林長彬 白瑪玉珍 強巴卓嘎 歐珠 旦宗 陳建 夏陳 鄧俊琳

摘?要：對13份西藏藏木香中黃酮、多酚、土木香內(nèi)酯、異土木香內(nèi)酯含量進行測定，結(jié)果表明：13份西藏藏木香中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯最高含量分別為44.22、45.45mg/g，不同藏木香樣品之間土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量均存在顯著差異，且土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）;13份西藏藏木香中多酚與黃酮含量均較高，最高含量分別為1 602.24、60.66mg/100g，且多酚含量均高于黃酮含量。

關(guān)鍵詞：西藏;藏木香;活性成分;產(chǎn)地;比較

本研究通過對13份西藏藏木香中土木香內(nèi)酯、異土木香內(nèi)酯、黃酮、多酚等活性成分含量進行測定并分析，為西藏藏木香功能性食品的研究與開發(fā)提供科學依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?材料

通過對西藏藏木香種植現(xiàn)狀的考察調(diào)研，發(fā)現(xiàn)其種植主要集中在山南地區(qū)，林芝以及日喀則也部分種植，因此，本試驗主要以山南、林芝以及日喀則為采樣地，采集到13份西藏藏木香作為試驗樣品（表1）。樣品經(jīng)粉碎、過40目篩，于-18℃凍藏備用。

1.2?試劑

土木香內(nèi)酯、異土木香內(nèi)酯、蘆丁和沒食子酸對照品，北京索萊寶科技有限公司;福林酚，北京索萊寶科技有限公司;色譜純乙腈、甲醇（MREDA美國）、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、無水乙醇、甲醇、磷酸等（均為分析純），成都市科龍化工試劑廠。

1.3?儀器與設(shè)備

FA2104型電子天平，上海舜宇恒平科學儀器有限公司;FW-100高速萬能粉碎機，北京科偉永興儀器有限公司;TD-4Z型臺式低速離心機，四川蜀科儀器有限公司;KH2200DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司;ELX-800型號酶標儀，美國伯騰儀器有限公司;1260型高效液相色譜儀，美國Agilent公司;UV-6100型號紫外分光光度計，上海元析儀器有限公司。

1.4?方法

1.4.1?總黃酮含量的測定?參照陳克克等[1]的方法，提取樣品中的黃酮，于510 nm波長處測定吸光值。以蘆丁溶液的質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標（x）、吸光值為縱坐標（y），繪制標準曲線。蘆丁線性回歸方程為：y=5.208x+0.041，R2=0.999。

1.4.2?多酚含量的測定?參照Okarter等[2]和Nuntla等[3]的方法，分別提取樣品中的游離多酚和結(jié)合多酚，參照Chu等[4]的方法，在10mL試管中，加入10μL的沒食子酸標準溶液或適當稀釋后的多酚樣品提取液，加入20μL福林酚試劑，混合均勻。放置5min后，加入質(zhì)量分數(shù)為5% Na2CO3溶液160μL。室溫下避光反應(yīng)60min后，在765nm波長下測定混合液吸光值。以沒食子酸溶液的質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標（x）、吸光值為縱坐標（y），繪制標準曲線。沒食子酸線性回歸方程為：y=0.004x+0.082，R2=0.999。

1.4.3?土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量測定?土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的測定采用高效液相色譜法，參考肖遠燦等[5]的方法稍作修改，取藏木香藥材粉末1.00g于100mL具塞三角瓶中，加80%甲醇溶液8mL，40℃超聲40min后，冷卻，在6 000r/min條件下離心10min，收集上清液，殘渣再提取2次，合并3次提取液并定容至25mL量瓶中，稀釋5倍后搖勻經(jīng)微孔濾膜過濾后進樣分析。色譜條件：色譜柱ZORBAX Eclipse XDB-C18（250mm×4.5mm，5.0μm），流動相：乙腈-0.04%磷酸溶液（55∶45）、檢測波長200nm、體積流量0.8mL/min、柱溫30℃，進樣量5μL。以峰面積為縱坐標（y）、相應(yīng)異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量為橫坐標（x），作回歸曲線，繪制標準曲線。異土木香內(nèi)酯回歸曲線方程及相關(guān)系數(shù)為：y=22.597x-46.018，R2=0.999 6;土木香內(nèi)酯回歸曲線方程及相關(guān)系數(shù)為：y=21.981x-44.369，R2=0.999 6（附圖）。

