìn)一步闡明其與NSCLC發(fā)生發(fā)展等的關(guān)系及臨床意義。

1材料和方法

1.1材料 ?選取2015年1月～2019年7月佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院心胸外科經(jīng)病理科確診的NSCLC組織標(biāo)本42例，其中腺癌23例，鱗癌19例。并選取病理證實(shí)無癌細(xì)胞浸潤的鄰近正常肺組織標(biāo)本（距癌組織>5 cm）30例。

1.2試劑 ?兔抗CD133、SLC7A11多克隆抗體均購自廈門研科生物技術(shù)有限公司，分別以1∶200及1∶40的比例進(jìn)行稀釋實(shí)驗(yàn);Pv-6000（小鼠/兔聚合物法檢測(cè)系統(tǒng)）、ZLI-9028（抗體稀釋液）、ZLI-9066（EDTA抗原修復(fù)液 pH8.0）、ZLI-9017（DAB顯色試劑盒）以及ZLI-9022（封閉用羊血清）均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司;余所需試劑及實(shí)驗(yàn)設(shè)備均由我院病理科提供。

1.3方法 ?通過免疫組織化學(xué)染色法，目標(biāo)蠟塊切片4 μm，HE染色后病理確診。切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度濃度（100%、95%、75%）乙醇脫水、抗原修復(fù)（ZLI-9066及高溫高壓熱修復(fù)2 min）、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶（H2O2溶液）、滴加ZLI-9022、添加一抗（CD133、SLC7A11抗體）、滴加Pv-6000、顯色（ZLI-9017）、蘇木素復(fù)染、分化及沖洗返藍(lán)、脫水、透明、封片步驟后閱片。陰性對(duì)照以PBS代替一抗（余步驟相同）。

1.4免疫組化結(jié)果判定 ?CD133和SLC7A11陽性物質(zhì)主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，呈黃色或棕黃色。每張切片除組織邊緣及切片重疊部分不計(jì)外，在400倍光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，分別計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中陽性細(xì)胞數(shù)，取其平均值定義為該切片的陽性細(xì)胞百分比。按照腫瘤陽性細(xì)胞率和著色強(qiáng)度分別進(jìn)行計(jì)分（實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判讀由我院病理科專業(yè)人員行雙盲法操作）：陽性細(xì)胞數(shù)分為<10%計(jì)0分，10%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，>75%計(jì)4分;著色強(qiáng)度分為無色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分。兩項(xiàng)得分相乘結(jié)果分為<3分為陰性，=3分為陽性，>3分為強(qiáng)陽性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 ?采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用？字2檢驗(yàn)。采用Spearman相關(guān)性分析CD133、SLC7A11在NSCLC組織中共表達(dá)關(guān)系，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 CD133和SLC7A11在癌標(biāo)本與正常組織標(biāo)本中的表達(dá)比較 ?NSCLC組織中CD133、SLC7A11陽性率高于鄰近正常肺組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 CD133及SLC7A11表達(dá)與臨床病理的關(guān)系 ?不同分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期癌組織中CD133、SLC7A11陽性表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;不同性別、年齡、組織學(xué)類型癌組織中的CD133、SLC7A11陽性表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3 CD133及SLC7A11在NSCLC組織中的共表達(dá) ?24例CD133陽性表達(dá)中，有21例SLC7A11陽性表達(dá);18例CD133陰性表達(dá)中，有12例SLC7A11陰性表達(dá)，見表3。采用Spearman相關(guān)分析，CD133、SLC7A11在NSCLC中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.532，P<0.05）。

3討論

肺癌發(fā)病率是我國增長率最快的惡性腫瘤。目前用于肺癌檢查的方法包括CT、MRI、18F-FDG PET等，但其在診斷肺癌上各自存在一定的局限性[6]，加之耐藥、復(fù)發(fā)等治療問題的存在，使肺癌死亡率居高不下。因此，需要尋找新的肺癌診斷及治療方式。

