劉立果

摘要：以‘楊氏金紅50號(hào)獼猴桃組培苗為材料，進(jìn)行生根培養(yǎng)、煉苗移栽研究。結(jié)果表明：‘楊氏金紅50號(hào)獼猴桃生根培養(yǎng)中，愈傷組織塊小的組培苗生根數(shù)多、根較長(zhǎng)，且根深入培養(yǎng)基內(nèi)部，易成活。生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+0.9mg/L IBA，愈傷組織直徑為1.03cm，生根率100%，生根數(shù)12.58條，根長(zhǎng)3.19cm。培養(yǎng)室開蓋煉苗7d后進(jìn)行細(xì)沙栽培，細(xì)沙培養(yǎng)到根布滿培養(yǎng)瓶時(shí)移栽至黑色腐殖土的田園土中，以成活率高。

關(guān)鍵詞：獼猴桃;組培苗;生根;煉苗;移栽

近年來(lái)，中華獼猴桃以其優(yōu)良的口感廣受歡迎，人工栽培規(guī)模日趨增大?！畻钍辖鸺t50號(hào)獼猴桃是江蘇省揚(yáng)州楊氏獼猴桃研究所選育的品種，果皮呈淺黃綠色，果肉呈淡黃色，果心呈紅色，果實(shí)外形整齊端正，平均單果重104g左右，最大果重164.3g，耐儲(chǔ)存，口感極佳，營(yíng)養(yǎng)豐富，富含維生素C，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

獼猴桃傳統(tǒng)的育苗方法育苗時(shí)間長(zhǎng)，成活率低，難以滿足市場(chǎng)的需求。利用現(xiàn)代生物技術(shù)——植物組織培養(yǎng)能實(shí)現(xiàn)獼猴桃苗快速大量繁殖。目前，國(guó)內(nèi)對(duì)獼猴桃的組織培養(yǎng)研究已獲得很大進(jìn)展，在獼猴桃莖段、花藥、葉柄、葉片等器官的組織培養(yǎng)方面取得很多成果。為提高‘楊氏金紅50號(hào)獼猴桃組培苗的生根質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)以其帶芽莖段培養(yǎng)的組培苗為生根培養(yǎng)原材料，探索最佳生根培養(yǎng)方法、煉苗方法，提高移栽成活率，為獼猴桃的工廠化育苗提供技術(shù)指導(dǎo)。

一、材料與方法

以南陽(yáng)師范學(xué)院組織培養(yǎng)室提供的‘楊氏金紅50號(hào)獼猴桃組織培養(yǎng)苗為試驗(yàn)材料，采用以下方法進(jìn)行生根培養(yǎng)及移栽試驗(yàn)。

（一）培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件

生根培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基高度為1.5CB，pH為5.8～6.0，用高壓滅菌鍋滅菌，滅菌條件為：121℃、0.1MPa、20min。組織培養(yǎng)室溫度為25±2℃，光照為1500～2000Lx。

（二）生根培養(yǎng)

在組織培養(yǎng)室選取高度3cm左右、長(zhǎng)勢(shì)較好的獼猴桃組培苗，將其不定芽切下，接種在分別含有NAA（萘乙酸）和IBA（吲哚乙酸）的1/2 MS培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)生根，NAA、IBA二種激素濃度設(shè)置10個(gè)梯度，均為（單位：mg/L）：0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1。以1/2 MS培養(yǎng)基作為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次，每個(gè)梯度接種30株組培苗，共接種1800株，培養(yǎng)35～40d后，進(jìn)行生根率、生根數(shù)量及根長(zhǎng)統(tǒng)計(jì)。

（三）煉苗、沙培和移栽

試驗(yàn)于2018年6月開始，組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室溫度為25±2℃，普通實(shí)驗(yàn)室溫度為25～30℃。開蓋煉苗步驟如下：打開密封的瓶蓋，使每棵生根苗充分接觸光照，如煉苗過(guò)程中出現(xiàn)葉片萎焉現(xiàn)象，可適當(dāng)向培養(yǎng)基內(nèi)注入自來(lái)水，水面高度剛沒(méi)過(guò)培養(yǎng)基表面即可。開蓋煉苗，每個(gè)處理60個(gè)苗，開蓋煉苗時(shí)間0～11d不等，煉苗環(huán)境分為培養(yǎng)室開蓋煉苗、普通實(shí)驗(yàn)室開蓋煉苗兩種。

