張寶龍 侯樹旺 趙子續(xù) 曲 木 翟勝利

天津現(xiàn)代晨輝科技集團有限公司/天津市水族動物功能性飼料企業(yè)重點實驗室，天津301800

1 材料與方法

1.1 試驗魚

試驗魚購自天津市金水族水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，選取規(guī)格一致、健康活潑的紅白錦鯉600 尾，隨機分為10 個試驗組（其中9 組為試驗組，1 組為對照組），每組3 個重復(fù)，每個重復(fù)20 尾魚，置于30 個規(guī)格為0.85 m×0.65 m×0.45 m 的循環(huán)水養(yǎng)殖箱中養(yǎng)殖。試驗魚運往天津現(xiàn)代晨輝科技集團有限公司循環(huán)水養(yǎng)殖實驗室后消毒，暫養(yǎng)1 周后分組。基礎(chǔ)飼料馴化2 周后，開始正式試驗，養(yǎng)殖周期為8 周。養(yǎng)殖過程中，養(yǎng)殖水體氨氮含量＜0.2 mg/L、亞硝酸鹽含量＜0.1 mg/L、pH 值為8.4，養(yǎng)殖水溫為25～29℃，每日底缸換水1 次，換水量為全缸的1/3。飼料投喂時間為每日08：00 與16：00，飼料投喂方法為飽食法，每日投喂后稱量剩余飼料質(zhì)量。

1.2 試驗飼料

本試驗以竹青素、綠原酸為飼料添加劑，采用雙因素試驗設(shè)計中的“3×3 因子設(shè)計”，設(shè)計9 種飼料，每個因素各設(shè)3 個水平，分別為竹青素（0.04%、0.06%、0.08%）、綠原酸（0.03%、0.06%、0.09%），依次記為：Diet 1、Diet 2、Diet 3、Diet 4、Diet 5、Diet 6、Diet 7、Diet 8、Diet 9，以不含竹青素和綠原酸的基礎(chǔ)飼料為對照飼料，飼料配方及營養(yǎng)成分分別見表1和表2。

1.3 樣本采集及指標(biāo)測定

1）樣本采集。養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，每個重復(fù)取9尾魚，每3 尾魚血液混成1 個樣本。血樣采集方法為尾靜脈采血，血液在冰浴條件下4 000 r/min 離心15 min，取其上清液，所取樣本于冰箱中-20 ℃冷凍保存。

2）指標(biāo)測定。生長指標(biāo)測定公式如下：

增重率（WGR）=（終末體重-初始體重）/初始體重×100%；

特定生長率（SGR）=100%×（ln 終末體重-ln初始體重）/試驗天數(shù)；

餌料系數(shù)（FCR）=飼料攝入量干重/（終末體重-初始體重）；

蛋白質(zhì)效率（PER）=（終末體重-初始體重）/（飼料攝入量干重×飼料粗蛋白含量）；

肝體指數(shù)（HSI）=肝重/終末體重×100。

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后測定紅白錦鯉血清中甘油三酯（triglyceride,TG）、總膽固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein, LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein, HDL-C）4個指標(biāo)，血清室溫融化后直接進行指標(biāo)測定，指標(biāo)測定嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所研制的試劑盒說明書進行。

△*、△*、△*值測定：養(yǎng)殖初始與養(yǎng)殖終末分別測定紅白錦鯉紅斑處 *、*、*值。

表1 試驗飼料配方 %

表2 試驗飼料營養(yǎng)成分表 %

2 結(jié)果與分析

2.1 對紅白錦鯉生長指標(biāo)及肝體指數(shù)的影響

用添加不同竹青素和綠原酸水平的飼料飼喂紅白錦鯉，養(yǎng)殖56 d 后測定其生長指標(biāo)（表3）。由表3可知，紅白錦鯉增重率、特定生長率均在Diet 4（竹青素和綠原酸添加水平分別為0.06%、0.03%）飼料組達到最高，與Diet 2（竹青素和綠原酸添加水平分別為0.04%、0.06%）飼料組差異不顯著（ ＞0.05），但顯著高于其他飼料組（ ＜0.05）；Diet 4 飼料組餌料系數(shù)顯著降低（ ＜0.05），而該組紅白錦鯉飼料蛋白質(zhì)效率最高，且顯著高于其他飼料組（ ＜0.05）；Diet 9（竹青素和綠原酸添加水平分別為0.08%、0.09%）飼料組紅白錦鯉肝體指數(shù)最低，且顯著低于其他飼料組（ ＜0.05）。

竹青素各添加水平對紅白錦鯉增重率、特定生長率、餌料系數(shù)、蛋白質(zhì)效率、肝體比均有顯著影響（ ＜0.05），最優(yōu)添加水平分別為0.04%、0.04%、0.08%、0.04%、0.08%；綠原酸各添加水平對紅白錦鯉生長指標(biāo)及肝體指數(shù)也有顯著影響（ ＜0.05），最優(yōu)水平均為0.03%；二者的交互作用對紅白錦鯉生長性能及肝體指數(shù)影響顯著（ ＜0.05）。

