劉 巖，劉志洋，王馨怡，孫光軒，段周通，李延璐

（長(zhǎng)春科技學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130600）

胃潰瘍是臨床常見(jiàn)的消化系統(tǒng)疾病之一，其典型表現(xiàn)為饑餓不適、飽脹噯氣、泛酸或餐后定時(shí)的慢性中上腹疼痛，嚴(yán)重時(shí)可有黑便或嘔血。本病在中醫(yī)學(xué)中屬“胃脘痛”范疇，其主要病機(jī)是脾虛氣滯，以肝脾（胃）為主要病變臟腑，多由肝失疏泄，脾失健運(yùn)，導(dǎo)致脾胃虛弱，氣機(jī)失調(diào)［1］。有研究表明，脾虛胃潰瘍的發(fā)生和自愈過(guò)程常伴隨能量代謝和物質(zhì)代謝的異常［2］。

木香順氣丸是臨床上治療胃潰瘍的常用藥，主要由木香、砂 仁、醋 香 附、檳 榔、甘 草、陳 皮、厚 樸、枳 殼（炒）、蒼術(shù)（炒）、青皮（炒）、生姜等構(gòu)成。具有行氣化濕，健脾和胃之功，用于濕濁阻滯氣機(jī)、胸膈痞悶、脘腹脹痛、嘔吐惡心、噯氣納呆［3］。目前，已有大量的臨床研究表明木香順氣丸對(duì)胃潰瘍有很好的療效，尤其是脾虛氣滯型［4-8］，但相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究的報(bào)道較少。本文以大黃法復(fù)制脾虛模型，再以醋酸法復(fù)制胃潰瘍模型［9］，考察木香順氣丸對(duì)脾虛胃潰瘍大鼠能量代謝和物質(zhì)代謝的影響。

1 材料

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar 大鼠，體質(zhì)量180～220 g，6～8周齡，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（遼）2010-0001。

1.2 試藥 大黃購(gòu)于亳州亳藥堂藥業(yè)有限公司，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)符合2015 年版《中國(guó)藥典》要求。木香順氣丸購(gòu)自山東孔圣堂制藥有限公司，批號(hào) 170407；西咪替丁片購(gòu)自上海信誼天平有限公司，批號(hào)160838。Na+-K+-ATP 酶、琥珀酸脫氫酶（SDH）、細(xì) 胞 色 素C 氧 化 酶（COX）、丙 二 醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、α-酮戊二酸脫氫酶（α-OGDC）及糖原磷酸化酶（GP）試劑盒均購(gòu)自南京建成生物有限公司。

1.3 儀器 酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo 公司）；電子分析天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］；低速臺(tái)式離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；可調(diào)式移液器和超純水機(jī)（德國(guó)Eppendorf 公司）；紫外分光光度計(jì)（上海UNICO公司）。

2 方法

2.1 造模藥物制備 稱取定量大黃加入10 倍量水，浸泡60 min，快速加熱至沸騰，煎煮10 min，傾出藥液，提取2次，合并2 次藥液，濾過(guò)、濃縮后制成2 大黃水提液（生藥量2 g／mL），4 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 分組、給藥 清潔級(jí)Wistar 大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量180～220 g，隨機(jī)分為5 組，分別為空白組、模型組、陽(yáng)性藥組（0.09 g／kg 西咪替丁）及木香順氣低、高劑量組（2.49、4.98 g／kg），每組10 只。各組大鼠適應(yīng)5 d 后開(kāi)始給藥，除空白對(duì)照組外，其余4 組建立脾虛胃潰瘍模型。采用大黃苦寒瀉下法建立脾虛動(dòng)物模型，每日灌胃給予2 g／mL的大黃水煎液，給藥容積為10 mL／kg，2 次／d，連續(xù)灌胃給藥14 d。脾虛造模成功后，采用醋酸涂抹法建立胃潰瘍模型。大鼠乙醚麻醉后剖腹，拉出全胃于胃底部用自制胃夾將塑料管固定于上，向管內(nèi)注入冰醋酸0.1 mL，使其與腺胃部前壁漿膜接觸60 s，撤去胃夾，用生理鹽水清洗局部，逐層縫合，并再次進(jìn)行消毒。涂抹術(shù)后24 h，按體質(zhì)量分別灌胃給藥，西咪替丁組0.09 g／kg，木香順氣低劑量組2.49 g／kg，木香順氣高劑量組4.98 g／kg，模型組給予等容積生理鹽水，給藥容積為15 mL／kg，各組1 次／d，連續(xù)給藥10 d。

