鄭娟娟

【中圖分類號(hào)】R197 ? ? ?【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A ? ? ?【文章編號(hào)】1672-3783（2019）12-0284-01

PCR技術(shù)并不是一個(gè)不常見的技術(shù)，它作為一種分子生物技術(shù)，是對(duì)人體內(nèi)天然的DNA復(fù)制過程進(jìn)行模擬，實(shí)現(xiàn)DNA分子的體外擴(kuò)增，一般在對(duì)兩段已知序列間的DNA區(qū)段進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)應(yīng)用。在需要擴(kuò)增的片段兩側(cè)與互補(bǔ)該片段兩側(cè)的寡核苷酸引物，通過高溫變性和低溫退火，外加中溫延伸三過程，進(jìn)行若干循環(huán)之后，擴(kuò)增DNA片段二的n次方倍。

其中，高溫變性是指將要擴(kuò)增的DNA放到高溫下去加熱，保持高溫在94攝氏度左右，這樣一來就會(huì)斷掉該雙鏈DNA之間的氫鍵，變成兩條單鏈。而低溫退火指的是把所用溶液降到50到60攝氏度，根據(jù)堿基配對(duì)原則把引物和要擴(kuò)增的DNA互補(bǔ)結(jié)合起來，中溫延伸就是在以上基礎(chǔ)上，把溫度升高到72攝氏度，將單鏈的DAN作為模板，在耐熱DNA聚合酶的作用下，利用引物引導(dǎo)，按照5'-3方向?qū)⒒旌衔锢锩嫠姆N脫氧核苷三磷酸加以利用，復(fù)制成為互補(bǔ)的DNA。

現(xiàn)在，該技術(shù)也在食品微生物檢測(cè)中應(yīng)用廣泛，那么它究竟是怎樣應(yīng)用的呢，用在哪里呢？請(qǐng)大家跟隨筆者的腳步，一起來了解一下。

應(yīng)用一、腸出血性大腸桿菌的檢測(cè)與鑒定

我們知道，大腸桿菌產(chǎn)出的毒素是具有一致性的特征的，所以在以前的技術(shù)中，我們使用的單一的PCR技術(shù)方式雖然可以檢測(cè)大腸桿菌，但是很難對(duì)血性大腸桿菌做一個(gè)比較精確的鑒定和檢測(cè)，所以我們現(xiàn)在的檢測(cè)都是利用多重PCR技術(shù)，應(yīng)用緊密素基因、賀毒素基因、溶血素基因、脂多糖基因和stx2等目的基因。比如說，一些研究人員在檢測(cè)牛肉里大腸桿菌的時(shí)候，利用免疫磁分離技術(shù)聯(lián)合多重PCR技術(shù)對(duì)eae、stx1、hly、stx2等基因進(jìn)行分析，從而確定是哪一類大腸桿菌，又比如，一些研究人員還是利用該技術(shù)度牛肉里的大腸桿菌 O157：H7流行因子進(jìn)行檢測(cè)，最后取得了比較優(yōu)秀的效果，所以，與過去使用的血清法相比，多重PCR檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)大腸桿菌的時(shí)候準(zhǔn)確度更加高，實(shí)用性更加強(qiáng)，獲得的反應(yīng)更為靈敏。

應(yīng)用二、檢測(cè)食品中沙門氏菌的含量

一般來說，因?yàn)樵诩庸な澄锏臅r(shí)候，加工的程序和事物本身都會(huì)對(duì)沙門氏菌造成損害，所以我們吃的食物當(dāng)中的沙門氏菌的含量都不會(huì)太高，但是這就會(huì)對(duì)檢測(cè)食物中沙門氏菌的含量造成了困難。但是，我們可以使用多重PCR檢測(cè)技術(shù)來完成這項(xiàng)任務(wù)，因?yàn)樵摷夹g(shù)在檢驗(yàn)沙門氏菌的突變情況與血清型上是非常有效果的，我們常常會(huì)使用invE、invA、spvd 、invB、fimA、invC和hns等特異性引物基因。也有些研究人員會(huì)使用如invA、hns、invB的沙門氏菌屬特異性基因來當(dāng)做引物讓多重PCR實(shí)現(xiàn)構(gòu)建，在檢測(cè)的結(jié)果中可以看到，使用三重的PCR技術(shù)相較于使用單一PCR和雙重PCR有更高的精準(zhǔn)性，更高的靈敏性。另外還有一些研究者把SdfI 基因、傷寒沙門氏菌ViaB以及ompC當(dāng)做引物，使用多重的PCR技術(shù)對(duì)冷凍的家禽肉進(jìn)行檢測(cè)，最后這些冷凍肉的血清型流行情況被研究者判斷了出來，研究顯示的常規(guī)檢測(cè)和多重PCR技術(shù)檢測(cè)的陽性結(jié)果一樣，但是后者的檢出率明顯要高很多。

應(yīng)用三、檢測(cè)食物中的金黃色葡萄球菌

金黃色葡萄球菌是在我們經(jīng)常食用的生肉、蔬菜和發(fā)酵的肉類里面廣泛存在的一種致病菌，它能夠在這些食物里面大量繁殖，并生產(chǎn)出腸毒素SE，要知道，造成人們食物中毒的關(guān)鍵因素就是SE。所以，我們一般使用sed、sea、sei、seb和seh等基因作為引物來對(duì)SE進(jìn)行檢測(cè)。一些研究者在構(gòu)建PCR時(shí)，會(huì)使用腸毒素基因、編碼耐熱核酸酶基因以及金黃色葡萄球菌里的23srRNA，這種方式可以直接對(duì)生肉和牛奶里面的金黃色葡萄球菌進(jìn)行檢測(cè)，雖然說應(yīng)用這個(gè)檢測(cè)方法檢出來的結(jié)果是和常規(guī)檢測(cè)方法結(jié)果相同的，但是我們沒有辦法利用免疫學(xué)方式檢測(cè)到腸毒素基因的存在，所以在此情況下，靈敏性更高的PCR就發(fā)揮了其作用，它的特異性檢測(cè)可以達(dá)到1pgDNA的最低檢測(cè)限。

應(yīng)用四、將PCR技術(shù)應(yīng)用在食品的非致病菌檢測(cè)中

在食品微生物檢測(cè)中，我們也可以將PCR技術(shù)應(yīng)用在食品的非致病菌檢測(cè)，例如檢測(cè)乳酸菌，可以通過檢測(cè)結(jié)果知道食品是否出現(xiàn)腐敗的情況。

以上就是PCR技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的應(yīng)用的概述，希望通過以上文章的閱讀，有所收獲，有所幫助。