2.2 對紅白錦鯉血液指標(biāo)的影響

用添加不同竹青素和綠原酸水平的飼料飼喂紅白錦鯉，養(yǎng)殖56 d 后測定其血液指標(biāo)（表4）。由表4可知，Diet 2 飼料組紅白錦鯉血清中TG 含量顯著降低，TG 含量與Diet 8（竹青素和綠原酸添加水平分別為0.08%、0.06%）飼料組差異不顯著（ ＞0.05），但顯著低于其他飼料組（ ＜0.05）；Diet 2 飼料組紅白錦鯉血清中TC 含量顯著降低，TC 含量與Diet 9 飼料組差異不顯著（ ＞0.05），但顯著低于其他飼料組（ ＜0.05）；Diet 9 飼料組紅白錦鯉血清中LDL-C 含量顯著降低，與Diet 2 飼料組差異不顯著，但顯著低于其他飼料組（ ＜0.05）；Diet 2 飼料組紅白錦鯉血清中HDL-C 含量達到最高，且顯著高于其他飼料組（ ＜0.05）。

竹青素各添加水平對紅白錦鯉血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C 均有顯著影響（ ＜0.05），最優(yōu)添加水平分別為0.04%、0.04%、0.08%、0.08%；綠原酸各添加水平對紅白錦鯉血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C均有顯著影響（ ＜0.05），最優(yōu)水平分別為0.06%、0.03%、0.09%、0.06%；二者的交互作用對紅白錦鯉血清指標(biāo)也有顯著影響（ ＜0.05）。

表3 添加竹青素和綠原酸對紅白錦鯉生長指標(biāo)及肝體指數(shù)的影響

2.3 對紅白錦鯉△＊、△＊、△＊值的影響

用添加不同竹青素和綠原酸水平的飼料飼喂紅白錦鯉，在養(yǎng)殖0、56 d 時測定其紅斑處 *、*、*值，計算紅白錦鯉體表 *、*、*值的變化情況（表5）。由表5可知，Diet 4 飼料組紅白錦鯉△*值最大，與Diet 2 飼料組差異不顯著（ ＞0.05），但顯著高于其他飼料組（ ＜0.05）；Diet 1 飼料組紅白錦鯉△*值最大，與Diet 2、Diet 5 飼料組差異不顯著（ ＞0.05），但顯著高于其他飼料組（ ＜0.05）；Diet 2 飼料組紅白錦鯉△*值最大，且顯著高于其他飼料組（ ＜0.05）。

竹青素各添加水平對紅白錦鯉紅斑處△*、△*、△* 值均有顯著影響（ ＜0.05），最優(yōu)水平分別為0.04%、0.04%、0.04%；綠原酸各添加水平對紅白錦鯉紅斑處△*、△*、△* 值均有顯著影響（ ＜0.05），最優(yōu)水平分別為0.03%、0.06%、0.03%；二者的交互作用對紅白錦鯉紅斑處△*、△*、△*值也有顯著影響（ ＜0.05）。

3 討 論

3.1 竹青素和綠原酸對紅白錦鯉生長性能的影響

增重率反映的是一段時間內(nèi)養(yǎng)殖動物的增重量與初體重的關(guān)系，直接體現(xiàn)了養(yǎng)殖動物生長的快慢。肖洋等[5]研究發(fā)現(xiàn)飼料中缺乏綠原酸時，中華鱉增重效率低，添加綠原酸以后，中華鱉增重效率顯著提高，在添加量為200 mg/kg 時，中華鱉增重效率最高。張純等[6]研究了添加不同劑量的綠原酸對建鯉的生長影響，結(jié)果表明添加綠原酸的所有試驗組的建鯉增重率均顯著高于對照組，且添加量為200 mg/kg的試驗組增重效果最為顯著，這與肖洋等[5]研究結(jié)果相同。陳曉安等[7]研究發(fā)現(xiàn)，添加100～400 mg/kg 綠原酸能促進青魚生長。本試驗的研究結(jié)果與以上研究結(jié)論相似，說明飼料中添加適量綠原酸可以促進紅白錦鯉的生長。

