朱利利，包素萍，闞曉麗

（江蘇省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗研究院，南京 210007）

28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑（含雙環(huán)磺草酮6.5%、吡嘧磺隆1.5%、丙草胺20.0%）是一種防治移栽水稻田一年生雜草的除草劑[1-2]，具有較好的持效性和安全性[3-4]。本文建立的高效液相色譜分析方法可在相同色譜條件下同時測定28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑中有效成分雙環(huán)磺草酮和吡嘧磺隆的含量[5]，能夠?qū)崿F(xiàn)測定的各組分與試樣中其他組分的分離。該測定方法線性關(guān)系良好，準確度、精密度均較高。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

Agilent 1260高效液相色譜儀、DAD檢測器和全自動進樣器，色譜工作站；Millipore超純水制備系統(tǒng)；超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18不銹鋼柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）。

雙環(huán)磺草酮（97.6%），國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（沈陽）；吡嘧磺隆（99.0%），國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（沈陽）；甲醇（色譜純），TEDIA公司；乙腈（色譜純），TEDIA公司；磷酸（分析純），南京化學(xué)試劑有限公司；自制超純水。28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑樣品，南京高正農(nóng)用化工有限公司。

1.2 色譜條件

流動相：甲醇＋水＋磷酸（體積比80.0∶19.5∶0.5）；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：254 nm；進樣量：5 μL；保留時間：雙環(huán)磺草酮約為4.1 min；吡嘧磺隆約為5.1 min。標準品和樣品溶液的高效液相色譜圖見圖1和圖2。

圖1 有效成分標準品液相色譜圖

圖2 28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑液相色譜圖

1.3 測定步驟

1.3.1 標準品溶液的配制

分別稱取雙環(huán)磺草酮標準品約0.09 g（精確至0.000 2 g）、吡嘧磺隆標準品約0.02 g（精確至0.000 2 g），至50 mL容量瓶中，先用約30 mL乙腈超聲振蕩5 min，使其全部溶解，取出置于室溫下冷卻后，再用乙腈定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

取28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑樣品約10 g，壓碎混勻后，準確稱取樣品含雙環(huán)磺草酮約0.09 g（精確至0.000 2 g），至50 mL容量瓶中，先用約30 mL乙腈超聲振蕩5 min，使其完全溶解，取出置于室溫下冷卻后，再用乙腈定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，備用。

1.3.3 有效成分含量的測定

在上述條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，先將標準品溶液注入儀器分析，計算標準品的響應(yīng)值，直至相鄰兩次的相對響應(yīng)值變化不大于1.5%后，再按標準品溶液、試樣溶液、試樣溶液、標準品溶液的順序進行測定。

1.3.4 計算

將測得兩次試樣溶液及試樣前后兩次標準品溶液中的測定組分峰面積分別進行平均，測定試樣中雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺?。┑馁|(zhì)量分數(shù)w（%）按下式計算[6]。

式中：A1為標準品溶液中雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺?。┓迕娣e的平均值，mAU·s；A2為試樣溶液中雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺?。┓迕娣e的平均值，mAU·s；m1為雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺隆）標準品的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標樣中雙環(huán)磺草酮（或吡嘧磺隆）的質(zhì)量分數(shù)，%。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長的選擇

用色譜工作站采集混合標樣溶液和試樣溶液中有效成分吡嘧磺?。ūＡ魰r間約為5.1 min）、雙環(huán)磺草酮（保留時間約為4.1 min）在210～400 nm范圍內(nèi)的紫外吸收光譜圖。28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑的有效成分雙環(huán)磺草酮、吡嘧磺隆紫外吸收光譜圖與混合標樣溶液中各對應(yīng)成分的紫外吸收光譜圖一致，最大紫外光譜吸收值無差異。同時對雙環(huán)磺草酮、吡嘧磺隆的色譜峰進行光純度分析，用匹配值與固定閾值990進行比較，均滿足大于990，滿足定量分析要求。綜合考慮靈敏度和數(shù)據(jù)穩(wěn)定性，最終選擇254 nm為檢測波長。

2.1.2 流動相的選擇

為了在有效分離雙環(huán)磺草酮、吡嘧磺隆的色譜峰的同時又能得到較好的峰形，分別對不同比例甲醇＋水、甲醇＋水＋磷酸、乙腈＋水、乙腈＋水＋磷酸體系的流動相做了比較分析，兼顧分離良好、經(jīng)濟實惠、節(jié)約分析時間，最終確定流動相體系為甲醇＋水＋磷酸（體積比80.0∶19.5∶0.5）；通過改變流速來進行測定，分別設(shè)定為0.6、0.8、1.0、1.2 mL/min，通過比較分析，最終流速確定為1.0 mL/min。

2.2 精密度的測定

在上述操作條件下，對同一樣品進行5次重復(fù)測定，分別計算有效成分質(zhì)量分數(shù)及其平均值、標準偏差、變異系數(shù)（見表1）。結(jié)果表明，兩種有效成分色譜定量分析方法精密度均能滿足定量分析要求。

表1 精密度測定結(jié)果

2.3 線性關(guān)系的測定

采用已知含量的雙環(huán)磺草酮和吡嘧磺隆標樣分別配制5個已知濃度的梯度混合標樣溶液，以雙環(huán)磺草酮、吡嘧磺隆的質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，分別繪制線性關(guān)系曲線（圖3、圖4）。雙環(huán)磺草酮線性回歸方程為y=2.4167x＋38.971，R2=0.9998；吡嘧磺隆線性回歸方程為y=5.265 1x-37.565，R2=0.997 5。

圖3 雙環(huán)磺草酮的線性關(guān)系圖

圖4 吡嘧磺隆的線性關(guān)系圖

2.4 準確度的測定

依據(jù)《農(nóng)藥產(chǎn)品分析方法確認指南》，按照制劑配方比例要求，將除原藥以外的所有助劑按照制劑相同比例混勻，作為制劑空白[7]。在一定量的制劑空白中添加雙環(huán)磺草酮標樣、吡嘧磺隆標樣，合成5個組成與28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑相似的模擬試樣，作為樣品溶液，在上述色譜條件下進行準確度測定。結(jié)果表明，雙環(huán)磺草酮的平均回收率為99.35%，變異系數(shù)為0.76%；吡嘧磺隆的平均回收率為99.22%，變異系數(shù)為0.55%，符合《農(nóng)藥產(chǎn)品分析方法確認指南》的要求，準確度測定結(jié)果見表2。

表2 準確度測定結(jié)果

3 結(jié)論

本文建立的液相色譜分析方法能同時有效地分離28%雙環(huán)磺草酮·丙草胺·吡嘧磺隆顆粒劑中有效成分雙環(huán)磺草酮和吡嘧磺隆，并測定其含量。該方法精密度、準確度較高，操作簡便，具有良好的線性關(guān)系，能滿足實際樣品分析檢驗的要求，對相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)督與檢測具有積極意義。