林春男 宋會新 王田友

摘要：目的 ?探討公雞雞冠作為血管瘤體外模型的可行性及經(jīng)平陽霉素局部注射后雞冠的組織病理學(xué)變化。方法 ?取6月齡健康農(nóng)家養(yǎng)雄性雞20只，編號1～20后，隨機抽取編號分為A組和B組，A、B兩組分別作為實驗組及對照組，每組10只。A組向雞冠內(nèi)注射平陽霉素，B組向雞冠內(nèi)注射0.9%的氯化鈉注射液，比較第14天及第28天時兩組雞冠的外觀及鏡檢下變化。結(jié)果A組雞冠與B組雞冠比較，最終雞冠顏色變淺;HE染色光鏡下觀察血管腔變窄，血管壁結(jié)構(gòu)消失，毛血管數(shù)目變少，A組第28天時毛細管數(shù)為（14.40±1.14）條，B組為（57.40±1.51）條，兩組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 ?雞冠血管瘤模型經(jīng)平陽霉素處理后有明顯的外觀及組織學(xué)變化，平陽霉素對治療血管性病變有消退作用。

關(guān)鍵詞：平陽霉素;血管性病變;雞冠模型

中圖分類號：R732.2 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.21.022

文章編號：1006-1959（2019）21-0069-03

Abstract：Objective ?To investigate the feasibility of cock cockscomb as an in vitro model of hemangioma and the histopathological changes of cockscomb after local injection of pingyangmycin. Methods ?Twenty healthy male farm chickens of 6 months old were randomly divided into experimental group （group A） and control group （group B）， with 10 rats in each group. Group A was injected with pingyangmycin into the cockscomb， and group B was injected with 0.9% sodium chloride injection as the control group. The appearance and microscopic changes of the cockscombs of the two groups were compared on the 14th and 28th day.Results ?Comparison of the crowns of group A and group B，finally， the color of the cockscomb became lighter; under the HE staining microscope， the vascular lumen was narrowed， the structure of the vessel wall disappeared， and the number of capillary vessels decreased. The number of capillaries in group A on day 28 was （14.40±1.14）， and that in group B was （57.40±1.51），the difference between the two groups was statistically significant （P<0.05）. Conclusion ?The cholangiocarcinoma model has obvious appearance and histological changes after treatment with pingyangmycin. Pingyangmycin has a regressive effect on the treatment of vascular lesions.

Key words：Pingyangmycin;Vascular disease;Cockscomb model

口腔頜面部血管瘤（oral and maxillofacial hemangioma）是血管良性腫瘤，是軟組織常見的腫瘤之一。我國血管瘤的發(fā)病率為3%～8%，其中口腔頜面部血管瘤約占血管瘤的一半[1]。血管瘤多在嬰幼兒出生時及出生后不久出現(xiàn)，多數(shù)可逐步消退，但存在少部分患者不能自愈。尤其對于體積較大及位于頭頸部等特殊部位的血管瘤，會影響患者的美觀，引起疼痛、潰瘍和出血，還可能壓迫或侵犯重要組織器官，甚至影響生命[2，3]。平陽霉素是一種抗腫瘤藥物，無骨髓抑制及免疫作用，瘤內(nèi)注射可在局部聚集高濃度藥物，對血管內(nèi)皮細胞造成損傷，使瘤體纖維化，從而抑制血管性病變的發(fā)展[4]。本研究采用雞冠作為血管性病變的動物模型，動態(tài)觀察雞冠經(jīng)平陽霉素處理后其血管及組織的病理改變，探討平陽霉素對血管性病變的療效，為進一步的臨床應(yīng)用提供更多的理論參考。

1材料與方法

1.1實驗動物與分組 ?取6月齡雄性農(nóng)家雞20只，隨機分為A組和B組，A、B兩組分別作為實驗組及對照組，每組10只。以雞冠作為此研究的血管瘤模型，要求雞健康無疾病，雞冠飽滿、無病損。實驗方案經(jīng)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院實驗動物倫理委員會審議并批準。

1.2實驗方法

1.2.1給藥方法 ?實驗開始前將平陽霉素8 mg溶于滅菌4 ml 0.9%氯化鈉注射液中備用。A組：平陽霉素溶液1 ml雞冠注射，每7 d注射1次，即首次，第7天，第14天，第21天。B組：每次分別注射與A組對應(yīng)的等劑量的0.9%氯化鈉注射液。常規(guī)碘伏消毒，每次注射后，消毒棉球壓迫注射處1 min，防止液體流出。

1.2.2組織檢查 ?兩組均于開始處理后的第14天、28天進行大體觀察，并在實驗區(qū)域內(nèi)切取1 cm×1 cm大小的組織塊，取材后，10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋切片，常規(guī)HE染色。兩組結(jié)果進行對比，在光學(xué)顯微鏡下分別隨機選5個中倍鏡視野（10×10倍）并拍攝照片，觀組織內(nèi)變化情況，統(tǒng)計真皮內(nèi)毛細血管數(shù)目，計算其平均值。

1.3觀察指標 ?比較兩組在第14天及第28天時大體變化（雞冠外形及顏色）及鏡下的組織學(xué)變化（血管形態(tài)及毛細血管數(shù)目）。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 ?采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)分析軟件進行分析，計數(shù)資料以（x±s）表示，采用t檢驗，當(dāng)P<0.05，表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組雞冠外觀比較 ?A組注射后即刻均表現(xiàn)為雞冠泛白，局部腫脹明顯;第14天時，實驗區(qū)域可見雞冠表面形成淺黑色血痂（圖1A）;第28天時，實驗區(qū)域結(jié)較厚的黃黑色痂，不易脫落，雞冠組織增厚變硬，褪紅明顯（圖1B）;B組雞冠外形及顏色未見明顯變化（圖1C，圖1D）。