腫瘤干細(xì)胞（tumor stem cells，TSCs）理論學(xué)說認(rèn)為腫瘤的發(fā)生源自具有自我更新和無限增殖、多向分化及抗放化療等特點(diǎn)的細(xì)胞，這些特性與胚胎干細(xì)胞相似，被稱為腫瘤干細(xì)胞[3]。TSCs特性使傳統(tǒng)放化療等療效不佳，易復(fù)發(fā)，考慮是由于殘存的腫瘤干細(xì)胞繼續(xù)增殖分化所致。雖然CD133糖蛋白具體的生物學(xué)功能尚不確定，但其被認(rèn)為是NSCLC和小細(xì)胞肺癌中的TSCs標(biāo)記物[7]。有文獻(xiàn)報(bào)道[8]，CD133癌細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的致瘤性、抗化療性，其高表達(dá)和腫瘤組織血管生成之間有相關(guān)性及具有更大的遷移和侵襲性，提示其在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程及治療預(yù)后中起重要作用。而肺癌組織中CD133的表達(dá)可提示TSCs的比例，對(duì)腫瘤預(yù)后有一定的指導(dǎo)意義，使靶向TSCs的治療成為可能[3]。

SLC7A11蛋白促進(jìn)胱氨酸攝取和谷胱甘肽的生物合成，從而保護(hù)機(jī)體免受氧化應(yīng)激和鐵細(xì)胞死亡[4]。系統(tǒng)Xc需要輕鏈和重鏈亞基，以1∶1的交換比率高效地將胞外胱氨酸運(yùn)回胞內(nèi)，同時(shí)將胞內(nèi)谷氨酸運(yùn)出細(xì)胞外，其中輕鏈亞基SLC7A11對(duì)胱氨酸和谷氨酸有高度特異性，主要負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)活性，而重鏈亞基SLC3A2主要作為伴侶蛋白，對(duì)調(diào)節(jié)SLC7A11向質(zhì)膜的轉(zhuǎn)運(yùn)至關(guān)重要[9]。Polewski MD等[4]研究發(fā)現(xiàn)，SLC7A11過表達(dá)膠質(zhì)瘤細(xì)胞是由于GSH水平升高和線粒體呼吸增加，使其對(duì)替莫唑胺的耐化療性增強(qiáng)，且SLC7A11過表達(dá)膠質(zhì)瘤細(xì)胞顯示肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架改變，增強(qiáng)的TSCs樣表型，可能有助于增加化療耐受，提示在多形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中過表達(dá)SLC7A11可能有助于腫瘤進(jìn)展。

本研究結(jié)果顯示，NSCLC組織中CD133、SLC7A11陽性率高于鄰近正常組織（P<0.05），提示CD133、SLC7A11的表達(dá)可能與NSCLC的發(fā)生有關(guān)，CD133、SLC7A11在NSCLC組織中呈高表達(dá)，在鄰近正常組織中呈低表達(dá)。不同分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移、不同TNM分期癌組織中CD133、SLC7A11陽性表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;不同性別、年齡、組織學(xué)類型癌組織中的CD133、SLC7A11陽性表達(dá)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。隨著癌組織的不成熟分化程度、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移以及TNM分期的增加，CD133、SLC7A11蛋白陽性表達(dá)率呈上升趨勢(shì)，提示CD133、SLC7A11在NSCLC惡性行為中可能起到了重要作用，具體的分子生物學(xué)機(jī)制，還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。另外本研究中共24例CD133陽性表達(dá)中，有21例SLC7A11陽性表達(dá);18例CD133陰性表達(dá)中，有12例SLC7A11陰性表達(dá)。采用Spearman相關(guān)分析，CD133、SLC7A11在NSCLC中的表達(dá)呈正相關(guān)（P<0.05），提示CD133、SLC7A11與NSCLC存在某種聯(lián)系，為發(fā)現(xiàn)CD133、SLC7A11在肺腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展等過程中的具體分子生物機(jī)制提供新的參考方向。

綜上所述，NSCLC組織中CD133及SLC7A11蛋白呈高表達(dá)，可能與NSCLC惡性行為及不良預(yù)后密切相關(guān)，對(duì)NSCLC早期診斷和靶向治療具有重要意義。

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收稿日期：2019-7-25;修回日期：2019-8-6

編輯/杜帆