開蓋煉苗之后，進(jìn)行細(xì)沙栽培3周左右，步驟如下：在玻璃培養(yǎng)瓶中加入3/4體積的細(xì)沙，將獼猴桃組培生根苗從培養(yǎng)基中取出，用自來(lái)水洗凈苗根部的培養(yǎng)基，將生根苗栽種在細(xì)沙中，然后用自來(lái)水一次性澆透，但不能澆過(guò)量，待其快干時(shí)，再澆第二次水。細(xì)沙煉苗在普通實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，室內(nèi)通風(fēng)，自然光照，溫度為25～30℃。

將細(xì)沙栽培后根系發(fā)達(dá)、長(zhǎng)勢(shì)良好的生根苗移栽到裝有田園土的大花盆中，田園土包括黃土或腐殖土兩種，分別移栽60棵苗，然后將大花盆置于室外陽(yáng)臺(tái)，使其充分沐浴陽(yáng)光，每天澆適量水，保持花盆內(nèi)水分充足，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)成活率。

二、結(jié)果和分析

（一）組培苗生根

1、不同質(zhì)量濃度的NAA或IBA對(duì)組培苗生根的影響。NAA或IBA對(duì)組培苗的生根均有促進(jìn)作用，不加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的1/2 MS培養(yǎng)基的組培苗生根率為0;加入NAA誘導(dǎo)生根，第10d出現(xiàn)根點(diǎn)，17d后陸續(xù)出現(xiàn)不定根;IBA誘導(dǎo)生根較快，在培養(yǎng)第7d有根點(diǎn)產(chǎn)生，14d后陸續(xù)長(zhǎng)出不定根。不同濃度的NAA和IBA對(duì)組培苗生根的影響見(jiàn)表1和表2。

由表1可知，10個(gè)濃度的NAA處理中，生根率均達(dá)到了85%以上，生根效果良好。濃度（mg/L）為1.0、1.1時(shí)，生根率為100%，濃度（mg/L）為0.6、0.7、0.8時(shí)，生根率均為98.89%，濃度（mg/L）為0.5、0.9時(shí)，生根率為97.78%，這三檔生根率之間無(wú)顯著差異。

由表2可知，10個(gè)濃度的IBA處理中，生根率都達(dá)到了100%?？梢?jiàn)，在組培苗生根率方面，IBA的效果優(yōu)于NAA。

2、兩種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度對(duì)愈傷組織大小的影響。由圖1可知，NAA處理的愈傷組織塊相對(duì)較大，濃度為0.6 mg/L時(shí)愈傷組織直徑最大，0.2mg/L時(shí)，愈傷組織直徑最小，但所有的處理愈傷組織塊均大于1.5cm，因此，絕大部分的根均為附著在培養(yǎng)基表面的不定根。IBA處理中，濃度為0.2mg/L時(shí)，愈傷組織最大，濃度為0.9mg/L時(shí)，愈傷組織最小，其中，濃度為0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、1.1mg/L的愈傷組織直徑大于1.5cm，會(huì)出現(xiàn)部分附著在培養(yǎng)基表面的根，濃度為0.7、0.8、0.9、1.0mg/L的愈傷組織直徑小于1.5cm，根基本都扎在培養(yǎng)基內(nèi)部。

3、不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)組培苗生根條數(shù)的影響。由圖2可知，NAA處理的生根數(shù)均高于IBA處理，兩者的趨勢(shì)均為先隨著激素濃度的升高生根條數(shù)逐漸增加，在濃度為0.2～0.5mg/L范圍內(nèi)生根條數(shù)增加迅速，NAA處理由7.55條上升到13.71條，IBA處理由6.99條上升到11.51條;濃度在0.5～0.9mg/L范圍內(nèi)時(shí)，NAA處理增加較明顯，增長(zhǎng)幅度為2.26條，而IBA處理增長(zhǎng)幅度僅為1.07條;兩者均在0.9mg/L時(shí)達(dá)最大值，NAA處理為15.97條，IBA處理為12.58條，此時(shí)2處理的生根條數(shù)差也達(dá)最大，為3.39條。濃度大于0.9mg/L時(shí)生根條數(shù)減少，NAA處理的下降幅度大于IBA處理。可見(jiàn)，在生根數(shù)量方面，NAA處理所有濃度均優(yōu)于IBA處理，尤其濃度為0.9mg/L時(shí)，生根數(shù)量最多。

