楊國偉,來國防，劉 錄

(1.大理大學 第一附屬醫(yī)院藥劑科 云南 大理 671000；2.云南省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院 民族藥與天然藥物檢驗所，云南 昆明 650011；3.云南中醫(yī)藥大學 中藥學院，云南 昆明)

三七為名貴常用中藥，為五加科植物三七Panaxnotoginseng的干燥根和根莖，收載于《中國藥典》.本品具有散瘀止血，消腫定痛的功效.用于咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外傷出血，胸腹刺痛、跌打腫痛.據(jù)不完全統(tǒng)計，我國現(xiàn)行中成藥處方中使用三七的占20%左右，同時三七還作為保健食品被大眾使用，三七使用范圍越來越廣.云南文山州是我國三七傳統(tǒng)主產(chǎn)地，隨著三七市場需求不斷增長，價格多輪暴漲，三七種植已經(jīng)擴張到云南紅河、昆明、曲靖、大理等地，甚至貴州、湖南局部均有三七種植.各地種植的三七質(zhì)量如何，其主要化學成分與文山道地藥材是否一致，是行業(yè)內(nèi)外均高度關(guān)注的熱點.

三七中皂苷成分含量主要是三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd，5種之和占皂苷總含量的70%以上，如果選擇上述5個單一成分測定其含量，測定成本較高，選擇三七總皂苷(已標注各成分含量)替代單一成分對照品不但能保障測定結(jié)果準確，而且節(jié)省時間，降低實驗費用.三七的使用已不僅僅局限在藥品領(lǐng)域，在保健品、化妝品甚至人們?nèi)粘Ｉ钪卸荚诖罅渴褂萌?但三七生長周期長，土地需要輪作，云南文山作為三七道地藥材產(chǎn)區(qū)，產(chǎn)量已遠遠不能滿足市場需求，尋找適宜三七生長的環(huán)境條件，擴大三七種植規(guī)模，滿足消費需求已迫在眉睫.

本文選擇三七總皂苷作為對照品，以三七中的主要活性成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd為指標性，采用HPLC法測定了采自云南16個不同地域的32份三七樣品，以期為三七道地藥材質(zhì)量評價提供一定的科學依據(jù).

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Waters 2695高效液相色譜儀(美國沃特世公司)；AL204型電子天平(Mettler Toledo).三七總皂苷 (批號：110870-201002，三七皂苷R1 6.9%、人參皂苷Rg1 28.0%、人參皂苷Re 3.8%、人參皂苷Rb1 29.7%人參皂苷Rd 7.3%)對照品由中國食品藥品檢定研究院提供，乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，其余為分析純，三七樣品采自云南省不同地域，經(jīng)云南省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院來國防主任藥師鑒定，為五加科三七Panaxnotoginseng的干燥根和根莖，其植物標本存放于云南省食品藥品監(jiān)督檢驗研究院.

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱Watres Symmetry RP18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；以乙腈為流動相(A)，水為流動相(B)，按表1中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長：203 nm；體積流量：1.0 mL/min；進樣量：10 μL.

表1 梯度洗脫程序

1.2.2 供試品溶液的制備

取本品粉末(過0.301 mm篩)0.6 g，精密稱定，精密加入甲醇 50 mL，稱定重量，放置 2 h，超聲處理(功率 300 W，頻率 40 kHz)40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得.

1.2.3 對照品溶液制備

取三七總皂苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含1.4 mg的溶液，即得，依“1.2.1”項下方法的液相混標色譜圖見圖1.

2 結(jié)果與討論

2.1 線性關(guān)系考察

精密稱取三七總皂苷對照品 12.26 mg，置 10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，精密量取 2、5、10、15、20、30 μL注入液相色譜儀，進行測定，以峰面積的積分值為縱坐標，質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制標準曲線，并以最小二乘法計算得回歸方程：三七皂苷R1：Y=257 372.8X- 5 154.562，在0.169 188～2.537 820 μg (R2= 0.999 1)呈良好線性關(guān)系；人參皂苷Rg1：Y=323 241X-96 042，在0.686 560～10.298 400 μg (R2=0.999 3)呈良好線性關(guān)系.人參皂苷Re：Y=284 540X-8 740.663，在0.093 176～1.397 640 μg (R2=0.997 0)呈良好線性關(guān)系；人參皂苷Rb1：Y=251 178.8X-101 354.1，在0.728 244～10.923 660 μg (R2=0.999 8)呈良好線性關(guān)系；人參皂苷Rd：Y=289 631.8X- 25 612.55，在0.178 996～2.684 940 μg (R2=0.999 6)呈良好線性關(guān)系.

