李 新，劉傳輝，李 凌

（商丘市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測檢驗(yàn)中心，河南商丘 476100）

黃曲霉毒素是由曲霉屬真菌產(chǎn)生的一類真菌毒素，可在家禽飼料中檢出。黃曲霉毒素的主要形式有B1、B2、G1和G2，其中黃曲霉毒素B1（AFB1）是原料和飼料中最常見的毒素（王磊等，2010）。飼料黃曲霉毒素污染會造成肉雞養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)損失，包括生長、飼料轉(zhuǎn)化率降低、死亡率增加、腿部問題和對胴體品質(zhì)的影響（石達(dá)友等，2011）。黃曲霉毒素在家禽中會引起代謝變化，并與肝臟損傷、消化酶活性降低和免疫抑制有關(guān)，同時黃曲霉毒素會影響肝臟相關(guān)基因的表達(dá)（呂武興等，2013）。隨著全球糧食短缺和國際農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易的增加，霉菌毒素污染已成為全球動物生產(chǎn)亟待解決的問題。Binder等（2007）進(jìn)行的一項(xiàng)調(diào)查顯示，亞太地區(qū)超過1/3的谷物被霉菌毒素污染。沸石粉和改良的酵母細(xì)胞壁用于吸附黃曲霉毒素在反芻動物體內(nèi)的效果存在差異（Kutz等，2009）。酵母細(xì)胞壁的葡聚糖部分是其活性成分，可以與真菌毒素分子相互作用（Yiannikouris等，2004）。作者假設(shè)，不同類型的吸附劑對飼料中的黃曲霉B1脫毒效果不同，可以防治雞的黃曲霉病，因此，本研究旨在評估兩種吸附劑沸石粉與沸石粉+酵母細(xì)胞壁預(yù)防肉雞黃曲霉毒素的效果。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)日糧與分組 試驗(yàn)將550只1 d肉仔雞隨機(jī)分為11組，每組5個重復(fù)，每個重復(fù)10只雞。11個處理中包括3個沒有添加吸附劑的日糧（含0、1和 2 mg/kg黃曲霉毒素 B1），8個處理組日糧含1或2 mg/kg黃曲霉毒素B1，添加沸石粉或沸石粉+酵母細(xì)胞壁（購自諾偉司）。試驗(yàn)共進(jìn)行21 d，雞只自由采食和飲水，基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.2 日糧分析與采樣 試驗(yàn)各組日糧采用HPLC法對黃曲霉毒素B1含量進(jìn)行定量分析，每天記錄肉雞死亡和淘汰數(shù)量，試驗(yàn)結(jié)束后分析肉雞采食量、體增重、料重比和死亡率。

1.3 樣品分析 試驗(yàn)結(jié)束后，每個重復(fù)隨機(jī)選擇4只雞，頸靜脈采血，分離血清。之后對雞只進(jìn)行屠宰，收集肝臟，參考Hoerr（2003）的研究方法對肝臟進(jìn)行病變評分。血清樣品用于分析葡萄糖、尿素氮、白蛋白、總蛋白、球蛋白、鈉、鉀、氯含量，以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶和谷氨酰轉(zhuǎn)移酶的活性。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS軟件多因素方差分析，日糧黃曲霉毒素B1水平和吸附劑種類及水平為主效應(yīng)，采用Tukey法進(jìn)行多重比較，同時研究主效應(yīng)之間對各指標(biāo)影響的交互作用，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 日糧黃曲霉毒素B1含量分析 由表2可知，本試驗(yàn)分析了日糧中橘霉素、T2毒素、嘔吐毒素、赭曲霉毒素A、伏馬毒素、玉米赤霉烯酮和黃曲霉毒素B1，其中T2毒素的檢測量在1 mg/kg以下，橘霉素、T2毒素、嘔吐毒素、伏馬毒素、玉米赤霉烯酮含量在0.5 mg/kg以下，而赭曲霉毒素A含量在0.05 mg/kg以下（數(shù)據(jù)未列出），試驗(yàn)檢測的黃曲霉毒素B1含量與設(shè)計(jì)值無顯著差異。

2.2 吸附劑對感染黃曲霉毒素B1肉雞生長性能的影響 由表3可知，在21 d的試驗(yàn)期間，對照組、1和2 mg/kg黃曲霉毒素B1組采食量分別是1046、919和 753 g，增重分別是 817、732和 642 g，均顯著高于其他組（P＜0.05）。2 mg/kg黃曲霉毒素B1組肉雞較對照組采食量只有72%，增重只有78%。隨著日糧黃曲霉毒素B1含量的增加，死亡率相應(yīng)升高，其中對照組、1和2 mg/kg黃曲霉毒素B1組死亡率分別是4%、12%和28%（P＜0.05）。各組對肉雞試驗(yàn)21 d料重比的影響無顯著差異（P＞0.05）。黃曲霉毒素B1和吸附劑水平對肉雞采食量和增重影響表現(xiàn)為顯著交互效應(yīng)（P ＜ 0.05）。

