趙用　劉佳　馬寶東　陳巖松　張宏　喬敏　甘雨

〔摘要〕 目的 觀察苓澤合劑對(duì)尿酸鈉誘導(dǎo)的大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的抗炎作用，并探討其作用機(jī)制。方法 將80只Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、芬必得組、苯溴馬隆組、痛風(fēng)定組及苓澤合劑低、中、高劑量組，每組10只。用尿酸鈉誘導(dǎo)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎，測(cè)定血清中白細(xì)胞介素-6（interlenkin 6， IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）的含量。結(jié)果 與模型組比較，各給藥組血清中IL-6與TNF-α的含量均顯著降低（P<0.01） 。苓澤合劑中劑量組、高劑量組與低劑量組比較，血清中 IL-6、TNF-α的含量明顯下降（P<0.05）。結(jié)論 苓澤合劑可抑制急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠IL-6、TNF-α的表達(dá)，治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。

〔關(guān)鍵詞〕 苓澤合劑;痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎;IL-6;TNF-α。

〔中圖分類號(hào)〕R285.5;R684.3? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.01.007

Effect of Lingze Mixture on Serum Levels of IL-6 and TNF-α in Rats with Acute Gouty Arthritis

ZHAO Yong， LIU Jia， MA Baodong*， CHEN Yansong， ZHANG Hong， QIAO Min， GAN Yu

（Department of Rheumatology， The Second Affiliated Hospital of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine， Shenyang， Liaoning 110034， China）

〔Abstract〕 Objective To explore the anti-inflammatory effect of Lingze Mixture on monosodium urate （MSU） crystal-induced gouty arthritis in rats and its mechanism of action. Methods Eighty Wistar rats were randomly divided into blank group， model group， fenbid group， benzbromarone group， Tongfengding group， and traditional Chinese medicine （TCM） Lingze Mixture groups （low， medium， and high doses）， with ten rats in each group. A rat model of gouty arthritis was established by MSU crystals. Then the serum levels of interleukin-6 （IL-6） and tumor necrosis factor-α （TNF-α） were determined. Results Compared with the model group， levels of IL-6 and TNF-α in serum in each model group were significantly decreased （P<0.01）. Compared with the low-dose Lingze Mixture group， the medium-and high-dose Lingze Mixture groups had significantly reduced serum levels of IL-6 and TNF-α （P<0.05）. Conclusion Lingze Mixture can inhibit the expression of IL-6 and TNF-α in rats with acute gouty arthritis， thus achieving the aim of preventing and alleviating gouty arthritis.

〔Keywords〕 Lingze Mixture; gouty arthritis; interleukin-6; tumor necrosis factor-α

痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是由于血尿酸升高而導(dǎo)致尿酸鹽（monosodium urate，MSU）在關(guān)節(jié)囊、滑囊、軟骨、骨質(zhì)和其他組織中形成微晶體沉淀，引起非特異性的炎性反應(yīng)[1]，MSU在關(guān)節(jié)周圍組織沉積，刺激局部組織細(xì)胞膜形成破裂，引起白細(xì)胞的活化和吞噬，產(chǎn)生大量炎性細(xì)胞，釋放白細(xì)胞介素-6（interlenkin 6， IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）等細(xì)胞因子，導(dǎo)致如局部血管擴(kuò)張、白細(xì)胞集聚、血漿滲出、滲透性增加等一系列的連鎖炎癥反應(yīng)，局部組織易被溶解侵蝕，使痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎患者出現(xiàn)劇烈疼痛，局部紅腫發(fā)熱的癥狀[2-4]。本病在中醫(yī)學(xué)屬于“歷節(jié)病”“痹證”等范疇[5]，苓澤合劑為我院協(xié)定方，臨床用治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎十余年，由土茯苓、澤瀉、蒼術(shù)等9味中藥組成，有清熱消腫、利濕除痹、通絡(luò)止痛之功。本實(shí)驗(yàn)采用MSU引起急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型[6]，觀察苓澤合劑對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠血清中IL-6和TNF-α含量的影響，以探討苓澤合劑對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎治療的部分作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