1.5?數(shù)據(jù)處理

所有實驗結(jié)果以平均值±標準差表示，顯著性差異用多重比較法中的標記字母法表示，采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，顯著性水平為P<0.05。

2?結(jié)果與分析

2.1?黃酮含量

由表2可知，黃酮含量在27.60～60.66mg/100g內(nèi)，與楊月琴等[6]所采集的青海省藏木香中黃酮含量（28.00mg/100g）以及趙永明等[7]通過優(yōu)化土木香根中總黃酮提取工藝，在最佳工藝條件下可得到的總黃酮浸出量（14.41mg/g）相比，本試驗所采集到的13份西藏藏木香中均含有較高的黃酮，最高可達到60.66mg/100g。此外，13份藏木香中黃酮含量變異系數(shù)為22.92%，較大的變異系數(shù)說明不同地區(qū)藏木香中黃酮含量差異較大，結(jié)合表3可以看出，不同區(qū)域的藏木香中黃酮含量可能是由于不同地域品種在不同生態(tài)條件下合成存在差異所致。這可能是由于地域差異所導致的生長條件對藏木香中黃酮含量具有顯著的影響[8]。

2.2?多酚含量

多酚含量的高低對于藏木香的保健價值同樣具有重要的意義[9]。目前尚未有文獻對藏木香中多酚含量進行測定分析，由表2可知，13份藏木香中多酚含量在461.11～1 602.24mg/100g之間，并且其含量的變異系數(shù)為37.02%，說明多酚含量較受地域條件影響更大。與黃酮含量表現(xiàn)相一致的是，西藏不同區(qū)域的藏木香中多酚含量之間同樣存在顯著差異，其中，山南地區(qū)的藏木香中多酚含量普遍較高，此外，還發(fā)現(xiàn)西藏藏木香中多酚含量均高于黃酮含量。

2.3?土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量

不同的生長條件對藏木香中有效成分的含量有明顯的影響[10]。由表4可知，利用高效液相色譜法對西藏不同區(qū)域的13份藏木香進行測定，發(fā)現(xiàn)土木香內(nèi)酯的含量在13.57～44.22mg/g內(nèi)，而異土木香內(nèi)酯含量在12.21～45.45mg/g內(nèi)，這與文獻所報道的范圍基本一致[5，11-13]，但其含量普遍較高，這可能是由于測定方法之間的差異所造成的。陳曉紅[14]利用GC法測定了不同產(chǎn)地的藏木香中異土木香內(nèi)酯含量為28mg/g。趙永明等[15]利用HPLC法優(yōu)化工藝測定土木香根中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯提取量分別為30.53、19.67mg/g，同時較高的含量也可能是西藏藏木香品種優(yōu)良所造成的。不同區(qū)域的藏木香中異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量之間表現(xiàn)出顯著差異，這說明環(huán)境因素對藏木香中異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量有著較大的影響，因而有研究認為，可以試圖通過嚴格控制和調(diào)整種植條件來提高藏木香中有效成分的含量[13]。對不同生長年份的藏木香中土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯含量進行比對分析，發(fā)現(xiàn)這2種物質(zhì)含量在藏木香中呈現(xiàn)如下規(guī)律：1年生的藏木香（山南拉康，Z4）>2年生的藏木香>3年生藏木香（山南日當，Z6），即藏木香生長越久，其土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯含量可能越少，這與續(xù)艷麗等[16]的研究結(jié)果相反（隨著生長年份的增加，藏木香中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯逐漸增加）。由于本試驗中1年、3年生藏木香采樣量太小，對于藏木香生長年份對其土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯的影響，還有待進一步研究。此外，除了編號為Z3、Z6、Z7、Z8、Z10、Z11的藏木香外，其余藏木香中異土木香內(nèi)酯含量均高于土木香內(nèi)酯含量，這與文獻所報道的藏木香中異土木香內(nèi)酯含量高于土木香內(nèi)酯含量相一致[16-17]。通過相關(guān)性分析還發(fā)現(xiàn)，藏木香中異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量之間呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)（P<0.01），相關(guān)系數(shù)高達0.907 1，這說明異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯具有較強的關(guān)聯(lián)性，這為藏木香中有效成分的開發(fā)利用研究提供了科學依據(jù)。