2.2兩組雞冠組織HE染色比較 ?各組分別于倒置顯微鏡下觀察。B組經(jīng)動態(tài)觀察可見雞冠組織結(jié)構(gòu)清晰，表皮結(jié)構(gòu)完整，真皮淺層內(nèi)可見大量毛細血管，管腔大小均一，管腔間膠原纖維比較稀疏（圖2）。A組處理后14天可見部分角質(zhì)層破壞，炎性細胞增多，毛細血管較前稀疏，管腔縮小變窄，膠原纖維數(shù)量增多（圖3）。第28天炎性細胞相對減少，表皮組織增厚明顯，毛細血管稀少，管腔狹窄，管腔間纖維組織增生（圖4）。

2.3真皮內(nèi)毛細血管數(shù)目 ?A組隨著觀察周期的變化，毛細血管均數(shù)變化不大，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;第14天、第28天觀察，A組毛細血管數(shù)目少于B組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3討論

雞冠表皮下的血管結(jié)構(gòu)與人體血管瘤病毛細血管早形態(tài)及結(jié)構(gòu)方面存在相似之處[5]，故本實驗選擇雞冠作為血管瘤的動物模型。按照國際公認的分類方法，脈管類疾病分為血管瘤與血管畸形兩大類。對于不同病變類型、位置、深淺的血管性病變，應(yīng)采取不同的具體治療方案。

平陽霉素是從我國浙江平陽縣土壤中的放線菌培養(yǎng)液中分離得到的抗腫瘤藥物，具有廣譜性。該藥可抑制腫瘤細胞DNA的合成，促使其DNA鏈斷裂，從而起到抑制腫瘤細胞分裂、增殖的作用。并且在 DNA 降解過程中產(chǎn)生自由基，通過自由基對血管瘤內(nèi)皮細胞的作用，損傷內(nèi)皮細胞并抑制其生長，破壞血管壁的完整性，導(dǎo)致血管閉塞，血管瘤停止生長并逐漸消退，從而達到治療血管瘤的目的[6]。有研究表明[7，8]，平陽霉素注射可能導(dǎo)致局部腫脹、潰瘍、壞死，因此注射時不宜過多、過淺，需準確把握注射部位、劑量及濃度。研究表明[9]，由于平陽霉素的劑量與肺毒性密切相關(guān)，對于成人，平陽霉素每次最大劑量不可超過8 mg，總劑量不可超過40 mg。采取少量多次注射的方法，每次注射間隔一定的時間，可以在很大程度上減輕藥物的不良反應(yīng)[10]。同時，對于過敏體質(zhì)患者，平陽霉素作為變應(yīng)原被注射進入機體后，會使機體處于致敏狀態(tài)。通常機體受變應(yīng)原刺激后2周即可致敏，從而引起全身性過敏反應(yīng)，因此患者注射治療后需密切觀察一定時間，并準備相關(guān)搶救措施[11]。

本研究發(fā)現(xiàn)，隨著觀察周期的延長，A組的雞冠在外觀及鏡下均存在明顯的變化：①A組雞冠顏色變淺;②鏡下觀，真皮層內(nèi)毛細血管管腔變小縮窄，血管壁結(jié)構(gòu)消失，毛細血管數(shù)目較對照組減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。本研究結(jié)果表明雞冠血管瘤模型經(jīng)平陽霉素處理后有明顯的外觀及組織學(xué)變化，平陽霉素對治療血管性病變有消退作用。

參考文獻：

[1]Chang LC，Haggstrom AN，Drolet BA，et al.Growthcharacteristics of infantile hemangiomas：implications formanagement[J].Pediatrics，2008，122（2）：360-367.

[2]Meng J，Zhuang QW，Gu QP，et al.Digital subtraction angiography （DSA） guided sequential sclerotherapy for maxillofacial vein malformation[J].Eur Rev Med Pharmacol Sci，2014，18（12）：1709-1712.

[3]譚紅梅，吳煒，趙居艷，等.嬰幼兒血管瘤治療進展[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2019，28（5）：163-166.

[4]周子竣，張靖.口腔頜面部血管瘤診治進展[J].中國口腔頜面外科雜志，2018，16（6）：563-567.

[5]孫玉，韋強，陳寶峰，等.微針治療淺表血管性病變的實驗研究[J].微創(chuàng)醫(yī)學(xué)，2010，5（6）：560-562.

[6]張明強，陳桂軍.口腔頜面部血管瘤藥物治療研究進展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2011，17（13）：1977-1979.

[7]唐軍.用平陽霉素注藥法治療鼻咽部血管瘤的效果研究[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2019，17（2）：67-68.

[8]郭忠民，張迪添.平陽霉素治療口腔頜面部血管瘤及脈管畸形的療效觀察[J].海峽藥學(xué)，2016，28（2）：214-215.

[9]Cheng C，Xi SL，Xu DP，et al.Mattress Cerclage CombinedWith Electrochemical Therapy and Pingyangmycin Injection After Embolization for Management of Arteriovenous Malformation on Oral and Maxillofacial Region[J].J Craniofac Surg，2015，26（2）：e110-e113.

[10]中華口腔醫(yī)學(xué)會口腔頜面外科專業(yè)委員會脈管性疾病學(xué)組.平陽霉素治療脈管性疾病規(guī)范[J].中國口腔頜面外科雜志，2011，9（1）：68-69.

[11]雍熙，楊勤，王賢芝，等.平陽霉素治療血管瘤臨床研究：單中心21年回顧性分析[J].中國血管外科雜志（電子版），2017，9（4）：279-282，292.

收稿日期：2019-7-25;修回日期：2019-8-5

編輯/肖婷婷