80只健康雄性Wistar大鼠，質(zhì)量（200±20）g，由遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司購(gòu)入，公司許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001。

1.2? 實(shí)驗(yàn)藥物

苓澤合劑（組成：土茯苓30 g，澤瀉30 g，川黃柏20 g，蒼術(shù)15 g，知母25 g，生姜10 g，當(dāng)歸20 g，白芍15 g，紅花15 g），由遼寧中醫(yī)藥大學(xué)制劑中心制備，生藥濃度4.3 g/mL;芬必得，由中美天津史克制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：16110441，規(guī)格：0.3 g/粒;苯溴馬隆片，Excella GmbH（德國(guó)，昆山龍燈瑞迪制藥有限公司分裝），批號(hào)：1604591，規(guī)格：50 mg/片;痛風(fēng)定膠囊，四川升和藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：1609104，規(guī)格：0.4 g/粒;尿酸鈉，美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：1122B052，規(guī)格：10 mg/瓶。

1.3? 儀器與試劑

BS6005型電子天平（上海友聲衡器有限公司），BSZOOS型電子天平（北京賽多利斯天平有限公司），RB-200型智能熱板儀（淮北正華生物儀器有限公司），UV1700紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司），Anke TDL-60C離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），IL-6、TNF-α試劑盒（北京奇松生物科技有限公司）。

1.4? 造模方法

取尿酸鈉研磨成粉，過(guò)篩，用滅菌注射用水制成100 mg/mL尿酸鈉溶液。參考相關(guān)文獻(xiàn)[6]，在無(wú)菌條件下，模型組和各給藥組將配制好的尿酸鈉溶液0.1 mL用6號(hào)注射針注入大鼠右后足跖皮下?？瞻捉M大鼠給予同體積生理鹽水。

1.5? 給藥方法

按照“人與動(dòng)物體表面積換算的等效劑量”換算方法計(jì)算大鼠給藥量，將80只大鼠按每組10只隨機(jī)分成空白組、模型組、芬必得組（0.144 g/kg）、苯溴馬隆組（18 mg/kg）、痛風(fēng)定組（0.86 g/kg）、苓澤合劑中劑量組（33.30 g/kg）、低劑量組（50%中劑量組藥量，即16.65 g/kg）、高劑量組（200%中劑量組藥量，即66.60 g/kg）。給藥組大鼠按上述劑量口服給予相應(yīng)藥物20 mL/kg，空白組和模型組給予同體積的蒸餾水，1次/d，連續(xù)給藥7 d。末次給藥后30 min造模，24 h后取血檢測(cè)相應(yīng)檢查指標(biāo)。

1.6? 指標(biāo)檢測(cè)

造模后4 h眼眶取血2 mL，以4 000 r/min離心15 min，按試劑盒檢測(cè)步驟及方法，采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）成批檢測(cè)大鼠血清中IL-6、TNF-α的含量。

1.7&nbsp; 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用“x±s”表示，采用單因素方差分析比較多組樣本的差異，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

與空白組相比較，模型組血清IL-6、TNF-α含量均顯著升高（P<0.05），表明造模成功;與模型組相比較，各給藥組血清中IL-6、TNF-α含量均顯著降低（P<0.01）;與苓澤合劑低劑量組比較，苓澤合劑中、高劑量組血清中IL-6、TNF-α含量顯著降低（P<0.05）;苓澤合劑中劑量組和高劑量組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