3?結(jié)論與展望

本研究結(jié)合目前對藏木香中主要活性成分的研究現(xiàn)狀，對13份西藏藏木香中的黃酮、多酚、異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯的含量測定分析發(fā)現(xiàn)，西藏藏木香中多酚、黃酮含量普遍較高，其中異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量與文獻報道的基本一致，但其含量普遍高于其他產(chǎn)地藏木香，表現(xiàn)極高的藥用價值與保健價值，這為今后西藏藏木香作為保健食品的開發(fā)與利用提供了科學依據(jù)。

參考文獻

[1]陳克克，強毅.陜西山楂總黃酮的含量測定[J].光譜實驗室，2013，30（6）：3013-3016.

[2]Okartern，Liu Chang-shu，Sorrells M E，et al.?Phytochemical content and antioxidant activity of six diverse varieties of whole wheat[J].Food Chemistry，2010，119（1）：249-257.

[3]Nuntila A M，Kammiovi Rta K，Oksman-caldentey K M.?Comparison of methods for the hydrolysis offlavonoids and phenolic acids from onion and spinach for HPLC analysis[J].Food Chemistry，2002，76（4）：519-525.

[4]Chu Y F，Sun J，Wu X Z，et al.Antioxidant and antiproliferative activities of common vegetables[J].Journal of Agricultural and Food Chemistry，2002，50（23）：6910-6916.

[5]肖遠燦，胡鳳祖.RP-HPLC測定藏木香中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量[J].中國藥學雜志，2007，42（7）：491-493.

[6]楊月琴，等.青藏高原藏木香總黃酮提取工藝研究及含量測定[J].食品工業(yè)科技，2011，32（2）：251-253.

[7]張婷，陳若蕓.藏木香的化學成分研究[J].中國藥學雜志，2011，46（15）：1159-1162.

[8]何淑玲，馬令法，常毓巍，等.灌溉量對藏木香產(chǎn)量、品質(zhì)、水分利用效率的影響[J].節(jié)水灌溉，2012（1）：8-10.

[9]秦曉曉.蘋果屬觀賞海棠類黃酮種類、代謝及生物活性分析[D].重慶：西南大學，2016.

[10]何淑玲，包富貴，常毓巍，等.去薹對藏木香產(chǎn)量和品質(zhì)的影響[J].林業(yè)科技通訊，2011（3）：39-41.

[11]熱增才旦，王英鋒，郭雪清，等.氣相色譜法測定藏木香藥材中土木香內(nèi)酯的含量[J].首都師范大學學報（自然科學版），2008，29（5）：34-36.

[12]王英鋒，譚湘湘，郭雪清，等.氣相色譜法測定藏木香中異土木香內(nèi)酯的含量[J].首都師范大學學報（自然科學版），2008，29（1）：43-45.

[13]楊月琴.藏木香栽培品種藥用成分研究[D].河南洛陽：河南科技大學，2009.

[14]陳曉紅.GC法測定不同產(chǎn)地藏木香藥材中異土木香內(nèi)酯含量[J].青海醫(yī)學院學報，2009，30（1）：51-53.

[15]趙永明，張敬，王哲，等.土木香根中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的微波輔助提取工藝優(yōu)化[J].中國實驗方劑學雜志，2013，19（8）：30-33.

[16]續(xù)艷麗，等.RP-HPLC測定不同生長年份栽培藏木香主要活性成分含量[C].西北地區(qū)色譜年會，2010.

[17]侯志飛，張勉之，李洪，等.高效液相色譜法測定祁木香藥材中異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯[J].中草藥，2011，42（5）：916-918.

（責任編輯?李婷婷）