2.3 樣本收集 治療結(jié)束第2 天，將大鼠以1%戊巴比妥鈉（0.4 mL／100 g）腹腔注射麻醉，迅速剖開(kāi)腹部，結(jié)扎胃的幽門部和賁門部，切斷食道及十二指腸，摘下全胃。切取腺胃部取組織，加生理鹽水，按胃組織∶生理鹽水=1∶9制備組織勻漿液，-80 ℃保存待用。從門靜脈注射4℃的生理鹽水，清除殘留血液，取出肝臟。切取部分右側(cè)中葉肝組織稱重，加生理鹽水，按肝臟∶生理鹽水=1∶9制備肝勻漿液，-80 ℃保存待用。

2.4 HE 染色 用4%多聚甲醛固定胃組織，梯度乙醇脫水，常規(guī)石蠟包埋切片，HE 染色，光鏡下進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察。

2.5 生化指標(biāo)檢測(cè) Na+-K+-ATP 酶、SDH、COX、MDA、α-OGDC、SOD 及GP 水平測(cè)定，按照各個(gè)試劑盒使用操作，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行處理，數(shù)據(jù)以（±s）表示，采用單因素方差分析（ANOVA）方法。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 體征指標(biāo) 造模結(jié)束后，造模大鼠出現(xiàn)體質(zhì)量下降、便溏泄瀉、聚集蜷臥、皮毛晦暗、少動(dòng)、反應(yīng)遲緩。參考衛(wèi)生部藥政司《中藥治療脾虛證的臨床研究指導(dǎo)原則》《實(shí)用中醫(yī)癥候動(dòng)物模型學(xué)》以及文獻(xiàn)中介紹的中醫(yī)對(duì)脾虛的判斷標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果表明大黃造大鼠脾虛模型成功。

3.2 木香順氣丸對(duì)大鼠胃組織病理學(xué)形態(tài)的影響 空白組大鼠胃黏膜表面細(xì)胞完整，各層細(xì)胞排列規(guī)則且結(jié)構(gòu)正常，無(wú)潰瘍性損害，未見(jiàn)萎縮、脫落或缺損；模型組大鼠胃黏膜有較嚴(yán)重?fù)p傷，有明顯組織細(xì)胞壞死和破損、脫落，黏膜下可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；陽(yáng)性藥組大鼠胃黏膜破損情況有極大改善；木香順氣丸組大鼠胃竇部黏膜皺壁上皮排列整齊，雖有破損和部分脫落，但破損情況較模型組改善，無(wú)明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)。見(jiàn)圖1。

3.3 木香順氣丸對(duì)大鼠肝組織Na+-K+-ATP 酶、COX 水平的影響 與空白組比較，模型組大鼠肝組織Na+-K+-ATP、COX 水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組能顯著升高Na+-K+-ATP 酶水平（P＜0.05），木香順氣丸高劑量組能顯著升高Na+-K+-ATP 酶、COX 水平（P＜0.05，P＜0.01）。見(jiàn)圖2。

3.4 木香順氣丸對(duì)大鼠肝組織α-OGDC、GP、SDH 水平的影響 與空白組比較，模型組大鼠肝組織α-OGDC、GP 水平顯著升高（P＜0.01），SDH 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與模型組比較，木香順氣丸高劑量組能顯著降低大鼠肝組織α-OGDC、GP 水平（P＜0.05，P＜0.01）。見(jiàn)圖3。

3.5 木香順氣丸對(duì)大鼠胃組織SOD、MDA 水平的影響 與空白組比較，模型組SOD 水平顯著降低，MDA 水平顯著上升（P＜0.05）；與模型組比較，木香順氣丸組能顯著提高SOD 水平，抑制MDA 水平（P＜0.05，P＜0.01）。見(jiàn)圖4。

4 討論

Na+-K+-ATP 酶維持細(xì)胞的離子梯度差，不僅使細(xì)胞膜內(nèi)外離子水平處于平衡狀態(tài)，也調(diào)節(jié)細(xì)胞的體積和驅(qū)動(dòng)某些細(xì)胞中糖和氨基酸的運(yùn)送。Na+-K+-ATP 酶與ATP 的分解關(guān)系密切，酶活性的升高伴隨有ATP 消耗的增加［10］。細(xì)胞色素C 氧化酶（COX），即呼吸鏈復(fù)合物Ⅳ，位于呼吸鏈的末端，催化細(xì)胞色素的氧化，同時(shí)驅(qū)動(dòng)ATP 的合成，是線粒體的標(biāo)志酶，其酶活性的發(fā)揮對(duì)于維持線粒體結(jié)構(gòu)和功能以及細(xì)胞能量的產(chǎn)生有非常重要的意義［11］。本研究結(jié)果顯示，脾虛胃潰瘍模型大鼠Na+-K+-ATP 酶、COX水平顯著降低，說(shuō)明脾虛胃潰瘍大鼠出現(xiàn)能量代謝障礙，木香順氣丸能顯著升高脾虛胃潰瘍大鼠Na+-K+-ATP 酶、COX 水平，表明木香順氣丸能促進(jìn)脾虛胃潰瘍大鼠能量代謝。

