黎金鳳　陳小靜　虞莉　范恩勇

[摘要] 目的 了解揚(yáng)州地區(qū)無償獻(xiàn)血者血液核酸檢測情況。 方法 對揚(yáng)州地區(qū)2015～2017年118 515例血液核酸標(biāo)本采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR法）進(jìn)行檢測，采取8人份混合檢測模式，陽性拆分單檢，實驗均設(shè)有內(nèi)部對照品、質(zhì)控、陰陽性對照，拆分陽性標(biāo)本送江蘇省血液中心進(jìn)一步確認(rèn)。 結(jié)果 2015～2017年共檢出HBV-DNA陽性106例，陽性檢出率0.09%;檢出HIV-RNA陽性4例，陽性檢出率0.003%;未檢出HCV-RNA陽性。HBV-DNA陽性送檢標(biāo)本經(jīng)省血液中心確證為陽性100例，占94.34%，HIV-RNA陽性確證為陽性2例，占50.00%。18例上?？迫AHBV-DNA陽性獻(xiàn)血者中抗-HBc陽性率100.00%。 結(jié)論 核酸檢測技術(shù)用于獻(xiàn)血者血液篩查可以提高輸血安全系數(shù)，保證用血安全，與酶聯(lián)免疫檢測聯(lián)合應(yīng)用，可以更好地保護(hù)獻(xiàn)血者資源，為社會提供安全、有效的血液，挽救患者生命。

[關(guān)鍵詞] 無償獻(xiàn)血者;血液篩查;核酸檢測技術(shù);酶聯(lián)免疫吸附試驗

[中圖分類號] R446.6? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2019）23-0110-03

[Abstract] Objective To understand the test results of blood nucleic acid of volunteer blood donors in Yangzhou area. Methods A total of 118 515 blood nucleic acid specimens which were collected from 2015 to 2017 in Yangzhou area were detected by polymerase chain reaction（PCR）. A mixed detection mode of 8 people was applied， and split separated test was used for positive specimens. The experiment was equipped with internal control， quality control， and negative and positive controls. The positive specimens were split and further confirmed by the Jiangsu Blood Center. Results A total of 106 HBV-DNA positive samples were detected from 2015 to 2017， and the positive detection rate was 0.09%; 4 cases were positive for HIV-RNA， and the positive detection rate was 0.003%; no positive HCV-RNA was detected. The HBV-DNA positive specimens were confirmed to be positive in 100 cases by the provincial blood center， accounting for 94.34%. HIV-RNA positive specimens were confirmed to be positive in 2 cases， accounting for 50.00%. The anti-HBc positive rate in 18 HBV-DNA positive donors by KHB was 100.00%. Conclusion Nucleic acid detection technique for blood screening of blood donors can improve the safety factor of blood transfusion and ensure blood safety. Combined with enzyme-linked immunoassay， it can better protect the blood donor resources， provide safe and effective blood for the society， and save the lives of patients.

[Key words] Volunteer blood donors; Blood screening; Nucleic acid detection technology; Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）

血液篩查是確保血液及血液制品安全的重要措施之一，酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測的是抗原或抗體，使輸血傳播疾病的發(fā)生率明顯降低，但輸血傳播疾病仍時有發(fā)生。由于病毒感染“窗口期”較長及病毒變異、隱匿性感染等因素的存在，ELISA法未能及時檢測出病毒標(biāo)志物，使臨床輸血存在一定的風(fēng)險。核酸檢測技術(shù)（nucleic acid detection technology，NAT）用于血液篩查可直接檢測血液中病毒核酸，有效縮短檢測方法的“窗口期”，同時還可幫助篩查低病毒載量感染的血液[1]，降低輸血感染的風(fēng)險，已成為發(fā)達(dá)國家血液篩查病毒的重要手段。為進(jìn)一步保障血液安全，我國也提出了在“十二五”末實現(xiàn)血液核酸檢測全覆蓋的目標(biāo)[2]。目前用于血液篩查的核酸檢測技術(shù)主要有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）和轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增技術(shù)（transcription-mediated amplification，TMA）[3]，本血站自2015年起，在原2遍ELISA法檢測的基礎(chǔ)上，對ELISA法陰性或單試劑陽性標(biāo)本增加了核酸檢測，對于篩查隱匿性肝炎或病毒感染“窗口期”起到了積極的作用。現(xiàn)將我站2015～2017年118 515例無償獻(xiàn)血者血液核酸檢測情況進(jìn)行回顧性分析，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

