楊先富 吳通奎 袁曉娟 廖 飛 包濤濤 楊勝紅 趙孝木 彭彩麗

（貴州省黔東南州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州凱里 556000）

豬瘟是由豬瘟病毒（Classical Swine Fever Virus,CSFV）引起豬的一種高度接觸性傳染病，被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）列為必須報(bào)告的傳染病[1]；在《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》中，作為我國(guó)優(yōu)先防治和重點(diǎn)防范的16種動(dòng)物疫病之一[2]。在我國(guó)，對(duì)豬瘟的防控采取以疫苗免疫接種為主的綜合防治措施[3]；常用的豬瘟疫苗有豬瘟兔化弱毒脾淋苗、豬瘟兔化弱毒組織苗、豬瘟細(xì)胞苗（豬瘟活疫苗）、豬瘟-豬丹毒-豬肺疫三聯(lián)活疫苗4種[4]。目前，在規(guī)模場(chǎng)雖然每年都免疫豬瘟疫苗，豬瘟的發(fā)生與流行也逐漸減少，但“非典型豬瘟”、隱性帶毒情況以及疫苗免疫失敗的現(xiàn)象仍然時(shí)有發(fā)生。由于我國(guó)幅員遼闊，各地環(huán)境狀況差異較大，同一種疫苗在不同的養(yǎng)殖環(huán)境免疫效果不盡相同，加上豬的品種不同，對(duì)同一種疫苗免疫反應(yīng)程度有所差異，因此，已建立的豬瘟疫苗免疫程序可能存在局限性。做好豬瘟的防治工作，各地應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況探索適合當(dāng)?shù)刎i品種的疫苗免疫程序。

劍白香豬是世界上著名的微型豬品種，被農(nóng)業(yè)農(nóng)村部列為國(guó)家二級(jí)保護(hù)畜種，是劍河縣少數(shù)民族同胞培育成的具有悠久歷史的原始豬種；是經(jīng)歷了1 000多年的自然進(jìn)化和人類培育，適應(yīng)當(dāng)?shù)刈匀画h(huán)境、生活條件和少數(shù)民族生產(chǎn)習(xí)俗的帶有野性的特殊豬種，主要產(chǎn)于貴州省黔東南州劍河縣的叢林山寨中，主食為野生植物，以其豬肉特有香味、嫩度、純天然、無污染而引起科學(xué)家們的高度關(guān)注。劍白香豬豬瘟疫苗免疫程序研究未見報(bào)道，為了規(guī)范劍白香豬豬瘟疫苗免疫程序，降低豬瘟發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，保障劍白香豬產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，2018年至2019年，筆者對(duì)劍白香豬商品豬開展豬瘟活疫苗的免疫試驗(yàn)，觀察其免疫抗體變化規(guī)律和免疫效果，為劍白香豬商品豬豬瘟疫苗的免疫工作提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 疫苗

豬瘟活疫苗，廣東永順生物制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：2018039。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

在劍河縣劍白香豬原種場(chǎng)選擇來自同批次4頭母豬的同胎次、同日出生、相同飼養(yǎng)管理?xiàng)l件的健康仔豬30頭，35日齡監(jiān)測(cè)豬瘟母源抗體，全部為陰性，符合試驗(yàn)條件。

1.3 檢測(cè)試劑

豬瘟ELISA試劑盒，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。

1.4 免疫方法

仔豬于35日齡首次免疫豬瘟活疫苗，分別在56日齡、65日齡采集血清監(jiān)測(cè)豬瘟疫苗免疫抗體。65日齡加強(qiáng)免疫1次，分別在85日齡、115日齡、145日齡、175日齡、185日齡采集血清監(jiān)測(cè)豬瘟抗體。185日齡開展第3次免疫，分別在205日齡、260日齡、320日齡、365日齡采集血清監(jiān)測(cè)豬瘟抗體；每次免疫豬瘟活疫苗，都按每頭豬1頭份（1 mL）進(jìn)行肌肉注射。

1.5 免疫抗體監(jiān)測(cè)方法

取出CSFV抗原酶標(biāo)板，在記錄表上記錄樣本的位置。選2個(gè)孔加入100μL未稀釋的陰性對(duì)照血清，在臨近陰性對(duì)照孔附近選2個(gè)孔加入100μL未稀釋的陽性對(duì)照血清，然后在其他對(duì)應(yīng)的孔中加入30倍稀釋的待檢樣品。加樣完成后，將CSFV抗原酶標(biāo)板置于37℃條件下孵育30 min后，棄掉酶標(biāo)板各孔中的反應(yīng)液體，用約300μL的1×洗滌液洗滌5次板孔，將孔中殘留的洗滌液用吸水紙拍干。在干燥后的抗原酶標(biāo)板中加入50μL兔抗豬IgG-HRP工作液，然后封板。封好的反應(yīng)板在37℃下孵育30 min，然后再洗滌板孔并吸干孔中的水分。在干燥后的板孔中加入50μL底物溶液，37℃下孵育12±1 min，孵育完成后，在每個(gè)孔中加入50μL終止液，并將酶標(biāo)板放入酶標(biāo)儀中讀取酶標(biāo)儀上波長(zhǎng)450 nm下的OD值。