α-酮戊二酸脫氫酶（α-OGDC）是三羧酸循環(huán)第三個(gè)關(guān)鍵酶和重要調(diào)節(jié)點(diǎn)。能催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成ACoA。在琥珀酸脫氫酶催化下，琥珀酸脫氫生成延胡索酸［12］。琥珀酸脫氫酶（SDH），是線粒體內(nèi)膜的結(jié)合酶，是連接氧化磷酸化與電子傳遞的樞紐之一，為線粒體的一種標(biāo)志酶。作為參與三羧酸循環(huán)的關(guān)鍵酶，琥珀酸脫氫酶是反映線粒體功能的標(biāo)志酶之一［13］。本研究結(jié)果顯示，脾虛胃潰瘍模型大鼠α-OGDC 水平顯著升高，木香順氣丸能顯著降低脾虛胃潰瘍大鼠α-OGDC 水平，表明木香順氣丸可調(diào)節(jié)脾虛胃潰瘍大鼠物質(zhì)代謝的紊亂。

糖原磷酸化酶（GP）催化糖原分解生成葡糖-1-磷酸，是糖原分解過(guò)程中的重要調(diào)節(jié)點(diǎn)［14］。肝糖原的合成與分解參與并維持著血糖濃度的相對(duì)穩(wěn)定。當(dāng)體內(nèi)糖來(lái)源豐富和細(xì)胞中能量充足時(shí)，即合成糖原將糖儲(chǔ)存起來(lái)。當(dāng)糖的供應(yīng)不足或能量需求增加時(shí)，儲(chǔ)存的糖原即可分解為葡萄糖進(jìn)入血液。研究結(jié)果顯示，脾虛胃潰瘍模型大鼠GP 水平顯著升高，木香順氣丸能顯著降低脾虛胃潰瘍大鼠GP 水平，表明脾虛胃潰瘍大鼠糖原分解加快，而木香順氣丸能調(diào)節(jié)脾虛胃潰瘍大鼠糖原代謝的紊亂。

圖1 木香順氣丸對(duì)大鼠胃組織病理學(xué)形態(tài)的影響（×200）

圖2 木香順氣丸對(duì)大鼠肝組織Na+-K+-ATP 酶、COX 水平的影響

超氧化物歧化酶（SOD）是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶，具有特殊的生理活性，是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)［15］。許多病理過(guò)程，包括胃潰瘍的形成，與氧自由基所致的細(xì)胞損傷密切相關(guān)。丙二醛（MDA）即血漿中脂質(zhì)過(guò)氧化物的代謝產(chǎn)物，MDA 水平可反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化物的程度，間接地反映出機(jī)體細(xì)胞受氧自由基攻擊的嚴(yán)重程度［16］。本研究結(jié)果顯示，脾虛胃潰瘍模型大鼠SOD 水平顯著降低，MDA 水平有升高趨勢(shì)；木香順氣丸能顯著升高脾虛胃潰瘍大鼠SOD 水平，降低MDA 水平。結(jié)果表明，木香順氣丸可通過(guò)抑制體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化和減少氧自由基對(duì)胃黏膜的損傷發(fā)揮抗?jié)冏饔谩?/p>

圖3 木香順氣丸對(duì)大鼠肝組織α-OGDC、GP、SDH 水平的影響

圖4 木香順氣丸對(duì)大鼠胃組織SOD、MDA 水平的影響

本實(shí)驗(yàn)采用西咪替丁作為陽(yáng)性對(duì)照藥，主要用于與木香順氣丸藥效學(xué)對(duì)比評(píng)價(jià)。在作用機(jī)制研究中顯示，西咪替丁可以通過(guò)提高Na+-K+-ATP 酶活力發(fā)揮作用。但是西咪替丁對(duì)于本實(shí)驗(yàn)中其他的靶點(diǎn)作用相對(duì)不明顯，這也為藥物治療脾虛胃潰瘍模型作用機(jī)制有關(guān)陽(yáng)性藥的選擇提供一定的依據(jù)。

綜上所述，木香順氣丸治療胃潰瘍與其調(diào)節(jié)能量代謝和物質(zhì)代謝紊亂以及清除氧自由基機(jī)制有關(guān)。