魏榮興 葉俊華 李 濤 馬長(zhǎng)書(shū)

近些年來(lái)，城市居民養(yǎng)犬?dāng)?shù)量直線提升,與犬相關(guān)的管理問(wèn)題也越來(lái)越突顯。據(jù)寧波市統(tǒng)計(jì)，僅2018年1月到7月，公安局接到涉犬類報(bào)警總數(shù)就超過(guò)3300起，其中求助咨詢1545起，處理糾紛矛盾808起；據(jù)濟(jì)南市統(tǒng)計(jì)，2017年共接受并處理群眾養(yǎng)犬投訴8431件，居各類舉報(bào)投訴前列。問(wèn)題主要涉及：犬叫聲擾民、遛犬不栓繩、隨地大小便、棄養(yǎng)產(chǎn)生流浪犬等等，同時(shí)還涉及偷盜犬、交通事故、犬傷人致殘、致死的案件。雖然各地都有出臺(tái)養(yǎng)犬規(guī)定，但是傳統(tǒng)的養(yǎng)犬注冊(cè)登記及管理方式實(shí)用性不強(qiáng)，尤其對(duì)上述養(yǎng)犬違法行為鑒定比較困難，而DNA分子標(biāo)記技術(shù)可以很好的解決上述問(wèn)題。

一、犬DNA常用分子標(biāo)記及相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)簡(jiǎn)介

DNA是生物體遺傳物質(zhì)，具有特異性、穩(wěn)定性和多樣性。分子標(biāo)記是指能被檢測(cè)到的可遺傳的DNA序列，它能反映出種群間和個(gè)體間特異性差異。目前，DNA分子標(biāo)記技術(shù)被廣泛應(yīng)用于法醫(yī)鑒定、遺傳育種、基因庫(kù)構(gòu)建、基因定位、物種鑒定、遺傳病篩查等各個(gè)研究領(lǐng)域。目前應(yīng)用最廣泛的的DNA分子標(biāo)記有兩種，第一種是以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)為核心技術(shù)開(kāi)發(fā)的短串連重復(fù)DNA（STR）標(biāo)記，STR是以2-6bp的可變數(shù)量序列為核心的重復(fù)多態(tài)性序列，不同個(gè)體間重復(fù)次數(shù)有差異，通過(guò)進(jìn)行引物設(shè)計(jì)以及PCR擴(kuò)增,能夠擴(kuò)增出相應(yīng)區(qū)域的序列,以重復(fù)次數(shù)作為標(biāo)記。STR標(biāo)記遺傳穩(wěn)定、檢測(cè)效率高、靈敏度高，可以通過(guò)同時(shí)檢測(cè)多個(gè)STR位點(diǎn)進(jìn)行個(gè)體的同一性認(rèn)定、親緣關(guān)系鑒定等，目前在國(guó)際上被廣泛應(yīng)用于法醫(yī)鑒定工作。第二種常用標(biāo)記是基于測(cè)序基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的單核苷酸多態(tài)性（SNP）分子標(biāo)記技術(shù)，SNP是指DNA上單個(gè)堿基的突變、插入、缺失等。SNP標(biāo)記可以通過(guò)芯片或者二代測(cè)序試劑盒等方式進(jìn)行高通量檢測(cè)，可以實(shí)現(xiàn)規(guī)模化和快速化檢測(cè)，同時(shí)檢測(cè)上萬(wàn)甚至幾十萬(wàn)個(gè)位點(diǎn)，多用于全基因組關(guān)聯(lián)分析、基因定位、疾病位點(diǎn)篩查、品種鑒定等。

二、DNA分子標(biāo)記在養(yǎng)犬管理中的應(yīng)用

（一）DNA遺傳病篩查、科學(xué)繁育

犬科學(xué)繁育是城市養(yǎng)犬管理的重要基礎(chǔ)，患有遺傳病的寵物犬在發(fā)病后被遺棄率必然大大增加，發(fā)病后的流浪犬被領(lǐng)養(yǎng)率也大大降低，同時(shí)它們繁育的后代也存在很大的患病風(fēng)險(xiǎn)，這樣的惡性循環(huán)變相增加了養(yǎng)犬管理的壓力。犬在10,000年左右的被馴化過(guò)程中，人類根據(jù)自身喜好以及不同的需求和目的，培育出了很多行為、體態(tài)差異巨大且特質(zhì)各異的犬品種。在培育的過(guò)程中，為了最大化的分離和固定品種的某一特有性狀，通常都會(huì)采用近交純繁方式，這樣的培育方式導(dǎo)致了犬易患多種遺傳疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，犬約有400多種遺傳疾病，涵蓋了神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、肌肉骨骼發(fā)育、大腦發(fā)育等各個(gè)方面，包括單個(gè)基因突變、隱性遺傳、顯性遺傳病、伴性遺傳病、多基因位點(diǎn)遺傳疾病等等。