表2 各處理黃曲霉毒素B1含量

表3 吸附劑對感染黃曲霉毒素B1肉雞?生長性能的影響

2.3 吸附劑對感染黃曲霉毒素B1肉雞肝臟重量和病變評分的影響 由表4可知，隨著日糧黃曲霉毒素B1含量的增加，肉雞肝臟相對重量也表現(xiàn)為增加。2 mg/kg黃曲霉毒素B1組肉雞肝臟重量是對照組的1.6倍（P＜0.05）。2 mg/kg黃曲霉毒素B1組添加沸石粉顯著降低了肝臟重量（P＜0.05），但沸石粉+酵母細(xì)胞壁組顯著提高了肝臟體重（P＜0.05）。0.2%較0.1%吸附劑組有降低肝臟重量的趨勢（P=0.07）。肉雞飼料2 mg/kg黃曲霉毒素B1日糧較對照組和其他組顯著提高了肝臟病變評分（P＜0.05）。1和2 mg/kg黃曲霉毒素B1組添加0.2%沸石粉與對照組對肝臟病變評分的影響無顯著差異（P＞0.05），較2 mg/kg黃曲霉毒素B1組不添加吸附劑顯著降低了肝臟病變評分（P＜0.05）。

表4 吸附劑對感染黃曲霉毒素B1肉雞肝臟重量和病變評分的影響

2.4 吸附劑對感染黃曲霉毒素B1肉雞血清代謝物含量的影響 由表5可知，與對照組相比，隨著日糧黃曲霉毒素B1含量的升高，血清葡萄糖、白蛋白、總蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶、鈣和磷含量顯著降低（P＜0.05），各組對血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、磷酸肌酸激酶、尿素氮、鈉和氯含量的影響無顯著差異（P＞0.05）。黃曲霉毒素B1和吸附劑添加水平對血清堿性磷酸酶和鉀水平的影響表現(xiàn)為顯著交互作用（P＜0.05）。與沸石粉+酵母細(xì)胞壁組相比，沸石粉組顯著提高了血清白蛋白、總蛋白、球蛋白、堿性磷酸酶、葡萄糖、鉀、鈣和尿素氮含量（P＜0.05）。

3 討論

霉菌毒素污染對畜牧業(yè)會造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，同時毒素污染也是一個食品安全問題，因?yàn)槊咕舅貢埩粼谌?、蛋和奶中。家禽中霉菌毒素最顯著的經(jīng)濟(jì)成本是降低生長速度，提高死亡率，這在本試驗(yàn)結(jié)果中也得到證實(shí)。黃曲霉毒素B1對飼料轉(zhuǎn)化率的影響可能是由于霉菌毒素影響適口性，排斥飼料采食，這可能是一種機(jī)體的自我保護(hù)機(jī)制（Rauber等，2007）。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，沸石粉可以緩解黃曲霉毒素B1對采食量的抑制，使1 mg/kg黃曲霉毒素B1組采食量可以恢復(fù)到對照組的90%，但對2 mg/kg黃曲霉毒素B1組采食量無顯著影響。沸石粉+酵母細(xì)胞壁對黃曲霉污染日糧特別是高劑量污染組的脫毒效果不明顯，可能與酵母細(xì)胞壁對毒素結(jié)合的飽和度或束縛能力有限，以及酵母細(xì)胞壁的濃度和劑量有關(guān)，這與Kutz等（2009）在奶牛上的研究結(jié)果一致。其發(fā)現(xiàn)112和170 μg/kg黃曲霉B1污染日糧中添加0.5%沸石粉+酵母細(xì)胞壁對牛奶中殘留的黃曲霉毒素B1含量無顯著影響。

肝臟是黃曲霉毒素B1解毒的主要器官，也是主要的靶器官。采食黃曲霉毒素B1達(dá)到2 mg/kg的家禽肝臟呈蒼白色，肝臟相對重量增加一倍，因?yàn)槭軗p肝臟合成和分泌功能蛋白較少（Miazzo等，2000）。慢性霉菌毒素中毒可以通過確定血清生化指標(biāo)的變化來判定（Oguz等，2000）。采食黃曲霉毒素B1污染日糧的家禽血糖濃度降低，這可能是與飼料攝入量減少，或與碳水化合物利用有關(guān)酶活性降低有關(guān)。Fernandez等（1994）研究發(fā)現(xiàn)，2.5 mg/kg 黃曲霉毒素B1日糧組使蛋雞血漿谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性下降36%。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肉雞采食含黃曲霉毒素B1的飼料，其血清總蛋白、白蛋白和球蛋白（蛋白質(zhì)合成指標(biāo)）的濃度降低。血清生化指標(biāo)結(jié)果與生長數(shù)據(jù)的變化基本一致，而吸附劑部分恢復(fù)了與黃曲霉毒素B1污染相關(guān)的血清生化指標(biāo)。在兩個黃曲霉毒素B1污染水平下，沸石粉比沸石粉+酵母細(xì)胞壁更有效地恢復(fù)受損血清生化指標(biāo)。此外，在恢復(fù)白蛋白、總蛋白和球蛋白合成方面，高水平的吸附劑比低水平吸附劑更有效，這表明，作為黃曲霉毒素感染的一個指標(biāo)，血清生化指標(biāo)更為敏感，可用作臨床診斷的一個重要指標(biāo)。

表5 吸附劑對感染黃曲霉毒素B1肉雞血清代謝物含量的影響

4 結(jié)論

日糧黃曲霉B1毒素污染顯著降低了肉雞采食量、體增重，導(dǎo)致高死亡率，同時導(dǎo)致肉雞肝臟增大，肝功能受損，血清蛋白、鈣、磷含量和堿性磷酸酶活性降低。在本試驗(yàn)條件下，沸石粉和沸石粉+酵母細(xì)胞壁均能有效緩解低黃曲霉毒素B1污染水平（1 mg/kg）的負(fù)面影響，且沸石粉對2 mg/kg 黃曲霉毒素B1的緩解作用強(qiáng)于酵母細(xì)胞壁。