1.6 計(jì)算結(jié)果

對(duì)照值計(jì)算：

注：NC1A（450）為陰性對(duì)照1孔，NC2A（450）為陰性對(duì)照2孔；PC1A（450）為陽性對(duì)照 1孔，PC2A（450）為陽性對(duì)照2孔。

實(shí)驗(yàn)有效判定：

樣品：

結(jié)果判定：S/P≥0.4為陽性，S/P＜0.4為陰性。

2 結(jié)果與分析

2.1 結(jié)果

豬瘟活疫苗免疫抗體通過ELISA方法監(jiān)測(cè)，結(jié)果如表1所示。

表1 豬瘟活疫苗免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果

仔豬在35日齡首次免疫后，在56日齡、65日齡采樣檢測(cè)，S/P值分別為0.320、0.391，豬瘟活疫苗免疫抗體陽性數(shù)分別為12頭、19頭，豬瘟活疫苗免疫抗體陰性數(shù)分別為18頭、11頭，陽性率分別為40%、63.3%；在75日齡、85日齡、115日齡、145日齡、175日齡、185日齡檢測(cè)，S/P值分別為0.423、0.625、0.614、0.512、0.420、0.375，豬瘟活疫苗免疫抗體陽性數(shù)分別為21頭、25頭、24頭、23頭、21頭、15頭，豬瘟活疫苗免疫抗體陰性數(shù)分別為9頭、5頭、6頭、7頭、9頭、15頭，陽性率分別為70%、83.33%、80%、76.66%、70%、50%；在205日齡、260日齡、320日齡、365日齡檢測(cè)，S/P值分別為0.693、0.658、0.603、0.415，豬瘟活疫苗免疫抗體陽性數(shù)分別為27頭、26頭、24頭、21頭，豬瘟活疫苗免疫抗體陰性數(shù)分別為3頭、4頭、6頭、9頭，陽性率分別為90%、86.66%、80%、70%。

2.2 分析

2.2.1 S/P值分析

劍白香豬仔豬在35日齡首次免疫豬瘟活疫苗后，抗體水平呈緩慢上升趨勢(shì)，到65日齡值仍低于0.4，抗體水平低，不足以保護(hù)豬群，此時(shí)如果有豬瘟強(qiáng)毒侵襲，豬群易被感染而發(fā)病，因此，必須加強(qiáng)免疫1次，免疫后抗體水平快速上升，到85日齡時(shí)達(dá)到峰值，隨后抗體水平緩慢下降，到185日齡時(shí)，S/P值低于0.4，免疫保護(hù)率變低，免疫保護(hù)期可維持4個(gè)月；由于劍白香豬生長(zhǎng)慢，飼養(yǎng)周期較長(zhǎng)，通常是1年才能出欄，為了使抗體維持在較高水平，確保豬群安全，必須在185日齡進(jìn)行第3次免疫，在205日齡時(shí)，抗體水平達(dá)到高峰，直到365日齡，S/P值仍然維持在合格水平以上，免疫保護(hù)期可維持半年以上，通過3次豬瘟活疫苗的免疫，豬瘟免疫保護(hù)期可維持到劍白香豬商品豬出欄。

2.2.2 免疫保護(hù)率分析

經(jīng)過2次免疫的豬群在85日齡時(shí)，豬瘟免疫抗體保護(hù)率為83.33%，比第1次免疫保護(hù)率63.33%提高了20%，這與衛(wèi)選智等人[5]報(bào)道的豬瘟抗體水平變化趨勢(shì)相似。第3次免疫后，抗體水平進(jìn)一步提高，在205日齡時(shí)，免疫保護(hù)率達(dá)90%，比第2次免疫保護(hù)率83.33%提高了6.67%，到365日齡時(shí)，免疫保護(hù)率仍維持在70%。

3 小結(jié)

綜上所述，第2次免疫效果優(yōu)于第1次，第3次免疫效果優(yōu)于第2次，是由于動(dòng)物機(jī)體存在免疫記憶，當(dāng)疫苗再次刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)后，迅速產(chǎn)生大量抗體，抗體在體內(nèi)能維持較長(zhǎng)時(shí)間[6]。按照在35日齡首免、65日齡加強(qiáng)免疫1次、185日齡進(jìn)行第3次免疫的程序進(jìn)行免疫，可使劍白香豬商品豬獲得較高的豬瘟抗體水平，保護(hù)生豬免受豬瘟病毒感染。