餌料系數(shù)是體現(xiàn)動物對于營養(yǎng)物質(zhì)利用能力的一個重要指標(biāo)，由于杜仲等植物中綠原酸含量非常高，關(guān)于杜仲及其提取物對水產(chǎn)動物生長性能的影響的報道也較多。孟曉林等[8]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加0.15%的杜仲純粉可使草魚的增重率顯著提高8.57%，餌料系數(shù)降低0.13，并增加魚體的肥滿度。姚紅梅等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼料中分別添加杜仲提取物1 000 和1 500 mg/kg，能顯著降低奧尼羅非魚的餌料系數(shù)。本試驗研究結(jié)果顯示，在飼料中添加適量綠原酸可有效降低餌料系數(shù)。特定生長率是指生長率和生長時間的比值，體現(xiàn)了養(yǎng)殖動物每天的體重增長情況。呂武興等[10]在日糧中添加2 500 g/t的杜仲提取物（綠原酸8%），發(fā)現(xiàn)肉雞日增重提高了10.65%，飼料利用率提高了6%。本試驗研究結(jié)果顯示，在飼料中添加適量綠原酸可提高養(yǎng)殖動物特定生長率。蛋白質(zhì)效率是體現(xiàn)魚體對飼料蛋白吸收的直接因素，之間體現(xiàn)了魚體對飼料蛋白質(zhì)的利用情況。尚曉迪等[11]研究表明，水產(chǎn)飼料中添加綠原酸能促進水產(chǎn)動物的生長性能，動物體內(nèi)自由基會損壞細胞、破壞細胞膜的完整性，綠原酸具有超強的清除自由基的能力，提高動物對于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用。肝體指數(shù)表示肝重與體重之比，肝胰臟的生長發(fā)育能影響飼料中蛋白質(zhì)的消化與吸收，從而影響動物的生長發(fā)育。肖洋[5]研究發(fā)現(xiàn)，綠原酸對中華鱉肝臟重量及肝臟指數(shù)無顯著影響；而寧康健等[12]研究發(fā)現(xiàn)，在草魚幼魚飼料中添加0.08%綠原酸，試驗結(jié)束時草魚體重和肝體比顯著增加，與本試驗結(jié)果不相同，推測與試驗條件、試驗對象等不同有關(guān)。目前，關(guān)于竹青素對于動物生長性能影響的報道并不常見，本試驗結(jié)果表明，竹青素不同添加水平對于紅白錦鯉生長性能均有顯著影響。

表4 飼料不同竹青素、綠原酸水平對紅白錦鯉血液指標(biāo)的影響mmoL/L

3.2 竹青素和綠原酸對紅白錦鯉血液指標(biāo)的影響

血液指標(biāo)包括TG、TC、LDL-C、HDL-C 等。本試驗結(jié)果表明，飼料中綠原酸添加量為600 mg/kg 時紅白錦鯉血液指標(biāo)的影響效果最明顯，Sotillo 等[13]通過給小鼠靜脈注射綠原酸，發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟和血漿中的TG 含量下降；張?zhí)m壽等[14]發(fā)現(xiàn)灌喂20 mg/mL的綠原酸可顯著降低小鼠肝胰臟、骨骼肌TG 水平；Frank 等[15]研究證明，在大鼠飼料中加入綠原酸后，降低了其肝臟膽TC 的含量；陳東輝等[16]報道了金銀花提取物（有效成分為綠原酸）能有效降低血清和肝的TC 含量；楊天俊[17]研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加400 mg/kg 的綠原酸之后，血清中TC 含量顯著降低而HDL-C 含量顯著升高，肝胰臟中TG、TC、LDL-C含量顯著降低而HDL-C 含量顯著升高。以上研究結(jié)果與本試驗結(jié)果不相同，分析原因可能與養(yǎng)殖對象、飼料配方、養(yǎng)殖條件等不同有關(guān)。沈健等[18]以成年SD 大鼠為研究對象，采用高脂飼料建立高血脂模型，研究發(fā)現(xiàn)竹青素能顯著降低SD 大鼠血液中TG、TC、LDL-C 的含量，中劑量和高劑量組能顯著提高HDL-C 的含量。黃駱鐮等[19]研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加竹青素能顯著降低肉雞血清中TG 含量同時提高HDL-C 含量。以上研究結(jié)果與本試驗結(jié)果一致，表明竹青素可以調(diào)節(jié)血液指標(biāo)。

表5 飼料不同竹青素、綠原酸水平對紅白錦鯉體色的影響

3.3 竹青素和綠原酸對紅白錦鯉體色變化的影響

研究表明，竹青素、綠原酸有抗病毒、促生長、提高免疫力等功能，在鯉[3]、中華絨螯蟹[20]、青魚[7]、大黃魚[21]上都有相關(guān)研究，但在改善水產(chǎn)動物體色方面鮮見報道。本試驗通過改變綠原酸和竹青素的搭配比例，研究其對紅白錦鯉體色的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，竹青素、綠原酸的添加量分別為0.04%、0.03%或0.04%、0.06%的飼料對紅白錦鯉體色的促進作用最強。

竹青素和綠原酸的添加量分別為0.04%、0.06%時紅白錦鯉生長速度較快且體色得到顯著提升；在該處理組，紅白錦鯉血液指標(biāo)達到最佳，TG、TC、LDL-C 的含量均顯著降低，HDL-C 的含量顯著升高。綜上所述，在本試驗條件下，紅白錦鯉飼料中竹青素和綠原酸最適添加量分別為0.04%、0.06%。