現(xiàn)代研究認(rèn)為，急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的根本原因是高尿酸血證及其導(dǎo)致的關(guān)節(jié)局部MSU結(jié)晶的析出。在急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中，作為炎癥趨化因子和激活因子的IL-6、TNF-α起重要作用。IL-6是多功能炎性細(xì)胞因子，是炎性介質(zhì)網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵成分，在炎癥反應(yīng)中起重要作用。IL-6不僅參與炎癥反應(yīng)，增加滑膜組織的炎癥細(xì)胞，而且直接導(dǎo)致炎癥，同時(shí)也通過(guò)促進(jìn)其他炎癥介質(zhì)的釋放間接導(dǎo)致炎癥，并可趨化激活中性粒細(xì)胞。由此可見(jiàn)，IL-6既是炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)，更是調(diào)節(jié)炎癥的始動(dòng)因素，在急慢性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的病程中，都起著極為重要的作用，更有學(xué)者將 IL-6作為判斷痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎疾病活動(dòng)性和嚴(yán)重程度的指標(biāo)[7]。TNF-α主要由單核巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞分泌，為介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的核心物質(zhì)和前炎癥網(wǎng)鏈中的一級(jí)細(xì)胞因子。一般認(rèn)為，中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞黏附是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎產(chǎn)生的本質(zhì)，TNF-α可增加中性粒細(xì)胞的募集，上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞選擇素活性，使中性粒細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表面的黏附分子結(jié)合，為促炎癥介質(zhì)，可對(duì)局部部位產(chǎn)生浸潤(rùn)，導(dǎo)致炎性介質(zhì)釋放，引起關(guān)節(jié)局部如紅腫熱痛等炎癥反應(yīng)。TNF-α水平的變化既是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的機(jī)制，也可反映關(guān)節(jié)炎癥反應(yīng)的輕重，已被用于治療痛風(fēng)藥物療效評(píng)價(jià)[8-9]。由上述發(fā)病機(jī)制可見(jiàn)，IL-6、TNF-α在痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的炎癥病情中發(fā)揮著重要的作用。因此，抑制兩者產(chǎn)生并阻斷其所介導(dǎo)和激發(fā)的炎癥過(guò)程，對(duì)緩解急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎病情有積極意義。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病的病因或?yàn)轱嬍巢还?jié)，嗜食肥甘厚味;或?yàn)槠⒛I虧虛，導(dǎo)致濕熱內(nèi)蘊(yùn)，由外感風(fēng)寒或日久化瘀，致?tīng)I(yíng)衛(wèi)行澀，濕熱瘀阻，經(jīng)絡(luò)不通，痹阻經(jīng)絡(luò)[10]。治療應(yīng)以清熱消腫、利濕除痹、通絡(luò)止痛為主。苓澤合劑由土茯苓、澤瀉、知母、蒼術(shù)、川黃柏、當(dāng)歸、紅花、生姜和白芍九味中藥組成。方中土茯苓、澤瀉清熱、消腫、利濕，為君藥，兩者均具有較強(qiáng)的抗炎作用，土茯苓鎮(zhèn)痛作用較強(qiáng)，澤瀉亦可利尿[11-12]。知母、蒼術(shù)、川黃柏清熱、利濕，為臣藥。三者均有減輕炎癥損傷的藥理作用，知母還可保護(hù)血管內(nèi)皮、抑制血管通透性、減輕水腫，蒼術(shù)有明確的抑制IL-6、TNF-α及IL-8、PGE2等炎性因子的作用，川黃柏還可保護(hù)腎臟、抑制免疫等[13-15]。當(dāng)歸、紅花活血除痹、通絡(luò)止痛，為佐藥。兩者除減輕炎癥損傷及拮抗多種炎癥因子外，當(dāng)歸還具有鎮(zhèn)痛等功效[16-17]。生姜、白芍一溫中化濕，一緩急止痛，為使藥，兩者均具抗炎等功效，白芍還有調(diào)和諸藥、鎮(zhèn)痛、抗自身免疫病等作用[18-19]。上述諸藥合用，共奏清熱消腫、利濕除痹、通絡(luò)止痛之功，其現(xiàn)代藥理學(xué)作用也部分揭示苓澤合劑在治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎過(guò)程中的基本作用機(jī)制。

近年來(lái)，我國(guó)高尿酸血癥及痛風(fēng)的患病率逐年增加。西醫(yī)目前用于治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物主要為秋水仙堿和非甾體類抗炎藥，其胃腸道不良反應(yīng)較多，常有肝腎損害，嚴(yán)重者可出現(xiàn)骨髓抑制。中藥湯劑苓澤合劑藥味組合簡(jiǎn)單常見(jiàn)，有較高的安全性，且性價(jià)比適宜，治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎療效明確，值得臨床推廣。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉安寧，張高生，黃? 晶，等.香芹酚對(duì)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎中血清炎性因子及軟骨細(xì)胞凋亡的影響[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，16（6）：531-534.