4、不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)組培苗根長(zhǎng)的影響。由圖3可知，IBA處理每個(gè)濃度的根長(zhǎng)均高于NAA處理。濃度在0.2～0.9mg/L時(shí)，兩種處理均隨著激素濃度增加根長(zhǎng)逐漸變長(zhǎng)，濃度為0.9mg/L時(shí)，兩種處理的平均根長(zhǎng)均最長(zhǎng)，IBA處理為3.19cm，NAA處理為2.87cm，差值為0.32cm;濃度在0.9～1.1mg/L時(shí)，IBA處理的根長(zhǎng)先略微降低，然后迅速降低，NAA處理的根長(zhǎng)是先降低然后又略有增加，但各濃度間的根長(zhǎng)無(wú)顯著差異。分析表明，IBA在促進(jìn)根伸長(zhǎng)方面效果更優(yōu)，濃度為0.9mg/L時(shí)根長(zhǎng)最長(zhǎng)。

綜上所述，濃度為0.9mg/L的IBA處理，生根率為100%，愈傷組織直徑最小，平均生根數(shù)最多，平均根長(zhǎng)最長(zhǎng)，說(shuō)明此濃度為IBA處理的最佳濃度。濃度為0.9mg/L的NAA處理，生根數(shù)最多，根長(zhǎng)最長(zhǎng)，且都顯著高于其它濃度的處理，愈傷組織直徑處于中等水平，生根率為97.78%，與最高的100%無(wú)顯著差異，但顯著高于其濃度以下的生根率，因此，該濃度為NAA處理的最佳濃度。

（二）開蓋煉苗

由于生根培養(yǎng)中出現(xiàn)了2種生根方式，分別對(duì)其進(jìn)行開蓋煉苗處理，每個(gè)處理60個(gè)苗。

1、開蓋煉苗對(duì)根附在培養(yǎng)基表面生根苗的影響。根附著在培養(yǎng)基表面的生根苗在開蓋煉苗時(shí)，1d內(nèi)就會(huì)出現(xiàn)葉片干焦的情況，超過(guò)4d葉片基本落完，莖也會(huì)出現(xiàn)萎焉現(xiàn)象，因此，煉苗時(shí)間應(yīng)控制在5d以內(nèi)。由于煉苗時(shí)間較短，可選擇培養(yǎng)室煉苗和普通實(shí)驗(yàn)室煉苗兩種方式，分別煉苗3d、4d，以0d為對(duì)照。煉苗過(guò)程中，培養(yǎng)室內(nèi)的培養(yǎng)基4d內(nèi)無(wú)污染，而普通實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)基第2d便有菌斑出現(xiàn)，第4d已經(jīng)有較大的菌落，少量菌落已沾在苗的根部，第5d時(shí)，菌落大面積接觸幼苗根部，嚴(yán)重影響移栽。開蓋煉苗3d、4d，此種苗的絕大部分根不能從培養(yǎng)基獲得營(yíng)養(yǎng)。

2、開蓋煉苗對(duì)根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部生根苗的影響。根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部的生根苗可進(jìn)行多天開蓋煉苗，選擇細(xì)菌相對(duì)較少的組織培養(yǎng)室內(nèi)煉苗，煉苗時(shí)間為4～11d。試驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)，在培養(yǎng)基內(nèi)部的根無(wú)明顯根毛分化，主根粗、長(zhǎng)，側(cè)根多且清晰可辨，根與根間基本不會(huì)纏繞在一起。開蓋煉苗過(guò)程中，低于4d，達(dá)不到煉苗效果，多于11d，細(xì)菌會(huì)大量污染培養(yǎng)基，導(dǎo)致生根苗無(wú)法移栽。在4～11d時(shí)，絕大部分發(fā)育完全的根開始具有吸收作用。在培養(yǎng)室內(nèi)，第6d培養(yǎng)基開始出現(xiàn)菌點(diǎn)，擴(kuò)展較慢，到第11d，一部分苗也會(huì)感染細(xì)菌導(dǎo)致無(wú)法移栽。

（三）細(xì)沙栽培

將上述2種方式開蓋煉苗不同天數(shù)的生長(zhǎng)狀況良好的生根苗轉(zhuǎn)栽至細(xì)沙中，進(jìn)行下一階段栽培，統(tǒng)計(jì)煉苗天數(shù)與移栽至細(xì)沙后成活率的關(guān)系，每個(gè)處理60個(gè)苗。