目前，在國(guó)際上已經(jīng)有100余種犬遺傳病的決定基因、關(guān)鍵突變位點(diǎn)被成功定位。如拉布拉多犬的骨骼發(fā)育不良遺傳?。⊿keletal Dysplasia 2），發(fā)病后會(huì)出現(xiàn)體型結(jié)構(gòu)失調(diào)，矮小侏儒等癥狀，F(xiàn)rischknecht等人研究發(fā)現(xiàn)該遺傳病是由COL11A2基因的一個(gè)G/C突變導(dǎo)致的，該突變位點(diǎn)被定位到12號(hào)染色體2652874位置；史賓格犬易患的QT綜合征（QT Syndrome），這是一種常染色體顯性遺傳的心血管疾病，表現(xiàn)為T(mén)波異常、惡性心律失常、暈厥、心臟驟停、猝死等，2015年Ware等人通過(guò)DNA重測(cè)序的方法將突變位點(diǎn)成功定位在KCNQ1基因的外顯子8，密碼子1的2號(hào)位點(diǎn)。

通過(guò)查閱文獻(xiàn)，將這些遺傳病決定位點(diǎn)進(jìn)行整合，通過(guò)設(shè)計(jì)引物，利用測(cè)序技術(shù)可以進(jìn)行所有這些疾病的檢測(cè)，給犬主及養(yǎng)犬機(jī)構(gòu)提供科學(xué)的繁育指導(dǎo)，可以從源頭上減少這類病犬的產(chǎn)生，進(jìn)而減少遺棄犬的數(shù)量。

（二）犬的生物“身份證”

遺傳物質(zhì)DNA是每個(gè)生物個(gè)體與生俱來(lái)的生物信息，具有個(gè)體唯一性。利用DNA技術(shù)，檢測(cè)犬的DNA信息，可以為每頭犬制作信息唯一的身份證，從成本和穩(wěn)定性上考慮，國(guó)際上一般采用STR標(biāo)記的方法，檢測(cè)14～25個(gè)位點(diǎn)左右，把檢測(cè)的DNA信息作為犬的身份信息，錄入到犬的登記注冊(cè)管理系統(tǒng)，今后有關(guān)這頭犬所有的痕跡都能夠通過(guò)DNA取證的方式調(diào)查，能夠更加精準(zhǔn)的做到“人犬雙管”。

（三）犬的品種鑒定

每個(gè)城市都有“養(yǎng)犬規(guī)定”，詳細(xì)列出了禁養(yǎng)品種和可以注冊(cè)的品種，然而在實(shí)際管理中，有時(shí)候單純靠體型外貌很難分辨犬的品種，存在隨意性大的問(wèn)題，而DNA分子標(biāo)記技術(shù)則可以很好的解決這個(gè)問(wèn)題。從準(zhǔn)確率上考慮，國(guó)際上一般采用檢測(cè)SNP標(biāo)記的方法，選擇5000至20，000個(gè)品種間遺傳分化系數(shù)（FST）較高且連鎖不平衡（LD）較低的SNP位點(diǎn)，通過(guò)定制低密度SNP芯片或者二代測(cè)序試劑盒，可以在較低成本的情況下進(jìn)行DNA品種鑒定，為犬的注冊(cè)管理精準(zhǔn)把關(guān)。

（四）犬糞便管理

犬的糞便管理是城市養(yǎng)犬管理的一大難題，有些居民養(yǎng)犬雖然依法登記注冊(cè)，但是養(yǎng)犬行為不文明，遛狗時(shí)任由其隨地大小便，而執(zhí)法人員面對(duì)這種情況也很難進(jìn)行鑒定。利用DNA技術(shù)，可以提取糞便中脫落細(xì)胞的DNA，與注冊(cè)的犬DNA數(shù)據(jù)庫(kù)或者嫌疑犬的DNA數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)，找到責(zé)任犬和主人，為文明養(yǎng)犬提供強(qiáng)有力的支持。

（五）涉犬糾紛及案件的鑒定

隨著社會(huì)養(yǎng)犬基數(shù)的增大，盜犬、車輛撞犬逃逸、犬傷人等案件頻頻發(fā)生，利用DNA技術(shù)，可以精準(zhǔn)的為相關(guān)案件進(jìn)行取證鑒定，這種情況一般采用的是STR標(biāo)記技術(shù)。如2018年四川德陽(yáng)市“惡犬傷人致死案”，通過(guò)將死者致命傷口處提取物與周邊嫌疑犬進(jìn)行DNA檢測(cè)比對(duì)，成功鎖定了傷人的惡犬及犬主，檢測(cè)結(jié)果被法庭采納，為案件的偵破提供了決定性證據(jù)。

三、展望

隨著居民養(yǎng)犬的增加，養(yǎng)犬管理不足問(wèn)題越來(lái)越突顯，不利于社會(huì)文明建設(shè)。DNA分子標(biāo)記技術(shù)是解決問(wèn)題的一種強(qiáng)有力的技術(shù)手段,目前國(guó)內(nèi)外有多款較為成熟的犬STR檢測(cè)試劑盒及SNP檢測(cè)技術(shù)可以直接應(yīng)用，通過(guò)制作DNA“身份證”、鑒定品種、科學(xué)繁育、偵破案件等方式，為養(yǎng)犬管理提供強(qiáng)有力的輔助。