118 515例標(biāo)本均來自2015～2017年揚(yáng)州市中心血站無償獻(xiàn)血者，獻(xiàn)血者均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》（GB18467-2011），年齡18～55周歲，核酸標(biāo)本采集后4 h內(nèi)3500 r/min離心15 min，放2℃～6℃冰箱保存，48 h內(nèi)送檢驗科，72 h內(nèi)完成核酸檢測。

1.2 試劑與方法

核酸試劑（HBV-DNA/HCV-RNA/HIV-RNA）由上?？迫A生物科技有限公司提供，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR法）檢測。標(biāo)本檢測采取8人份混合檢測模式，實驗均設(shè)有內(nèi)部對照品（內(nèi)標(biāo)）、質(zhì)控、陰陽性對照，匯集陽性標(biāo)本次日拆分檢測，拆分HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-RNA陽性標(biāo)本送江蘇省血液中心進(jìn)一步確認(rèn)。

1.3 儀器與設(shè)備

全自動STAR加樣系統(tǒng)（Hamilton公司，瑞士）、ABI7500擴(kuò)增儀（ABI公司，美國）、ESCOⅡ型生物安全柜（ESCO公司，新加坡）、漩渦混合儀、手掌型離心機(jī)等。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS16.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 核酸檢測結(jié)果

2015～2017年揚(yáng)州市中心血站118 515例無償獻(xiàn)血者標(biāo)本核酸檢測結(jié)果的匯集陽性171例，拆分陽性110例（64.32%），其中HBV-DNA 106例（0.09%），HCV-RNA未拆出，HIV-RNA4例（0.003%），見表1。

2.2 拆分陽性標(biāo)本送檢確認(rèn)情況

2015～2017年揚(yáng)州市中心血站核酸拆分陽性106例HBV-DNA和4例HIV-RNA標(biāo)本送江蘇省血液中心確認(rèn)后，HBV-DNA確認(rèn)100例陽性（94.34%），HIV-RNA確認(rèn)2例陽性（50.00%），見表2。

2.3 HBV-DNA陽性標(biāo)本乙肝“兩對半”結(jié)果

2015～2017年揚(yáng)州市中心血站18例上?？迫AHBV-DNA陽性標(biāo)本經(jīng)江蘇省血液中心確認(rèn)，結(jié)果顯示羅氏核酸檢測HBV-DNA均為陽性及羅氏化學(xué)發(fā)光“兩對半”結(jié)果HBcAb均為陽性，見表3。

3 討論

輸血目前仍是臨床無法替代的重要治療手段，但血液安全問題又給患者帶來風(fēng)險，如何降低經(jīng)血液傳播疾病的風(fēng)險，保證血液的安全一直是血站人員持續(xù)改進(jìn)的目標(biāo)[4]。HBV、HCV和HIV經(jīng)血傳播一直是國內(nèi)、外輸血領(lǐng)域關(guān)注的熱點之一，血液及血液制品的安全越來越受到社會的重視。常規(guī)ELISA法可檢測血液中的抗原和抗體，但當(dāng)獻(xiàn)血者在感染“窗口期”或隱匿性感染時獻(xiàn)血，受血者將面臨輸血后感染肝炎或HIV病毒的風(fēng)險[3]。有文獻(xiàn)表明[3，5]，美國90%以上的輸血傳播HIV和HBV感染及75%以上的輸血傳播HCV感染均來自“窗口期”患者血液。我國屬于肝炎的高發(fā)區(qū)，人群中HBsAg攜帶率較高，HBV流行率大于60%，處于HBV“窗口期”或OBI的獻(xiàn)血者血液是導(dǎo)致HBsAg篩查后輸血傳播感染HBV殘余風(fēng)險的主要原因。我國目前篩查獻(xiàn)血者是否感染HBV的病毒標(biāo)志物為HBsAg，不能消除HBV感染“窗口期”以及隱匿性感染或存在HBV變異株造成的漏檢。隱匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）是一種特殊形式的乙肝病毒感染，可通過輸血、器官移植等傳播乙肝病毒[6]。核酸檢測技術(shù)作為一種新興的血液檢測方法因其靈敏度與特異性較高得到了廣泛應(yīng)用，可有效縮短病毒窗口期及檢出隱匿性感染及病毒變異，提高血液質(zhì)量和輸血安全，可將輸血傳播HBV、HCV、HIV的ELISA法檢測“窗口期”分別由原來的56 d、70 d、22 d縮短到41 d、12 d、11 d[7]。