1、細(xì)沙栽培對(duì)根附著在培養(yǎng)基表面生根苗的影響。細(xì)沙栽培時(shí)，生根苗基部的葉片會(huì)先干枯脫落，再由腋芽重新萌發(fā)，長(zhǎng)出新葉，整個(gè)過(guò)程2周左右。一部分幼苗1周內(nèi)會(huì)直接枯萎死亡，一部分幼苗根部腐爛，間接導(dǎo)致死亡。不同開蓋煉苗天數(shù)對(duì)生根苗細(xì)沙栽培成活的影響見(jiàn)表3。

由表3可見(jiàn)，0d時(shí)，即直接進(jìn)行細(xì)沙栽培的生根苗成活率最低，僅20%;在普通實(shí)驗(yàn)室開蓋煉苗4d的生根苗進(jìn)入細(xì)沙煉苗后成活率最高，為66.67%。普通實(shí)驗(yàn)室煉苗效果比培養(yǎng)室煉苗效果好，3d時(shí)成活率高10%，4d時(shí)高26.67%。成活的苗，細(xì)沙栽培至6周，從瓶子外部不能看到根的明顯生長(zhǎng)，但苗生長(zhǎng)正常，挖出幼苗可發(fā)現(xiàn)大塊的愈傷組織仍然存在，但由原來(lái)的青綠色變?yōu)楹稚?。表明，根附著在培養(yǎng)基表面的幼苗，根與細(xì)沙栽培前相差不大。

2、細(xì)沙栽培對(duì)根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部生根苗的影響。不同開蓋煉苗天數(shù)對(duì)根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部生根苗的影響見(jiàn)圖4。開蓋煉苗7d時(shí)，成活率最高，達(dá)到100%，4～7d時(shí)的成活率逐步上升，7～11d時(shí)成活率下降，到第11d達(dá)到最低值，僅40%，與第10d相差35%。表明組織培養(yǎng)室內(nèi)煉苗7d的細(xì)沙栽培效果最好。在細(xì)沙栽培第2～3周時(shí)，透過(guò)透明的玻璃培養(yǎng)瓶可清楚看到根系穿過(guò)細(xì)沙，布滿培養(yǎng)瓶。

上述分析表明，根附在培養(yǎng)基表面的幼苗由于條件限制，最佳開蓋煉苗天數(shù)短，為4d，細(xì)沙栽培成活率低，僅為66.67%;根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部的幼苗開蓋煉苗7d時(shí)，細(xì)沙栽培成活率為100%，兩者細(xì)沙栽培成活率有顯著差異。可見(jiàn)，應(yīng)選擇根扎在培養(yǎng)基內(nèi)部的生根苗進(jìn)行煉苗，培養(yǎng)室內(nèi)開蓋煉苗7d，再細(xì)沙栽培2～3周。

綜合分析表明，濃度為0.9mg/L的IBA處理獲得的‘楊氏金紅50號(hào)獼猴桃生根苗為最佳的煉苗材料。

（四）田園土移栽

選擇兩種田園土基質(zhì)黃土和黑色腐殖土，移栽幼苗為0.9mg/L IBA處理獲得的愈傷組織塊小、根數(shù)較多、根長(zhǎng)較長(zhǎng)的生根苗，并進(jìn)行7d培養(yǎng)室內(nèi)開蓋煉苗，2～3周細(xì)沙栽培，選根系發(fā)達(dá)的幼苗移栽，每種基質(zhì)移栽60個(gè)苗。田園土基質(zhì)為黃土的成活率為97.78%，田園土基質(zhì)為黑色腐殖土的成活率為100%。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在黃土中移栽的幼苗澆水比較麻煩，且土粒易濺到葉子及頂芽上，若粘在頂芽上，則有可能導(dǎo)致幼苗死亡，因此，黃土移栽應(yīng)選擇莖部較長(zhǎng)的幼苗。黑色腐殖土不會(huì)出現(xiàn)上述情況，管理簡(jiǎn)單，長(zhǎng)勢(shì)也好?？梢?jiàn)，田園土基質(zhì)為黑色腐殖土更適合用于‘楊氏金紅50號(hào)獼猴桃幼苗移栽。

