張世蘭

一、材料與方法

（一）材料與試劑

蔬菜和水果購于河南省鄭州市農(nóng)貿(mào)市場;乙腈、甲醇、二氯甲烷（色譜純，默克股份兩合公司）;氯化鈉（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）;SupelcleanTM LC-NH2 SPE柱（美國Supelco公司）。

30種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度均為1000μg/mL，多菌靈農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度為 500μg/mL，均購于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所 （天津），取各標(biāo)準(zhǔn)品體積800μL，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，于-18 ℃冰箱內(nèi)避光保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液質(zhì)量體積濃度8μg/mL，分別移取一定量的各標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，用甲醇稀釋配制而成，于4 ℃冰箱內(nèi)避光保存。試驗時用空白基質(zhì)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（二）儀器與設(shè)備

Agilent 1290-6495超高效液相-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀;CLXXUVFM2超純水器;TTL-DCII氮吹儀;Silent crusher M高速分散均質(zhì)機;QL-861旋渦混合器;HC-3018R高速冷凍離心機;1%電子天平;固相萃取裝置。

（三）試驗方法

準(zhǔn)確稱?。?0.00±0.10） g樣品于50.0 mL離心管中，向其中加入3 g氯化鈉、20.0 mL乙腈，高速勻漿2 min后，5000 r/min離心5 min，準(zhǔn)確移取10.0 mL上層乙腈溶液，置于10.0 mL具塞玻璃離心管中，氮吹蒸發(fā)至近干，加入2.0 mL甲醇+二氯甲烷溶解殘渣，待凈化。將SPE柱用5.0 mL甲醇+二氯甲烷預(yù)淋洗，倒入上述待凈化溶液中，然后用15.0 mL刻度離心管收集洗脫液，用5.0 mL甲醇+二氯甲烷洗刻度離心管后過柱，并重復(fù)2次。氮吹蒸發(fā)至近干，用乙腈+水準(zhǔn)確定容至5.0 mL，混勻過0.22 μm濾膜，待測。

二、結(jié)果與討論

（一）質(zhì)譜條件的優(yōu)化

對31種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析，通過Agilent MassHunter Optimizer 軟件進(jìn)行優(yōu)化，獲得DMRM采集參數(shù)，包括1個母離子和2個碎片離子信息及其對應(yīng)的最佳碰撞能量，選擇響應(yīng)值最高的子離子作為定量離子，另一個作為定性離子。優(yōu)化后的采集參數(shù)見表1，其中“*”為定量離子。利用優(yōu)化后的采集參數(shù)對包菜基質(zhì)中31種農(nóng)藥進(jìn)行分離。

（二）色譜條件的優(yōu)化

試驗采用Agilent Eclipse Plus C18色譜柱（1.8μm，3.0 mm×50 mm）對31種農(nóng)藥進(jìn)行分離，考察了不同流動相對31種農(nóng)藥測定的影響。結(jié)果表明：5 mmol/L乙酸銨+0.10%甲酸水溶液，水作為流動相A，乙腈、甲醇作為流動相B，乙腈分離效果明顯優(yōu)于甲醇;乙酸銨能夠得到較好的峰形，同時加入甲酸能夠提高目標(biāo)物的響應(yīng)值。試驗進(jìn)一步考察了乙酸銨溶液中甲酸體積分?jǐn)?shù)（0.00%、0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%）對色譜峰的影響。試驗結(jié)果表明： 5 mmol/L乙酸銨+0.10%甲酸水溶液和乙腈為最佳流動相。

（三）基質(zhì)效應(yīng)

由于果蔬樣品基質(zhì)復(fù)雜，進(jìn)行前處理時提取液中的無機物和有機物會對目標(biāo)化合物的離子化程度產(chǎn)生很大影響。因此，本試驗通過比對基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率和溶劑匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率來考察基質(zhì)效應(yīng)。由表2可以看出，滅蠅胺、啶蟲脒、阿維菌素基質(zhì)效應(yīng)<0.8，為基質(zhì)抑制效應(yīng);滅多威、氯吡脲基質(zhì)效應(yīng)>1.2，為基質(zhì)增強效應(yīng);其余26種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)在0.8～1.2，基質(zhì)效應(yīng)可忽略。因此，應(yīng)采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行實際樣品的定量測定。

（四）工作曲線與檢出限

試驗選用空白包菜樣品的提取液配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，以消除基質(zhì)效應(yīng)的影響。以各化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，定量離子的峰面積為縱坐標(biāo)繪制工作曲線，計算其線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)，在5～500μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，各目標(biāo)化合物的線性關(guān)系良好，線性回歸相關(guān)系數(shù)結(jié)果見表2。以3倍信噪比和10倍信噪比計算各化合物在基質(zhì)中的檢出限（3S/N）和定量限（10S/N）。如表2所示，31種農(nóng)藥的檢出限和定量限分別為0.015 4～0.237 1 μg/kg和0.051 4～0.790 4 μg/kg，其中定量限均低于我國相關(guān)規(guī)定中最高殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。

（五）精密度和回收試驗

按試驗方法對包菜空白樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗，添加3個水平（0.02 mg/kg、0.08 mg/kg和0.4 mg/kg），每個水平做6個平行樣品。其平均回收率和測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）見表3。由表3可知，31種農(nóng)藥平均回收率為62%～120%，RSD為1.2%～12.6%，表明本方法準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好，能夠滿足日常檢測需求。

三、結(jié)論

本試驗采用固相萃取裝置凈化，經(jīng)氮氣吹干后用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行測定，優(yōu)化了不同提取溶劑、混勻方式、流動相對回收率的影響。該方法靈敏度高、穩(wěn)定性好，在13 min內(nèi)能夠快速對31種農(nóng)藥進(jìn)行定量，適用于果蔬中多種農(nóng)藥殘留的同時檢測分析。