[2] TONY M. Genomic Influences on Hyperuricemia and Gout[J].Rheumatic Disease Clinics of North America， 2017，43（3）：389-399.

[3] 陸小龍，曾? 朋，向黎黎，等.蠲痹歷節(jié)清酊對(duì)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型滑膜組織中ICAM-1、NF-κB表達(dá)的影響[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，37（12）：1299-1302.

[4] 周? 彪，郭玉星，陸小龍，等.蠲痹歷節(jié)清方對(duì)大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)腫脹指數(shù)和滑膜組織中炎癥因子的影響[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，40（3）：15-18，32.

[5] 張劍勇，王? 輝，謝靜靜，等.痛風(fēng)泰顆粒對(duì)急性痛風(fēng)大鼠IL-1、IL-6及TNF-α含量的影響[J].新中醫(yī)，2016，48（12）：201-203.

[6] DHANASEKAR C，RASOOL M. Morin， a dietary bioflavonol suppresses mon-osodium urate crystal-induced inflammation in an animal model of a-cute gouty arthritis with reference to NLRP3 inflammasome，hypo-xan-thine phosphor-ribosyl transferase，and inflammatory mediators[J]. Eur J Pharmacol，2016，7（86）： 116-127.

[7] FERNANDO M， GIEMBYCZ M， MC K. Bidirectional crosstalk via IL-6，PGE2 and PGD2 between murine myofibroblasts and alternative-ly activated macrophages enhances anti-inflammatory phenotype in both cells[J]. Br J Pharmacol，2016，173（5）： 899-912.

[8] 劉昌盛，陳? 昉，何? 穎，等.白子菜提取物對(duì)急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型抗炎作用的研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，36（8）：26-29，81.

[9] GAO F， YANG Y， FENG X， et al. Interleukin-27 is elevated in sepsis-induced myocardial dysfunction and mediates inflammation[J]. Cyto-kine，2016，8（8）： 1-11.

[10] 謝興文，王春亮，徐世紅，等.忍冬藤痛風(fēng)顆粒對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠MMP-3和LP-PLA2的影響[J].中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志，2016，24（2）：6-8.

[11] 侯瑋婷，羅佳波.復(fù)方茯苓多糖口服液抗腫瘤作用和免疫調(diào)節(jié)功能的初步研究[J].中藥藥理與臨床，2017，32（2）：78-81.

[12] 汪錦飄，劉永茂，何志超，等.澤瀉乙醇提取物對(duì)氧嗪酸鉀鹽致大鼠高尿酸血癥模型的影響[J].中成藥，2017，39（3）：605-608.

[13] 林? 彬.黃柏生品與各種炮制品滋陰及抗痛風(fēng)作用比較[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2017，29（19）：3304-3305.

[14] 龐? 雪，劉玉強(qiáng)，才? 謙，等.蒼術(shù)麩炒前后活性部位藥效比較研究[J].中國(guó)藥房，2016，27（10）：1308-1311.

[15] 司曉麗，王? 燕，黨文呈，等.百合知母湯對(duì)支氣管哮喘大鼠氣道炎癥的影響[J].中醫(yī)雜志，2017，58（14）：1499-1502.

[16] 李? 琴.當(dāng)歸拈痛湯加減聯(lián)合刺絡(luò)放血法治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎臨床觀察[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2017，38（3）：18-19.

[17] 張彥麗，張碩峰，華國(guó)棟，等.紅花對(duì)華法林抗凝作用的影響[J].中醫(yī)藥信息，2016，33（1）：32-35.

[18] 姜衛(wèi)星，王海燕，索成云，等.生姜醇提取物對(duì)肝臟缺血再灌注大鼠氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[J].中醫(yī)藥信息，2017，34（2）：9-13.

[19] 李振彬，馬? 旭，楊? 靜，等.白芍總苷治療大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用及對(duì)血清IL-1β、IL-6、TNF-α的影響[J].新醫(yī)學(xué)，2017，48（6）：380-384.