三、討論

在‘楊氏金紅50號(hào)獼猴桃生根時(shí)，基本培養(yǎng)基中加入IBA 0.9mg/L可促進(jìn)組培苗生根，生根率達(dá)100%，生根速度快，根數(shù)量多而長(zhǎng)、質(zhì)量好;開蓋煉苗時(shí)，根在培養(yǎng)基內(nèi)部，能充分保證根所需水分、養(yǎng)分，使其保持活性，移栽成活率高。而經(jīng)NAA處理的組培苗，由于愈傷組織過(guò)大，根生長(zhǎng)在培養(yǎng)基外表面，無(wú)法及時(shí)汲取培養(yǎng)基養(yǎng)分，在煉苗中易干枯、死亡。有關(guān)IBA與NAA誘導(dǎo)獼猴桃生根的報(bào)道較多，如，劉長(zhǎng)春等對(duì)比了NAA、IBA對(duì)‘金富獼猴桃生根的影響，指出IBA誘導(dǎo)生根時(shí)間更短，生根率高出NAA處理9.8%，最佳使用濃度為0.7mg/L;吳秀華等對(duì)培養(yǎng)‘海沃德獼猴桃生根的結(jié)果表明，相同濃度的IBA誘導(dǎo)效果好于NAA，且有促進(jìn)莖部伸長(zhǎng)的作用，最佳使用濃度為0.7mg/L;呂海燕等培養(yǎng)‘東紅獼猴桃生根時(shí)表明，0.5mg/L濃度時(shí)，IBA的誘導(dǎo)效果顯著優(yōu)于NAA，生根率為92.33%。本試驗(yàn)的結(jié)果與上述文獻(xiàn)相似，但I(xiàn)BA的濃度比上述文獻(xiàn)高，這可能是因?yàn)槠贩N差異導(dǎo)致對(duì)激素的響應(yīng)程度不同。

現(xiàn)有文獻(xiàn)中，沒(méi)有涉及愈傷組織塊大小對(duì)生根培養(yǎng)影響的研究，本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)愈傷組織直徑大于培養(yǎng)基高度時(shí)，產(chǎn)生的根附在培養(yǎng)基表面，對(duì)后續(xù)煉苗影響很大，這是因?yàn)榇祟惛m然根毛旺盛，但根系脆弱，與培養(yǎng)基接觸少，大部分根裸露在空中，瓶子開蓋后水分喪失多，而又不能吸收培養(yǎng)基中的水分和養(yǎng)分，因此，生根苗很快就會(huì)出現(xiàn)干焦的情況。愈傷組織塊直徑小于培養(yǎng)基高度時(shí)，開蓋煉苗，根會(huì)被培養(yǎng)基包裹，有充足的養(yǎng)分和水分供給，可保證開蓋煉苗時(shí)長(zhǎng)時(shí)間不會(huì)枯萎，能達(dá)到煉苗的效果。因此，在獼猴桃生根培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)控制愈傷組織大小，使多數(shù)根生長(zhǎng)在培養(yǎng)基內(nèi)部。

細(xì)沙栽培是生根苗移栽至田園土的過(guò)渡階段，此階段在自然光照、自然溫度中進(jìn)行，細(xì)沙和田園土較為相似，獼猴桃幼苗的根在生長(zhǎng)中能吸收營(yíng)養(yǎng)及水，根變得更長(zhǎng)更壯。細(xì)沙的透氣性好，但保水性差，培養(yǎng)瓶是不漏水的，利用培養(yǎng)瓶裝細(xì)沙可有效保證細(xì)沙內(nèi)的水分，彌補(bǔ)了細(xì)沙的短處。王羽悅等將細(xì)沙和蛭石配合使用，對(duì)葛棗獼猴桃組培苗煉苗30d，得到了93.3%的成活率;林苗苗等將細(xì)沙與珍珠巖、泥炭1：1：1配比組合使用進(jìn)行軟棗獼猴組培苗煉苗，得到98%的成活率。上述研究將細(xì)沙與蛭石或珍珠巖等配合使用是為了保持水分和通透性，這在原理上與本試驗(yàn)使用培養(yǎng)瓶裝細(xì)沙相似。

田園土移栽中，移栽于田園土基質(zhì)為黃土的幼苗，澆水方式至關(guān)重要，在澆水時(shí)應(yīng)注意清洗幼苗葉片附著過(guò)多的黃土。移栽于田園土基質(zhì)為黑色腐殖土內(nèi)的幼苗，腐殖質(zhì)含量多，顆粒大，營(yíng)養(yǎng)豐富，且透氣性好，澆水時(shí)濺到葉片上影響也不大，幼苗生長(zhǎng)迅速，葉片大而綠，根、莖健壯，成活率高。

（責(zé)任編輯 曹雯梅）