本文表1結(jié)果顯示，本血站2015～2017年共檢出HBV-DNA陽性 106例，陽性檢出率0.09%;檢出HIV-RNA陽性4例，陽性檢出率0.003%，與中國臺灣、泰國、中國香港等地區(qū)檢出率基本接近[8];未檢測出HCV-RNA的原因可能為：①常規(guī)ELISA兩種試劑組合有效檢測出HCV抗體陽性標(biāo)本。②HBV為DNA 病毒，對外界環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)，而HCV為RNA病毒，RNA為單鏈病毒，不穩(wěn)定，容易分解和變異。③由于開展NAT檢測時間不長，標(biāo)本量不夠大，所以未檢測出HCV-RNA陽性標(biāo)本[9]。表2結(jié)果中，科華核酸HBV-DNA陽性標(biāo)本經(jīng)省血液中心確認(rèn)陽性率94.34%（100/106），HIV-RNA陽性經(jīng)省血液中心確證為陽性2例，占50.00%（2/4），說明本血站科華核酸檢測系統(tǒng)仍存在一定的假陽性。盡管核酸檢測優(yōu)勢明顯，但其對血液樣本、檢測環(huán)境及操作人員水平等要求較高。如標(biāo)本的采集、儲存條件、離心轉(zhuǎn)速、運(yùn)輸條件、檢測時效、加樣量等每一環(huán)節(jié)差錯均可能導(dǎo)致檢測失敗或漏檢的發(fā)生，血液標(biāo)本質(zhì)量和標(biāo)識的正確性是保證血液質(zhì)量和安全的關(guān)鍵，直接影響血液的檢測結(jié)果和血液的可追溯性[10]干擾物質(zhì)的存在，導(dǎo)致樣本中病毒的降解，造成試驗假陰性的結(jié)果[11]。

本研究表3結(jié)果顯示，18例HBV-DNA陽性獻(xiàn)血者中抗-HBc陽性率為100.00%，提示抗-HBc是HBV輸血感染的一個重要血清學(xué)標(biāo)志物[12]。HBV-DNA陽性檢出率與HBcAb陽性之間密切相關(guān)，在HBV流行率較高的地區(qū)如印度、埃及、印度尼西亞等，HBV-DNA在HBcAb陽性人群中的檢出率高達(dá)6.25%～30.00%[5]。同時，表3結(jié)果中發(fā)現(xiàn)有6例HBsAg經(jīng)省血液中心發(fā)學(xué)發(fā)光確認(rèn)為陽性，可能與本血站所用試劑靈敏度或病毒抗原低濃度有關(guān)，說明ELISA法仍存在一定漏檢風(fēng)險，如果病毒濃度處于極低水平，由于病毒顆粒在血漿中的泊松分布，取樣時未能吸取到帶有病毒的樣本，也容易造成漏檢[11]。通過化學(xué)發(fā)光法檢測可減少低濃度HBsAg攜帶者的漏檢，這對早期預(yù)防有著重要的意義[13]。有文獻(xiàn)報道[14]，急性艾滋病毒感染者，血清P24抗原減少、抗體增加，導(dǎo)致出現(xiàn)“第2窗口期”，其抗原濃度比試劑檢測限低，核酸檢測也不排除出現(xiàn)漏檢，或為了有效控制病毒感染，必須重視抗體檢測，盡早發(fā)現(xiàn)感染者。同時，核酸檢測易受眾多因素干擾，存在一定的檢測假陽性。因此，在血液病毒檢測中，核酸檢測也不是絕對可靠，不能完全代替酶聯(lián)免疫檢測，兩者各具優(yōu)勢，存在一定的互補(bǔ)性，給予兩者聯(lián)合應(yīng)用，可提高血液病毒檢測的檢測準(zhǔn)確性，保留部分獻(xiàn)血者[15]。

綜上所述，核酸檢測技術(shù)用于獻(xiàn)血者血液篩查可以提高輸血安全系數(shù)，保證用血安全，與酶聯(lián)免疫檢測聯(lián)合應(yīng)用，相當(dāng)于兩道牢固的血液安全屏障，能夠極大地降低輸血?dú)堄囡L(fēng)險，可以更好地保護(hù)獻(xiàn)血者資源，為社會提供安全、有效的血液，挽救患者生命[16]。

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（收稿日期：2019-02-01）