2.2 精密度試驗(重復性試驗)

取采自云南文山麻栗坡三七6份，照“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣 10 μL，供試品中三七皂苷R1含量分別為：0.841%、0.849%、0.847%、0.851%、0.839%、0.845%(RSD 0.55%)；人參皂苷Rg1的含量分別為：3.534%、3.540%、3.549%、3.533%、3.537%、3.545%(RSD 0.18%)；人參皂苷Re的含量分別為：0.619%、0.625%、0.615%、0.632%、0.628%、0.616%(RSD 1.11%)；人參皂苷Rb1的含量分別為：3.419%、3.405%、3.422%、3.404%、3.416%、3.407%(RSD 0.23%)；人參皂苷Rd的含量分別為：0.875%、0.891%、0.883%、0.896%、0.890%、0.878%(RSD 0.92%).

2.3 穩(wěn)定性試驗

取采自云南文山麻栗坡三七供試品溶液于室溫(20～25 ℃)下放置，分別于0、2、4、8、10、12 h，精密吸取 10 μL 進樣，測定三七皂苷R1峰面積分別為：320 292、319 128、320 304、319 429、320 187、319 464(RSD 0.16%)；人參皂苷Rg1的峰面積分別為；1 945 014、1 943 265、1 944 368、1 943 391、1 945 122、1 944 653(RSD 0.04%)；人參皂苷Re的峰面積分別為：271 057、270 426、270 551、271 686、271 438、270 814(RSD 0.18%)；人參皂苷Rb1的峰面積分別為：831 613、832 556、832 409、830 947、830 789、831 772(RSD 0.09%)；人參皂苷Rd的峰面積分別為：254 720、255 361、253 796、254 008、255 165、254 266(RSD 0.25%).顯示供試品溶液在 12 h 內(nèi)穩(wěn)定.

2.4 準確度試驗(回收率試驗)

取自云南文山麻栗坡三七 0.3 g，9份，精密稱定，再精密稱取三七總皂苷 175.26 mg 至 25 mL 容量瓶，加甲醇溶解并定容至刻度，按其質(zhì)量分數(shù)的80%、100%、120%，加入對照品溶液(R1 0.483 7 mg/mL、Rg1 1.962 9 mg/mL、Re 0.266 4 mg/mL、Rb1 2.082 1 mg/mL、Rd 0.511 8 mg/mL)適量，按“1.2.2”項下的方法制備供試品溶液，進行測定，計算加樣回收率，R1為96.15% (RSD 0.52%),Rg1為97.46% (RSD 0.94%),Re為96.15% (RSD 0.48%),Rb1為95.96% (RSD 0.66%),Rd為96.33% (RSD 0.90%).

2.5 樣品測定

取采自云南16的不同區(qū)域三七32批次，照“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，進樣10 μL，按上述色譜條件測定(單批次樣品液相色譜圖見圖2)，以外標法(峰面積)計算樣品中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd的含量(結(jié)果見表2)，按現(xiàn)行《中國藥典》規(guī)定，云南紅河、昆明、曲靖、大理種植的三七也符合藥典規(guī)定.

表2 樣品測定結(jié)果 %

3 結(jié)語

經(jīng)檢驗，云南昆明、曲靖、大理等種植的三七皂苷類成分的總含量或者三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd 5個主要成分的單體含量與文山地區(qū)種植的三七均無明顯差異，本研究中采自云南不同地區(qū)16批樣品的5個成分總質(zhì)量分數(shù)為7.06% ～ 14.37%，曾有文獻報道三七不同樣品同5個成分的總質(zhì)量分數(shù)為0.82% ～ 11.62%，5種皂苷成分總量(R1、Rg1、Re、Rb1、Rd)可以增大不同生長年限三七之間的差異，該研究為擴大三七種植地區(qū)提供參考和依據(jù).檢測的5個指標成分既是三七的主要成分，也是主要的活性成分，對提高不同地區(qū)種植的中藥三七的質(zhì)量評價具有重要意義.